HPLC法测定劳木布阿瓦中甘草苷含量

鲁瑞芹

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-10ATvp泵，SCL-10 Avp型系统控制器，SPD-10Avp型检测器，CLASS-VP色谱工作站。岛津 μ V-1700型紫外-可见分光光度计，德国 Satori μ s BP211 d型电子天平[2]。

1.2 试药 甘草苷对照品(批号:111610-200503);中国药品生物制品检定所;甲醇、乙醇、乙腈为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯。原药材由乌兰察布市中心医院提供，由乌兰察布市药检所中药室模拟处方。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 流动相:乙腈-0.5%冰乙酸(19∶81)。柱温30℃。流速:1.0 ml/min。进样量:10 μl。检测波长276nm。理论板数按甘草苷峰计不得低于4000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取甘草苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液。即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇20 ml，密塞，称定重量，超声处理(功率500W，频率50 kHz)30 min，取出，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5 ml，置 50 ml量瓶中，用 20%乙腈稀释至刻度，摇匀，即得[3]。

2.4 阴性对照溶液的制备 取按处方比例制备的缺甘草的阴性对照样品，按供试品溶液的制备法制成阴性对照溶液。

2.5 系统适应性试验 分别吸取对照品溶液、供试品溶液 、阴性对照溶液各10 μl，注入色谱仪，同法测定，结果在峰相应的位置上，阴性对照无干扰[4]，结果见图 1，2，3

图1 甘草苷高效液相色谱

图2 样品高效液相色谱图

2.6 线性关系 取浓度为73.4 μg/ml的对照品溶液，精密吸取 0.5、1、2、3、4、5 ml溶液分别置 5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，各取10 μl进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对进样量进行回归分析[5]，得回归方程:Y=2.658640X-381.25

r=0.9999，表明甘草苷在0.0734 μg～0.7340 μg 范围内呈良好的线性关系。

图3 阴性高效液相色谱图

2.7 精密度 取同一模拟样品供试品6份，各约1 g，精密称定，分别按含量测定项下方法操作，测定每份供试品含量，RSD为0.85%，表明精密度良好。

2.8 重现性试验 取模拟样品，精密称定5份，按‘2.3'项下方法测定甘草苷的含量，平均为 3.243 mg/g，RSD为0.72%，表明本方法重复性良好。

2.9 稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h进样测定甘草苷峰面积，RSD为0.49%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.10 加样回收试验 取供试品(模拟样品，含量3.215 mg/g)9份，各约0.3 g，精密称定，在其中3份中各精密加入用甲醇配制的甘草苷对照品溶液(浓度为0.40 mg/ml)1 ml(约相当于供试品含有量的50%)、另3份中各精密加入上述对照品溶液2 ml(约相当于供试品含有量的100%)、其余3份中各精密加入上述对照品溶液3 ml(约相当于供试品含有量的150%)分别按含量测定项下的方法操作，测定每份供试品含量[6]，计算回收率，结果平均回收率为99.65%。见表1。

表1 甘草苷加样回收试验结果

2.11 样品含量测定 分别吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μl，注入色谱仪，测定6份样品的含量，结果分别 3.221、3.219、3.250 、3.285 、3.256 、3.230 mg/g。

3 讨论

甘草中的甘草苷含量测定方法采用反相色谱法结果准确易行，重现性好。

[1]国家药典委员会.一部.中国药典，2005.

[2]李翠，徐必学，张永萍，梁光义.甘草中甘草苷的含量测定方法研究.时珍国医国药，2009，(03).

[3]刘育辰.甘草质量评价多指标检测方法的建立及其在不同来源甘草药材鉴别上的应用.北京中医药大学，2011.

[4]HPLC法测定养血愈风酒中人参皂苷Rg1的含量.2003全国苗医药学术研讨会特辑，2003.

[5]段天璇，马长华，王文全，阎永红，魏胜利，李梢.HPLC-MS法鉴定甘草的指纹图谱.中国药师，2009，(04).

[6]伍蔚萍，阎宏涛，孙文基.HPLC法测定甘草中甘草苷的含量.药物分析杂志，2004，(04).