活力素对荷艾氏腹水瘤（EAC）小鼠抑瘤作用的实验研究

邬晓东 张纽华 何容开

（1 广州医科大学附属肿瘤医院中西医结合科，广州 510095；

2 暨南大学医学院，广州 510000；3 广东省农业科学院，广州 510045）

活力素对荷艾氏腹水瘤（EAC）小鼠抑瘤作用的实验研究

邬晓东1张纽华2何容开3

（1 广州医科大学附属肿瘤医院中西医结合科，广州 510095；

2 暨南大学医学院，广州 510000；3 广东省农业科学院，广州 510045）

目的 探讨一种国家专利技术通过药食同源的 “工程菌”转化含硒的中药灵芝孢子等提取多种中药活性成分 （简称为活力素）的抑瘤及对抗肿瘤药的增效减毒作用。方法 将活力素、环磷酰胺分别及共同用于荷艾氏腹水瘤小鼠，随机分为实验组 （活力素组，环磷酰胺组，活力素＋环磷酰胺组）及对照组，观察小鼠的存活天数，体重及瘤重变化情况。结果 活力素组小鼠的存活天数明显延长，当活力素浓度为0.276g/mL时，能将小鼠生存时间延长24.4%；活力素组小鼠治疗后四周体重增加8.49g，明显高于对照组；环磷酰胺＋活力素治疗组体重也有所增加，体重增加6.9g，略高于对照组；治疗四周后，将皮下瘤取出称重，发现活力素组肿瘤重量为0.531g，肿瘤小于对照组的0.686g，抑瘤率达22.6%，环磷酰胺组与环磷酰胺＋活力素组肿瘤明显减小，抑瘤率更明显，分别为56.27%和76.68%。结论 活力素能提高腹水瘤小鼠的生存时间，并对实体瘤的生长有明显的抑制作用，与环磷酰胺联合使用不但能明显提高抗肿瘤药物的抗肿瘤作用，还能减轻化疗药物降低体重的副作用，展示出与化疗药很好的协同抗癌作用。

活力素；抗肿瘤；小鼠；中药活性成分

肿瘤是危害人类生命和健康最严重的一类疾病。抗肿瘤药物的研究一直是医学研究的热点，随着分子生物学和分子药理学对肿瘤本质和作用机制方面的阐述，中药抗癌的研究水平也显著提高并展示出了广阔的前景。其在抑制、杀伤肿瘤细胞，改善症状与体征，以及减轻化疗不良反应等方面都发挥着重要作用。本研究探讨一种国家专利技术通过药食同源的 “工程菌”转化含硒的中药灵芝孢子等提取多种中药活性成分 （简称为活力素），将其用于荷瘤小鼠体内，观察其对肿瘤生长和小鼠生存时间的影响。

1 材料及方法

1.1 实验材料 实验用雌性昆明小白鼠由暨南大学动物所提供，荷艾氏腹水瘤 （EAC）原种小鼠由中山医科大学肿瘤研究所提供，环磷酰胺购自环磷酰胺购自Sigma公司。

1.2 活力素液准备 将活力素40g浸泡过夜，沸水浴2次，每次1h，收集滤液 （即浸取夜）。经冷冻干燥浓缩后，用蒸馏水配制成活力素工作液，约含菇粉0.09g/mL。

1.3 活力素对荷艾氏腹水瘤 （EAC）小鼠存活天数的影响 取原荷瘤小鼠腹水用无菌生理盐水配制成2.25×107个细胞/mL，取0.2ml腹腔注射于小鼠。实验分组如下：阴性对照组 （生理盐水0.2ml/d），阳性对照组 （腹腔注射环磷酰胺25mg/kg/d），治疗组1 （0.276g/mL活力素Ⅱ0.2ml/d），治疗组2 （0.138g/mL活力素Ⅱ0.2ml/d），治疗组3 （0.25g/mL活力素Ⅰ0.2ml/d），治疗组4 （0.125g/mL活力素Ⅰ0.2ml/d）。采用灌胃方法进行处理，记录小鼠的存活天数。生存时间延长率计算公式为：

1.4 活力素对艾氏腹水瘤 （EAC）实体瘤抗肿瘤作用从原荷瘤小鼠取出腹水液，用无菌生理盐水配制成1.2×106个细胞/ml，取0.2ml瘤细胞悬液于小鼠右腋下行皮下注射，将荷瘤小鼠随即分为四组：阴性对照组 （同上），阳性对照组 （同上），活力素组 （活力素工作液0.2ml/d），环磷酰胺＋活力素组 （环磷酰胺25mg/kg/d腹注＋活力素0.2ml/d灌胃）。连续检测小鼠的体重变化。抑瘤率的计算公式为：

2 结果

2.1 活力素对荷瘤 （EAC）小鼠生存时间的影响 小鼠腹腔注射艾氏腹水瘤 （EAC）细胞后采用活力素灌胃处理，与对照组相比，治疗组小鼠的存活天数明显延长，以治疗组1尤为显著，即当活力素浓度为0.276g/mL时，能将小鼠生存时间延长24.4% （见图1）。

图1 活力素对荷艾氏腹水瘤 （EAC）小鼠存活天数的影响

2.2 活力素对艾氏腹水瘤 （EAC）实体瘤抗肿瘤作用 将艾氏腹水瘤 （EAC）细胞皮下注射成瘤后采用活力素灌胃处理，与对照组相比，活力素组小鼠治疗后四周体重增加8.49g，明显高于对照组，环磷酰胺＋活力素治疗组体重也有所增加，体重增加6.9g，略高于对照组 （见图2）。

图2 活力素对艾氏腹水瘤 （EAC）实体瘤小鼠体重的影响

治疗四周后，将皮下瘤取出称重，发现活力素组肿瘤重量为0.531g，肿瘤小于对照组的0.686g，抑瘤率达22.6%，阳性对照组与环磷酰胺＋活力素组肿瘤明显减小，抑瘤率更明显，分别为56.27%和76.68% （见图3）。

图3 活力素对艾氏腹水瘤 （EAC）实体瘤的抑瘤作用

3 讨论

肿瘤已是人类公认的重大杀手之一，其死亡率仅次于心脑血管疾病，近些年来各种检测和治疗手段不断出现，但是肿瘤的发病和死亡率却呈逐年上升态势。目前化学药物抗肿瘤作用比较明确，疗效显著，但毒副作用大，长期应用容易产生耐药性等，所以人们迫切希望寻找疗效好且毒副作用小的药物，中药在这方面显示明显的优势。

本研究使用一种专利技术提取多种中药活性成分（简称为活力素），大多数已有研究证实其在提高肿瘤免疫及抗肿瘤方面的作用。如其中灵芝孢子通过刺激机体免疫系统，提高机体内细胞免疫和体液免疫水平来实现抗肿瘤作用。灵芝孢子增强单核2巨噬细胞系统的吞噬功能，激活巨噬细胞分泌多种生物活性物质（如NO，IL－1β，TNF－α等），促使/淋巴细胞增殖，促进抗体生成，增强AF细胞活性，从而杀伤肿瘤细胞［1－4］。并可以通过抑制端粒酶和DNA拓扑异构酶活性，抑制自由基的产生，抑制肿瘤细胞迁移和诱导细胞凋亡等机制抑制肿瘤细胞生长和增值，实现抗肿瘤的作用。

大量的资料证实或提示，硒具有广泛的生物学作用，特别是在癌症 （如肺癌、肠癌、前列腺癌和肝癌等）临床干预试验中，表现出硒有强大的保护作用，流行病学研究表明许多癌症都与硒的摄入不足有关，硒与癌症的关系已成为微量元素硒研究中最为令人关注的领域之一。近年来，对硒预防和治疗癌症的作用及抗癌作用机理等进行了广泛和深入研究，取得了重大进展［5］。Shamberger于1969－1971年经过一系列流行病、实验、临床研究后指出，低硒地区及血硒低的人群中癌发病率高，消化道及乳腺癌尤为显著［6］。Schrauer等人研究指出，日本人饮食习惯的改变 （高蛋白、高脂肪和高碳水化合物饮食）造成从食物中摄入的硒减少，从而使乳腺癌的发病率增加4～5倍［7］。Medina等报道5～50moI的硒能抑制小鼠乳腺癌细胞的生长，细胞荧光法显示这个作用是通过阻断细胞周期的S－G2期而实现的，说明硒对癌细胞的抑制作用可能是在DNA的合成。国内研究人员也发现乳腺癌病人血硒明显低于对照人群。另有报道，在苯并蒽诱导的乳腺癌治疗中发现硒化合物有很好的抗癌活性［8］。其它癌症据近期的一项 （亚利桑那大学亚利桑那癌症中心1993～1996年开展的）研究报道，在该研究中确诊的近200例癌症新病例中，服硒组的前列腺癌、结肠直肠癌和肺癌患者死于这些癌症的机会比安慰剂组分别少63%、58%和46%［9］。因此，硒作为一种抗癌剂已日益受到重视。

本研究中活力素能提高腹水瘤小鼠的生存时间，并对实体瘤的生长有明显的抑制作用，更为重要的是，作为重要活性成分的混合物，活力素还展现出其协同抗肿瘤药物的作用，与环磷酰胺联合使用不但能明显提高抗肿瘤药物的抗肿瘤作用，还能减轻化疗药物降低体重的副作用，展示出与化疗药很好的协同抗癌作用。进一步阐明其在抗肿瘤方面及减轻毒副作用的作用，将有助于活力素在肿瘤治疗方面的潜在应用。

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［5］吴英德.硒对癌症的预防和临床问题的研究现状［J］.广东微量元素科学，2002，（9）：6.

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［7］梁月琴.硒与乳腺癌［J］.微量元素与健康研究，1997，14（3）：59－60.

［8］陈家威，黄锦霞.有机硒化学研究进展［J］.湖北大学学报（自然科学版），1994，16（1）：86－96.

［9］伊冰.硒的抗癌作用仍需验证［J］.国外医学卫生学分册，1999，26（1）：62.

Study on Inhibition Effect of Vigoron Tumor Growth in Ehrlich Ascites Carcinoma（EAC）Tumor Bearing Mice

Wu Xiaodong Zhang Niubua He Rongkai
（1 Tumor Hospital of Guangzhou Medical university，Guangzhou，510095，China；2 School of medicine，Jinan university；3 Guangdong Academy of Agricultural Sciences，Guangzhou，510045，China）

ObjectiveTo acquire some traditional Chinese medicine active components（named vigor）from transformed selenium－containing ganoderma spore by an engineering bacteria which is homology of medicine and food and investigate its anticancer effect alone and its efficacy enhancing and toxicity reducing effect in combination with other anticancer drugs.MethodsVigor and cyclophosphamide were applied in Ehrlich ascites carcinoma（EAC）tumor bearing mice alone and in combination，the mice were randomly divided into control group and experimental groups（including vigor group，cyclophosphamide group and vigor＋cyclophosphamide group），the survival days，body weight and tumor weight were observed.ResultsSurvival days in vigor group were significantly increased，for example，when concentration of vigor was 0.276g/mL，the survival days of mice were increased 24.4%.After 4 weeks treatment，body weight in vigor group was markedly elevated 8.49g compared with control group，whereas body weight in vigor＋cyclophosphamide group was slightly increased 6.9g.Tumor weight in vigor group was 0.531g，less than 0.686 g in control group，the tumor inhibition rate was 22.6%.Tumor weight in cyclophosphamide group and vigor＋cyclophosphamide group were significantly decreased with the tumor inhibition rate was 56.27%and 76.68%，respectively.ConclusionVigor could not only remarkably increase survival time of EAC tumor bearing mice，but also inhibit growth of tumor.In addition，combination of vigor and cyclophosphamide could potentiate anticancer effect and attenuate side effect of chemotherapy drug，which showed anticancer synergy effect.

vigor；anticancer；mice；efficacy enhancing and toxicity reducing

10.3969/j.issn.1672－2779.2014.10.096

1672－2779（2014）－10－0158－03

杨 杰 本文校对：罗 凯

2014－02－08）