妊娠合并肾衰竭患者血清TNF-α、AngⅡ表达研究

赵芳 刘昱池 王宏丽 杜鹃

吉林大学二院(刘昱池);长春医学高等专科学校(王宏丽);长春市中心医院(杜鹃)

妊娠合并急性肾衰竭是一种严重并发症，妊娠合并急性肾衰竭透析的患者有较高的心血管并发症，而透析妊娠合并急性肾衰竭时，患者发展到伴有心血管并发症有其特有的机制，此机制与单纯的心血管患者的发病机制有相似之处，又有很大不同[1-3]。在单纯的心血管患者中，认为吸烟、肥胖、高血脂、糖尿病是心血管病发生的重要危险因素，而妊高征患者在透析中微炎症状态、营养不良、钙磷代谢紊乱、甲状旁腺功能亢进与心血管并发症有关。目前认为传统的危险因素不是不起作用，而是当传统因素还没起作用前，透析患者特有的这些因素可能已导致妊娠合并急性肾衰竭患者的死亡危险。

1 研究对象及分组

1.1 健康组(对照组) 选择门诊健康体检者10例。

1.2 妊娠合并肾衰竭组(实验组) 9例，选择2010年9月至2012年11月我院门诊规律血液透析患者，透析时间2年以上。

1.3 健康对照组与妊娠合并肾衰竭组间性别、年龄无差异。透析患者组选择体重指数(BMI)偏小，血白蛋白偏低，C反应蛋白(CRP)偏高的患者。排除急性感染和慢性传染病患者，每周透析4次。

2 研究方法

2.1 记录患者的性别，年龄，吸烟史，伴发糖尿病及心血管病史。血压，血常规，肾功能，CRP，高密度脂蛋白(HDL-C)，低密度脂蛋白(LDL-C)，空腹血糖(FPG)。

2.2 留取标本采用非平衡法，取聚苯乙烯试管编号，按下表操作(表1)。

表1 TNF-α RIA加液程序(μl)

充分混匀，室温放置20 min，3000 rpm离心25 min，吸弃上清液，在GAMMA计数器上测定cpm数。

2.3 由自动GAMMA计数器预先编制程序，直接给出结果。

2.4 批内变异系数＜7.0%，批间变异系数＜12.0%。

2.5 取培养的上清液，3000转离心10 min去除颗粒和聚合物。用ELISA方法测定AngⅡ。最低检测浓度＜1.0 pg/ml。

2.5.1 绘制标准曲线 在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

2.5.2 板内、板间变异系数均＜15%。

3 结果

表1 各组患者血清单个核白细胞AngⅡ和TNF-α表达比较

4 讨论

妊娠合并肾衰竭患者有较高的心血管病的发病危险，本研究结果表明，妊娠合并肾衰竭伴发冠心病的患者，糖尿病和高血压的发病率也明显增加，且血糖控制不好，患者都存在不同程度的贫血，导致机体长期处于乏氧状态，加重了冠心病的症状，本研究中血液透析患者的贫血程度没有统计学意义，分析与促红细胞生成素的治疗有关。此外，妊娠合并肾衰患者呈现持续慢性炎症反应状态，称为微炎症状态。与下列因素有关:①血液透析的影响:首先，透析过程中补体成分活化，促进促炎症细胞因子活化;其次，透析液中的内毒素或细菌碎片等进入血液循环，刺激炎症介质的表达与释放;最后，生物膜的不相容性刺激血液细胞活化及表达促炎症细胞因子。②感染:患者存在不同程度的细胞免疫和体液免疫的缺陷，机体抗感染能力降低。③尿毒症本身的相关因素:尿毒症患者肠道黏膜屏障作用受损，导致内毒素经肠道进入体内;慢性肾衰患者晚期糖基化终产物和氧化蛋白产物水平显著升高，它们作用于炎症细胞，促进炎症因子释放。

AngⅡ主要在内皮细胞及肺巨噬细胞产生，脂肪组织也可以产生，AngⅡ传统作用是血管活性物质，调节血流动力学作用。Joachim jankowski等取正常人外周血单个核白细胞，用10 mg/l LPS刺激2 h后用色谱法和质谱法鉴定了上清液中AngⅡ存在，同时用放免法检测，两者具有良好的相关性，他们得到的数据是活化后每106个白细胞每分钟可以在上清液中产生9.9±6.6fmol AngⅡ。同时，他们也证明了，外周血单个核细胞中有所有的AngⅡ前体物质，并且具有生物学功能[4]。本研究观察到，妊娠合并肾衰竭合并冠心病患者外周血单个核白细胞分泌的AngII明显高于不伴有冠心病的患者。现认为AngⅡ与炎症密切相关，AngⅡ可以扩大氧化应激，增加内皮细胞细胞因子的分泌及白细胞黏附等。da Cunha等给载脂蛋白E缺乏大鼠皮下注射AngⅡ，4周后用免疫组化和RT-PCR方法检查大鼠大动脉壁发现E-selectin、ICAM-1、VCAM-1、MCP-l、M-CSF 及其基因表达增多，颈动脉粥样斑块的相对面积增加6倍。体外实验也证明，AngⅡ作用于单核细胞可以使其黏附分子表达增加，MCP-l产生增多，其细胞内过程涉及到NB-κB、AP-1、过氧化物酶体增殖激活受体及细胞内氧化应激系统。这些充分支持了本研究结果。AngⅡ在炎症和动脉硬化中的作用已得到确认，因此AngⅡ也可能在妊娠合并肾衰竭透析患者的炎症、动脉粥样硬化中起到重要作用。

妊娠合并肾衰竭血液透析患者血清单个核白细胞TNF-α、AngⅡ表达增加，与动脉粥样硬化及心血管并发症相关。

[1]Zhang JB，Hua G，Zhang X，et al.Regulateory T cells/T-helper cell 17 functionalimbalance in uraemic patients on maintenance haemodialysis:A pivotal link between microinflammation and adverse cardiovascular events.Nephrology，2010，15(1):33-41.

[2]Benwell RK，Lee DR.Essential and synergistic roles of IL-1 and IL-6 in human Th17 differentiation directed by TLR legend-activated dendritic cells.Clin Immunol，2010，134(2):178-187.

[3]孙惠力，甘华.单核细胞对血液透析患者免疫功能影响的分子机制.中华实用医学，2003，5(10):76-78.

[4]Jankowski，Vera/V，Vanholder，Raymond/R;van der Giet，Markus/M，et al.Detection of angiotensin II in supernatants of stimulated mononuclear leukocytes by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight/time-of-flight mass analysis.Hypertension，2005，46(3):591-597.