耐亚胺培南鲍曼不动杆菌苯唑西林基因型分析

雷 红，董 梅，刘 敏，孙敏霞，孟祥红，佟爱华，刘 昕

解放军第309医院 检验科，北京 100091

碳青霉烯酶是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的重要机制之一。鲍曼不动杆菌产生的碳青霉烯酶主要包括两大类酶，即D类苯唑西林(oxacillin，OXA)酶和B类金属β-内酰胺酶[1-2]。其中OXA型碳青霉烯酶是引起世界范围内鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的最重要原因[3]。OXA型碳青霉烯酶是能水解苯唑西林的β-内酰胺酶，属于Ambler分子分类中的D类酶，该类酶可以水解青霉素类、头孢菌素、碳青霉烯类和氨曲南等抗菌药物，导致产酶细菌对这些抗菌药物耐药[4]。本文研究耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶基因型，对临床合理应用抗菌药物和医院感染监控提供科学依据。

材料和方法

1 菌株来源 收集解放军第309医院2010年4-12月住院患者的非重复耐亚胺培南鲍曼不动杆菌68株，分离菌株均使用甘油肉汤菌种保留管-20℃保存备用。

2 主要仪器和试剂 PCR扩增仪(Bio-Rad)，电泳仪(北京六一仪器厂)，LB肉汤，琼脂糖(Biowest，西班牙)，ExTaq DNA聚合酶等。

3 多重PCR引物 所用PCR引物均由生物工程(上海)有限公司合成，各引物序列见表1。多重PCR扩增体系及程序见表2。

多重PCR反应条件：94℃预变性5 min，94℃变性 25 s，52℃退火 40 s，72℃延伸 50 s，30 个循环；72℃再延伸6 min。同时以无菌水为阴性对照。

4 DNA模板制备 挑取单个菌落转接至LB肉汤中，37℃恒温振荡培养8 h。取2.0 ml菌液，采用加热煮沸方法制备DNA模板。制备好的模板置于-20℃冻存。

5 PCR产物测序及序列比对 将OXA-23和唯一1株OXA-58阳性菌株，采用PCR检测，扩增产物由北京六合华大基因科技股份有限公司进行双向测序，并采用DNASTAR软件把测序结果与Genbank进行比对。……