pEGFP-C1-HSP27真核表达载体的构建及其稳定转染人胰腺癌SW1990细胞株的筛选

张松 陈敏 黄淑玲 许春红 李建琦 王军 邹晓平

·论著·

pEGFP-C1-HSP27真核表达载体的构建及其稳定转染人胰腺癌SW1990细胞株的筛选

张松 陈敏 黄淑玲 许春红 李建琦 王军 邹晓平

目的构建表达热休克蛋白27(HSP27)的携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核载体，建立稳定表达HSP72的人胰腺癌SW1990细胞株。方法采用RT-PCR法从SW1990细胞中扩增出带有BamH I 、HindⅢ酶切位点的HSP27基因片段，插入真核表达载体pEGFP-C1，鉴定正确后用重组质粒转染SW1990细胞，并筛选稳转细胞株。荧光显微镜观察HSP72的定位，RT-PCR、蛋白质印迹法检测转染细胞HSP27的表达。结果双酶切法鉴定和测序证实重组载体pEGFP-C1-HSP27的DNA序列完全正确，并成功转染SW1990细胞，筛选获得稳转细胞株。荧光显微镜见EGFP主要分布在胞质中，转染细胞的HSP27mRNA表达明显增加(1.458±0.160比0.897±0.051，P<0.05),且表达HSP27与EGFP的融合蛋白。结论成功构建真核表达载体pEGFP-C1-HSP27，并筛选获得稳转的细胞株。

胰腺肿瘤； 热休克蛋白类； 转染； SW1990细胞株； 基因携带体

以吉西他滨作为核心药物的化疗已成为胰腺癌治疗的重要策略并可使患者受益[1-2]，但胰腺癌化疗耐药已经成为当前亟待解决的难题。热休克蛋白27(heat shock protein 27，HSP27)，又名热休克蛋白B1(heat shock protein B1，HSPB1)，是热休克蛋白家族中的小分子热休克蛋白亚家族的重要一员。目前，已有研究证实HSP27在食管、胃、肝、胰腺、结肠、乳腺、前列腺、卵巢、膀胱等多种癌细胞中异常高表达[3-5]。同时，多项研究证实在胃癌、直肠癌、肝癌及前列腺癌等肿瘤中HSP27的高表达与肿瘤转移、不良预后等相关[6-9]。进一步研究表明，HSP27在胃癌、胰腺癌、肝癌、结肠癌等耐药细胞株中表达较敏感细胞株明显升高[10-13]，而HSP27与胰腺癌吉西他滨化疗耐药等相关性及其机制研究鲜有报道。……