RNA干扰技术在肿瘤基因治疗中的研究现状＊

田瑞敏，鄢佳程，王含彦，易 芳，陈建业△

（川北医学院：1.应用技术研究所；2.生物化学教研室，四川南充637000）

RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术是利用双链RNA（double－stranded RNA，dsRNA），高效、特异性降解细胞内同源信使RNA（messenger RNA，mRNA），从而阻断特定基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。1998年Fire等［1］首次应用RNAi技术将dsRNA正义链与反义链的混合物注入线虫体内，结果发现注入dsRNA比单独注入单链RNA引起的基因沉默要强得多，并可导致子一代同源基因的沉默。2001年Elbashir等［2］在哺乳动物细胞中首次观测到了RNAi现象，从而开启了RNAi技术在哺乳动物细胞中应用研究的闸门，使RNAi技术迅速成为后基因组时代基因功能研究和基因治疗研究领域最热门的研究工具之一，进而得到广泛应用。迄今为止，RNAi的确切机制尚不清楚。经过10多年的研究，一些细节逐渐展现在人们面前。本文就现阶段RNAi已知的可能机制及RNAi技术在肿瘤基因治疗中的研究现状作一综述。

1 RNAi的作用机制

有关RNAi现象的机制研究主要集中在线虫、果蝇等低等动物，许多研究初步阐明了RNAi抑制mRNA转录与翻译的分子机制［3－6］：在RNAi引起基因沉默的过程中，细胞内具有核糖核酸酶Ⅲ（ribonucleaseⅢ，RnaseⅢ）活性的核酸酶Dicer首先识别外源性或内源性dsRNA，将其切割成21～23nt大小的siRNA（small interfering RNA，siRNA）；随后siRNA与无活性的RNA诱导沉默复合物（RNA－induced silencing complex，RISC）结合，在解螺旋酶的作用下siRNA双链解开为单链；由于siRNA与mRNA具有高度同源性，其反义链通过与靶基因mRNA进行特异性结合使RISC活化，最后将靶基因mRNA剪切成碎片。同时，siRNA还可作为合成dsRNA的引物，引物siRNA与靶基因mRNA模板结合后，在RNA依赖性RNA聚合酶的催化下，合成新的dsRNA，后者被Dicer剪切成新的siRNA，从而产生级联放大效应，增强靶基因的沉默效应［4］。……