165例HBV基因分型与中医证型的关系探讨

杨培伟 赵文霞 徐亚洲

（1 河南中医学院研究生，郑州 450000；2 河南中医学院第一附属医院，郑州 450000）

165例HBV基因分型与中医证型的关系探讨

杨培伟1赵文霞2徐亚洲1

（1 河南中医学院研究生，郑州 450000；2 河南中医学院第一附属医院，郑州 450000）

目的 了解本地区慢性乙型肝炎 （CHB）患者乙型肝炎病毒 （HBV）基因型分布的特点，探讨基因型与中医证型的关系。方法 收集本地区CHB患者165例，分为肝胆湿热证、肝郁脾虚证、肝肾阴虚证、瘀血阻络证和脾肾阳虚证；采用荧光定量PCR方法检测其HBV基因型。结果 165例CHB患者C型＞B型，肝郁脾虚证＞瘀血阻络证＞肝胆湿热证，肝郁脾虚证与其他各证相比有显著性意义 （P＜0.05）。结论 本地区CHB患者HBV基因型与不同中医证型之间可能存在一定的规律性，这对于判断病情及指导用药具有重要的临床意义。

HBV；基因分型；中医证型

HBV基因型存在典型的地域分布差异，且不同基因型致病性不同，HBV基因型与病毒的传播方式、抗病毒药物的疗效及预后都有一定的相关性。本研究应用荧光定量聚合酶链反应 （FQ－PCR）技术对本地区165例乙型病毒性肝炎 （HBV）患者进行了HBV基因分型，探讨HBV基因型与中医证型可能存在的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本组165例慢性乙型肝炎 （CHB）患者为2010年7月至2013年11月本院肝病科住院或门诊就诊的患者，均为河南人。其中男86例，女79例；年龄为13～70岁，平均年龄 （39.2±12.0）岁；病程最短半年，最长50年，平均病程为 （10.6±7.4）年。西医诊断标准为慢性肝炎的诊断按照2000年西安会议 “病毒性肝炎诊断标准”［1］。中医辨证标准参照2004年中华中医药学会内科分会慢性肝炎辨证标准，排除中医辨证不属于慢性肝炎者。将患者分为肝胆湿热、肝郁脾虚、肝肾阴虚、瘀血阻络、脾肾阳虚5型。所有病例血清排除合并甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染以及药物性肝病、酒精性肝病、自身免疫性肝病、代谢性肝病等。血清－70℃保存。

1.2 主要试剂 HBV基因分型PCR检测试剂盒由上海克隆生物高技术有限公司提供，试剂盒检测下限103 IU/ml。

1.3 主要仪器 PCR扩增仪为美国罗氏公司MX－3000P全自动定量PCR仪，基因测序仪为美国AB公司的3130型测序仪。

1.4 检测方法 荧光定量PCR法HBV基因分型检测在ABI系列PCR荧光检测仪上进行PCR扩增，循环参数如下：42℃逆转录5min；94℃，变性5min；40个PCR循环：94℃变性5s和60℃退火40s；最后72℃延伸5min。利用ABI 3130（美国应用生物系统公司）对所得PCR产物进行DNA测序。将序列结果与美国国家生物技术信息中心 （NCBI）的HBV数据库进行比对，得到HBV基因型。该试剂采用聚合酶链式反应 （PCR）结合TaqMan荧光探针技术，FAM波长检测B型乙型肝炎病毒，HEX波长检测C型乙型肝炎病毒。检测按照说明书操作。

1.5 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件，计量资料用t检验，计数资料用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HBV基因型种类、分布频率 165例慢性HBV感染者中，B型56例 （男29例，女27例）占33.94%，C型104例 （男54例，女50例）占63.03%，D型2例（男性）占1.21%，未定型3例 （男1例，女2例）占1.81%。提示慢性HBV感染者的优势基因型为C型，其次为B型，D型所占比例最少。

2.2 中医证型分布规律 根据临床主证特点，165例CHB患者中肝胆湿热型12例 （7.27%），肝郁脾虚型92例 （55.76%），肝肾阴虚型2例 （1.21%），瘀血阻络型57例 （34.55%），脾肾阳虚型2例 （1.21%），表明CHB患者的中医证候以肝郁脾虚和瘀血阻络型居多。

2.3 HBV基因型与中医证型的关系 CHB患者在性别、年龄、病程等方面差异无统计学意义 （P＞0.05），CHB患者中医辨证分型在不同HBV基因型中的分布差异有统计学意义。因D基因型和未定型者及肝肾阴虚证和脾肾阳虚证例数较少，统计误差太大，故均未列入统计。C基因型多于B基因型，C型的比例肝郁脾虚证＞瘀血阻络证＞肝胆湿热证，基因B型与基因C型及各证型间的差异均有统计学意义，见表1。

表1 HBV基因型与中医证型的关系 ［n（%）］

3 讨论

中医学认为肝喜条达而恶抑郁，主疏泄，调畅气机。肝病首先影响肝脏的疏泄功能。表1提示CHB患者肝郁脾虚证出现频次最多，瘀血阻络证次之，肝胆湿热证再次之。临床中已有很多CHB患者出现脾胃功能的异常，这正好与中医的 “见肝之病，知肝传脾，当先实脾”理论相符合。另外，“久病入络”，会影响气血运行，出现瘀血阻络证。

根据HBV全基因组测序结果，规定核苷酸序列异质性≥8.0%或S基因核甘酸序列异质性≥4.0%，将HBV分为A～I9种基因型［2－3］。HBV基因型呈一定的地理区域性分布［4］，在我国以C型和B型为主，本研究采用荧光定量PCR法检测本地区165例CHB患者HBV基因型，结果提示河南地区的慢性HBV感染者的优势基因型为C型。有研究表明，C基因型感染者与B基因型感染者相比，较难出现HBeAg血清学转换，也更容易进展为慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌。

HBV基因型与拉米夫定治疗耐药发生率具有一定相关性，乙肝病毒某些基因型容易发生基因变异，在临床中对CHB患者进行基因分型检测是很有必要的。同时，通过加强中医证型与基因分型之间的联系，促进辨证与辨病、宏观辨证与微观辨证相结合，有利于明确证候的诊断，提高中医药的临床疗效，促进中医药更好地发展。因此，了解HBV基因型分布和中医证型，追溯感染源对判断其预后、监测抗病毒药物疗效、减少基因变异、延缓病程进展及选择个体化治疗方案等方面具有重要应用价值。

［1］中华医学会传染病与寄生虫病学分会·肝脏学分会.病毒性肝炎防治方案［J］.中华肝脏病杂志，2000，8：324.

［2］Tran TT，Trinh TN，Abe K.New complex recombinant genotype of hepatitis B virus identified in Vietnam［J］.J Virol，2008，82（11）：5657.

［3］Olinger CM，Jutavijittum P，Hubschen JM，etal.Possible new hepatitis B virus genotype southeast Asia［J］.Emerg Infect Dis，2008，14（11）：1777.

［4］冯琴，朱善军，何江，等.新疆5个民族慢性乙型肝炎患者HBV基因型分布特点［J］.中华医院感染学杂志，2010，20（14）：2015－2017.

10.3969/j.issn.1672－2779.2014.10.094

1672－2779（2014）－10－0154－02

（本文责编：杨 杰 本文校对：张文娟

2014－01－20）