三种不同检验方法用于阴道细菌检验的比较分析

欧志方

资兴市第一人民医院，湖南郴州 423400

阴道炎是妇科常见疾病之一，由于阴道收到细菌的感染，引发的阴道炎疾病，甚至还可能形成异位妊娠或不孕、急慢性盆腔炎等严重的感染病[1]。该文采用三种不同的方法，对2012年1月—2012年6月在该院治疗的99例阴道疾病患者进行阴道细菌检验，通过对比三种检验方法的检验结果，从中寻找出简便实用、精确度高的检验方法，保证阴道疾病就诊的准确性。希望对阴道疾病的研究起到一定的借鉴作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

99例阴道疾病患者的年龄在23～47岁之间，平均年龄为26岁。99例患者均有不同程度的阴道炎及阴道瘙痒等症状，患者阴道存在大量的白带分泌物。

1.2 材料与仪器

革兰氏染色试剂盒由上海宝曼生物科技有限公司生产，革兰染色检验法采用奥林巴斯CX41 临床用显微镜，培养基由上海科兴生物科技有限公司生产，引物均由上海生物工程公司生产，标准菌株由中国药品生物制品检定所提供。

1.3 检验方法

患者取截石位，让无菌阴道镜露出宫颈后，在阴道后面的穹窿处用无菌棉签沾取患者阴道里面的分泌物，把分泌物摄取后，放进盛有无菌生理盐水的试管里。

1.3.1 细菌培养法 取出无菌生理盐水中的阴道分泌物后，在无菌的条件下采用无菌接种环接种到专用细菌分离的培养基上，然后把它放到二氧化碳培养箱里面，在35℃的条件下进行孵育，48 h后，可以选取其中呈现半透明、灰色、光滑的水滴形状的菌落，按照生化标准进行生化检验。

1.3.2 PCR检测法 摄取500 μl 的阴道分泌物放入生理盐水中，12 000 r/min 离心10 min，去除上清夜后，再加入具有碱性的裂解液，在98 ℃的条件下对其进行加热，10 min后，12000 r/min离心5 min，就可取出一些上清夜来制作临床DNA 模板了。在进行PCR检验细菌的阴性和阳性比较的时候，我们必须在制作阴道分泌物DNA 模板的时候，运用同样的PCR 试剂，把没有添加的DNA 的作为1个阴性组，把添加有DNA 模板的PCR 扩增作为阳性组。阴性组与阳性组进行对比分析。检查PCR 产物及扩增的时候，取出25 μl 总体积的无菌离子水、模板、引物及缓冲液等，然后采用无菌的石蜡油30 ul 铺盖在上面，即可进入PCR 循环环节。PCR 循环总共有32 环，PCR 循环的标准参数是：58℃下1 min，72 ℃下1 min，94 ℃下1 min，95 ℃下5 min，要经过32个循环，最后一环要在72 ℃下延伸5 min。[2-3]

1.3.3 革兰染色法 选用无破损的清洁玻片，在95%乙醇浸泡后取出，擦拭并晾干。摄取无菌生理盐水中的阴道分泌物涂布于玻片，把涂片置于奥林巴斯CX41型号的显微镜下进行检验。

1.4 统计方法

检验的数据运用SPSS 14.0 计算机统计软件进行处理，计数资料运用χ2检验。

2 结果

99例患者中，细菌培养法检验出细菌感染者77例，检出率为77.8%，其中加特纳菌58例，肠球菌9例，棒状杆菌10例。PCR检测法检出细菌感染者72例，检出率为72.7%，其中加特纳菌55例，肠球菌8例，棒状杆菌9例。革兰染色法检出细菌感染者36例，检出率为36.3%。PCR检验法与细菌培养法的检验结果比较，差异无统计学意义（P>0.05）。细菌培养法与革兰染色法检出率相比，差异有统计学意义（P＜0.01）。PCR检验法与革兰染色法检出率相比，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表1、表2、表3。

由表3我们可以了解，PCR检测法与革兰染色检验法阳性检出率效果对比。PCR检测法检测出57例阴道细菌阳性者，它的检出率为77.6%。革兰染色检验法检测出73例阴道细菌阳性者，它的检出率为90.6%。两者相比差异有统计学意义 （χ2=12.43，P<0.01）。见表3。

表1 细菌培养法与PCR检验法检验结果对比[n（%）]

表2 革兰染色检验法与细菌培养法检验结果对比[n（%）]

表3 革兰染色检验法与PCR检验法阳性检出率对比结果[n（%）]

3 讨论

阴道细菌感染疾病的主要病发原理主要是阴道内的上皮细胞受到阴道内环境的影响，表面的糖原被病菌侵蚀，导致阴道内的杆菌发生酸碱性变化，阴道杆菌数量减少，病菌增加，引起阴道炎的发生[4]。阴道细菌检验方法是医务人员诊断阴道疾病的重要手段，检验的精确度会影响到阴道疾病的诊断，从而影响到临床的治疗效果。

该研究采用了3种不同的检验方法用于阴道细菌检验的效果进行了对比分析，结果显示，细菌培养法的检出率为77.8%，PCR检验法的检出率为72.7%，革兰染色法的检出率为36.3%，细菌培养法与PCR检测法的检出率均较高，与革兰染色法相比，差异有统计学意义（P＜0.01）。说明细菌培养法与PCR检测法在阴道细菌的检验中具有一定的优势。

革兰染色法因其简单易行，一值被临床中广泛应用。在阴道细菌检验中，曾被多数学者人为其是首选方法[5]。不过由于多种因素的存在，革兰染色法检验过程中也存在很大的误差，产生误差常见原因是染色过程中脱色不当。如脱色过度，会导致革兰阳性细菌在显微镜下被观察为革兰阴性菌；如脱色不足，则会使检验者把革兰阴性菌误诊为革兰阳性菌。革兰染色法与细菌培养法、PCR检测法的检验结果对照显示，二者的检出率差异有统计学意义（P＜0.01），也可以说明革兰染色法在阴道细菌的检验中存在一定的误差。

细菌培养虽一直被认为是临床诊断细菌感染的金标准，不过其检验过程复杂、费力，特别是很难在基层医院开展[6]。PCR检测法融合PCR 的敏感性、DNA 杂交的特异性和光谱技术精确定量等各种优点于检测中，与细菌培养法比较，差异无统计学意义意义（P＞0.05），由于PCR检验法检验细菌的敏感性及特异性高，且操作过程相当简便及快捷，可满足当今临床诊断的需要，值得在临床上推广。

[1]姚兰，冯丽华.细菌性阴道病的研究进展[J].中国实验诊断学，2009，13(12):281-283.

[2]韩风，赵欣.细菌性阴道病实验室诊断方法探讨和临床应用[J].中国医药指南，2009，29(24):83-85.

[3]史跃杰.99例阴道细菌的检验方法比较分析[J].现代预防医学，2011，38(14):2815-2817.

[4]严冬霞，樊尚荣.复发性细菌性阴道病的发病机制和治疗[J].实用妇产科杂志，2010，26（2）：85-87.

[5]刘瑾，徐志学.革兰染色的结果分析及质量控制[J].临床检验杂志，2009，27(4):307.

[6]陈卫群,周方红.种不同检验方法对阴道念珠菌的检验结果对比分析[J].当代医学，2011，17(10):46-47.