不同产地白芥子和黄芥子中芥子碱硫氰酸盐的含量比较

王海波

(河南省食品药品检验所，河南 郑州450003)

芥子为常用中药，始载于梁代《名医别录》，以后历代本草中均有记载，自1953 年以来被我国历版药典收载。2010 版《中国药典》在芥子项下同时收载了2 个药材基源，即十字花科植物白芥Sinapis albaL.或黄芥Brassica juncea(L.)Czern. et Coss.的干燥成熟种子，前者习称白芥子，后者习称黄芥子［1］。两种芥子的临床功效基本一致，但白芥子的祛痰平喘作用强于黄芥子，黄芥子的毒性大于白芥子，因此白芥子的市场需求量较大。由于两者的外观性状相似，有不法商家把黄芥子用硫黄熏烤，冒充白芥子销售，严重影响了临床用药的安全有效性。芥子中含有大量的芥子碱类成分。芥子碱类成分为一类季铵盐生物碱，广泛存在于十字花科植物中，代表性分是芥子碱。芥子碱多以硫氰酸盐形式存在，具有抗辐射、抗氧化、抗衰老、抗雄激素、降血压等多种生物活性［2-3］。芥子碱的含量测定方法多为高效液相色谱法［4］，此外还见有毛细管电泳法［5］和紫外分光光度法［6］的报道。本文以芥子中的主要有效成分芥子碱硫氰酸盐作为指标成分，以高效液相色谱法测定不同产地的白芥子和黄芥子中芥子碱硫氰酸盐的含量，并比较白芥子和黄芥子中芥子碱硫氰酸盐的含量差异，以控制药材质量。此方法操作简便，重现性好，分析快速准确。

1 药品、试剂与仪器

白芥子和黄芥子购于内蒙古和河北两地。芥子碱硫氰酸盐对照品(批号111721-200501，供含量测定用)，购自中国药品生物制品检定所;乙腈，色谱纯，德国MERCK 公司产品;水为超纯水，临用新制;其余试剂均为分析纯。Waters 2695 液相色谱仪，四元泵，在线脱气器，二极管阵列检测器，Empower 色谱工作站，美国沃特世科技有限公司产品;XR-205SM-DR 电子分析天平，瑞士Precisa 公司产品;KQ-300 型超声波提取器，40 kHz，300 W，昆山市超声仪器有限公司产品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱为Phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，流动相为乙腈－0.08 moL/L 磷酸二氢钾(10 ∶90，体积比)，流速1. 0 mL/min，柱温30 ℃，检测波长326 nm，进样量10 μL，理论塔板数按芥子碱硫氰酸盐峰计算应不低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备

取芥子碱硫氰酸盐对照品适量，精密称定，用流动相溶解并制成每mL 中含0.2 mg 的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品细粉约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇50 mL，超声处理20 min(功率250 W，频率20 kHz)，滤过。滤渣再用甲醇同法提取3 次，滤液合并，减压回收溶剂至干，残渣加流动相溶解并转移至50 mL 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 检测波长考察

对芥子碱硫氰酸盐对照品和芥子药材供试品中芥子碱硫氰酸盐色谱峰进行紫外吸收光谱扫描，结果均在326 nm 处有最大吸收，且对照品和供试品色谱中芥子碱硫氰酸盐色谱峰的紫外吸收光谱基本一致，峰纯度较好。见图1。

图1 对照品与供试品的色谱图、光谱图

2.4.2 线性关系的考察

取不同浓度芥子碱硫氰酸盐对照品溶液，浓度分别为0. 205 20，0. 145 00，0. 102 60，0. 051 30，0.020 52 g/L，精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定。以进样量(μg)为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果:芥子碱硫氰酸盐在0.205 2～2.052 0 μg 间线性良好，回归方程Y=1.977 ×106X－2 726(r=0.999 96)。见表1。

表1 芥子碱硫氰酸盐线性关系考察

2.4.3 精密度试验

取同一对照品溶液，连续进样6 次，以芥子碱硫氰酸盐峰面积计算，RSD=0.30%。见表2。

表2 精密度试验结果

2.4.4 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，12 h 进样，测定峰面积，以芥子碱硫氰酸盐峰面积计算，RSD=0.21%。结果表明供试品溶液在12 h 内基本稳定，见表3。

表3 稳定性试验结果

2.4.5 重复性试验

取同一批次样品制备6 份供试品，测定芥子碱硫氰酸盐平均质量分数为0.733%，RSD=2.00%，表明重复性良好。见表4。

表4 重复性试验结果

2.4.6 加样回收率试验

取已知样品(芥子碱硫氰酸盐的质量浓度为6.99 mg/g)6 份，每份0.5 g，精密加入芥子碱硫氰酸盐对照品的甲醇溶液(76.48 mg/L)50 mL，按照2.3 项下方法操作，制备加样供试品溶液，测定芥子碱硫氰酸盐的含量，计算回收率，结果见表5。

表5 加样回收率试验结果

2.4.7 样品测定

将收集的不同来源的白芥子和黄芥子样品按2.3 项下的方法制成供试品溶液，取供试品溶液及2.2 项下对照品溶液各10 μL，进样测定，结果见表6。

表6 样品测定结果

3 讨 论

3.1 供试品溶液的制备方法

在实验中，选择比较了水浴加热回流和超声提取两种提取方法，结果测得的芥子碱硫氰酸盐含量无明显差别。因为超声提取使用方便，可操作性强，所以选用超声提取作为提取方法。

3.2 流动相的选择

原2005 版《中国药典》一部中采用梯度洗脱法测定芥子中芥子碱硫氰酸盐含量，试验表明对照品保留时间过短，分离度较差。笔者结合参考文献，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈－0.08 moL/L磷酸二氢钾(10∶90，体积比)为流动相，以芥子中的主要有效成分芥子碱硫氰酸盐作为指标成分，建立了高效液相色谱法测定本品中芥子碱硫氰酸盐的含量，以控制药材及饮片质量。此方法操作简便，重现性好，分析快速准确。

3.3 白芥子和黄芥子中芥子碱硫氰酸盐的含量

由样品测定结果可知，芥子中芥子碱硫氰酸盐的含量均符合2010 版《中国药典》一部芥子碱硫氰酸盐质量分数不得低于0.50%的限度规定，且不同产地的白芥子含量差异较大。目前由于条件所限，收集到的白芥子和黄芥子样品较少，尚不能根据实验结果判断两种的芥子碱硫氰酸盐含量有无显著性差异。在今后的研究中，可继续积累实验数据，比较白芥子和黄芥子的芥子碱硫氰酸盐的含量规律。

［1］国家药典委员会. 中华人民共和国药典:一部［M］. 北京:中国医药科技出版社，2010:149.

［2］欧敏锐，吴国欣，林跃鑫.中药白芥子研究概述［J］.海峡药学，2001，13(2):1－3.

［3］冯宝民，余正江，李帆，等.白芥子化学成分的研究［J］.大连大学学报，2004，25(6):43－45.

［4］刘丽芳，王宇新，刘雪芳，等.HPLC 法测定白芥子药材中芥子碱硫氰酸盐的含量［J］. 中国野生植物资源，2001，20(5):49－50.

［5］苑艳霞，王惠国，刘燕妮，等. 毛细管电泳法测定白芥子中芥子碱的含量［J］. 沈阳药科大学学报，2011，28(5):384－386.

［6］杨雪萍，王惠国，冯保民，等. 芥子中总芥子碱类成分的含量测定［J］.大连大学学报，2009，30(6):53－55.