肠道急性移植物抗宿主病黏膜通透性与肠黏膜病理改变的相关性研究

蔡芳芳 庄 强 朱融和 梁 彬 俞 康 江松福

消化道是急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease，aGVHD)的重要靶器官，也是重要的aGVHD放大系统［1］。如何早期评估肠道功能屏障，早期阻断这一始动环节，减少aGVHD的发生显得至关重要。目前临床上仍缺乏安全有效的检测手段。本研究采用小鼠异基因骨髓移植模型，研究aGVHD肠道通透性及其严重程度的关系，旨在为早期肠道aGVHD提供较敏感的检测指标。

材料与方法

1.aGVHD小鼠实验模型［2］:SPF级雌性 BALB/C(H-2d)小鼠，6～8周龄，体重18～22g。实验动物均购自温州医学院，许可证号:SYXK(浙)2005-0061。随机分为单纯照射组(对照组)和aGVHD移植后第7、11和15天组，每组8只。TBI组接受直线加速器全身照射(总剂量:8.0Gy，照射距离:50cm，照射时间:8min，剂量率:1.0Gy/min)。对照组只接受TBI照射，与实验组同步喂养。

2.仪器:直线加速器(VARIAN CL2300C/D，美国);美国Agilent 1100高效液相色谱系统;美国 Agilent INTERFACE 35900E信号转换器;法国SEDERE SEDEX75蒸发光散色检测器;NH2色谱柱(Agilent，美国);7500 Real Time PCR System(ABI公司，美国);台式高速离心机 (BECKMAN公司，美国)。

3.试剂:乳果糖标准品和甘露醇标准品(色谱纯，Sigma公司);乙腈(色谱纯，Fisher Scientific公司);异丙醇(色谱纯，天津四友试剂公司);甲醇(分析纯，天津四友试剂公司);超纯水(Millipore公司，法国)。

4.给药方法及尿样采集:受试前所有小鼠禁食8～12h，取0.5ml乳果糖/甘露醇混合液(含乳果糖60mg/ml，甘露醇40mg/ml)，用灌胃器插小鼠食管上端缓慢灌注。收集6h尿液，记总量，将尿样置于-20℃保存，待尿样收齐后检测。分别采集对照组小鼠和aGVHD后第7、11和15天小鼠的6h尿液。

5.尿样预处理:取冰冻贮存的尿液样品解冻、摇匀，将尿样离心(12000r/min)30min，以去除尿中的沉淀物。再经0.22μm滤膜去蛋白颗粒。用超声波脱气20min后上机分析待检。……