PCR与ELISA检测乙肝病毒的对比及临床意义

（菏泽医学专科学校，山东菏泽274000）

PCR与ELISA检测乙肝病毒的对比及临床意义

王海峰

（菏泽医学专科学校，山东菏泽274000）

目的探讨荧光PCR法检测HBV-DNA定量ELISA定性检测乙肝病毒标志物临床价值比较。方法取受试者空腹血清标本同时以荧光定量PCR法检测HBV-DNA和酶联免疫法检测乙肝病毒两对半。结果HBV-DNA定量在9.99×108IU/mL～1.00×106IU/mL之间的404例，大三阳比例为85.89%；HBV-DNA定量在9.99×105IU/mL～1.00×103IU/mL之间的416例，小三阳比例为59.38%；HBV-DNA定量在1.00×103IU/m l～1.00×102IU/mL的140例中，HBsAg、HBcAb阳性患者比例为71.43%；HBV-DNA定量＜1.00×102IU/mL的992例中，HBsAg、HBeAg阴性模式比例为95.67%。结论荧光定量PCR法检测HBV-DNA和ELISA定性检测HBV表面标记物呈正相关，即HBV-DNA拷贝数多的以大三阳居多，HBV-DNA拷贝数少的以无传染性病毒携带者和阴性者居多。荧光定量PCR可以直接反映体内乙肝病毒感染状态及病毒载量情况，较ELISA更利于判断疾病的严重程度和传染性，更有利于指导临床药物选择和疗效观察。

荧光定量聚合酶联反应试验；乙型肝炎病毒DNA；酶联吸附试验

乙型肝炎是一种由乙肝病毒（HBV）感染引起的传染病，乙肝病毒主要侵嗜肝细胞。我国属HBV高发区，一般人群的HBsAg阳性率为9.09%[1]。实时定量荧光PCR技术能够对原始模板定量复制，使我们能更精确地了解HBV的复制情况。HBV-DNA是乙肝病毒的遗传物质，HBV-DNA-PCR是从血清中检测HBV存在的灵敏而直接的方法[2]。本文以1952份血清标本分别用实时定量荧光PCR法检测HBVDNA和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)检测乙肝病毒五项指标，进行对比分析，现将结果报道如下。

1 临床材料

1.1 一般资料空腹血清标本均取自2013年1月1日—2013年7月10日我们对1952份。其中，男1158例，女794例，年龄1～81岁，平均43.5岁。空腹采取静脉血，每份血清标本分两份，一份置-20℃冻存待测，一份4℃待测。1.2试剂、仪器与方法HBV-DNA定量检测：采用上海复星诊断公司生产的HBV核酸扩增荧光定量试剂盒，严格按试剂和说明书操作。使用上海普迪生物科技有限公司ABI7000检测，HBV-DNA含量＜1.0×102IU/mL为检测下限。乙肝病毒两对半检测试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司，用ELISA法进行HBV标志物检测并依据检测结果进行分组。

2 结果

乙肝五项指标定性检测与病毒定量检测结果比较，见表1。

表1 乙肝五项指标定性检测与病毒定量检测结果比较（例，%）

3 讨论

乙肝病毒HBV只侵犯人类和其他灵长类动物，是DNA病毒。乙肝病毒五项指标是从免疫学水平来检测HBV感染机体后引起的免疫应答。由于个体反应的差异，不同的人在感染HBV后会出现不同的免疫应答，从而得到不同的乙肝病毒五项指标结果模式。其结果只能用病毒大量复制、传染性强、少量复制、传染性弱、不复制等描述，不能直接反应患者体内病毒的复制水平及传染程度。实时定量荧光PCR技术则是从分子生物水平直接检测HBV病毒自身的遗传物质DNA，是病毒存在、复制的最可靠、最直接的指标。HBV-DNA定量在9.99×108IU/mL～1.00× 106IU/mL之间的受试者，大三阳比例为85.89%，反映病毒复制活跃、传染性强。但仍有2例HBV-DNA定量在9.99×108IU/mL～1.00×106IU/mL之间，血清学结果显示阴性，这种情况可以考虑隐匿性HBV感染[3]，即S区突变：氨基酸第129位天门冬氨酸和第145位丙氨酸置换可导致血循环中HBsAg阴性；S蛋白第122与123位之间、123与124位之间，分别有2和3个氨基酸插入，也可导致HBsAg不能检出。或处于乙肝病毒感染窗口期，ELISA法检测不出，但实时定量荧光PCR法具有很高的灵敏度，即血清学结果为阴性，而DNA定量结果显示病毒大量复制。HBVDNA定量在9.99×105IU/mL～1.00×103IU/mL之间，小三阳比例为59.38%，反映一部分患者病毒复制弱，传染性弱。S基因变异株的抗原性、免疫原性可发生相应的改变，并可能同时造成与之重叠的P基因变异而影响病毒的复制。另外，HBV Prec区1896位的变异，是HBV中最常见的变异。1989年英国学者carlTlan等首次报道了HBV PreC区1896位的突变。野毒株1896位是G，变异是A，A83氨基酸(TGG)变异为终止密码(TAG)，使PreC区蛋白的翻译终止，从而使HBeAg不能合成，但它并不影响病毒复制。因此，临床上表现为HBeAg阴性、HBV-DNA阳性，而患者仍处于活动状态的慢性乙型肝炎。该位点的突变(G-A)有利于HBV前基因组RNA襻结构稳定性的增加，从而更有利于HBV-DNA的复制。并且另有报道，由于突变而引起的血清学的HBeAg阳性至HBe-Ab阳性的转变，从而使病毒逃避了免疫清除，导致了肝炎重症化或暴发性肝炎[4]。HBV-DNA定量在1.00×103IU/ mL～1.00×102IU/mL之间，HBsAg(+)、HBcAb(+)模式占71.43%。但是HBV-DNA定量＜1.00×102IU/mL，仍有1例为大三阳患者，这种情况应考虑是否HBV基因的S区发生有意义的点突变或插入、缺失突变[5]。

综上所述，实时荧光定量PCR检测HBV-DNA在判断体内HBV是否在复制、复制的程度、用药前后HBV量的变化，以及诊断等方面，均优于HBV血清学标志物的检测，有一定的临床应用价值。

[1]中华医学会肝病学分会,感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南[J].肝脏,2005,(10):348-357.

[2]王自正.实用临床RIA与PCR检测[M].北京:原子能出版社,1995: 127.

[3]张玲荣，马媛，郝彦琴，等.隐匿性HBV感染者血清中HBV S基因变异分析[J].山西医科大学学报，2011,42(10)：781-783.

[4]贾林梓，冯英明.隐匿性HBV感染与肝癌关系的研究进展[J].现代肿瘤医学，2009,17(5):985-988.

[5]何印蕾.乙肝患者血清前S1抗原检测及临床价值[J].右江医学，2005,33(2):154-155.

The Com parison and Clinical Significance of HBV betw een PCR and ELISA

W ang Haifeng
(Heze MedicalCollege,Heze 274000,Shandong)

Ob jectiveAnalysis of 1952 casesw ith fluorescent PCRmethod to detectHBV-DNA quantitative re⁃sults and ELISA qualitative detection of HBV markers in serum specimens,and discusses the difference of the twometh⁃odsand clinical value.M ethods Fasting serum specimensof subjectswere used w ith fluorescentquantitative PCRmethod to detect HBV-DNA and enzyme-linked immunoassay(ELISA)to detecthepatitis b virus(HBV)two half-and-half at the same time.Resu ltsHBV-DNA quantitative in 9.99×108IU/m l-1.00×106IU/m l404 cases,the ratio of the patients (HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+))was 85.89%;HBV-DNA quantitative in 9.99×105IU/m l-1.00×103IU/m l416 cas⁃es,the ratio of the patients(HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+))was 59.38%;HBV-DNA quantitative in 1.00×103IU/m l-1.00×102IU/m l 140 cases,patients w ith HBsAg,HBcAb positive percentage is 71.43%;HBV-DNA quantitative＜1.00×102IU/m l 992 cases,95.67%HBsAg,HBeAg negativemode.ConclusionsThe fluorescence quantitative PCR method to detect HBV-DNA and ELISA qualitative detection of HBV surfacemarkerswere positively correlated,Most of the HBV-DNA copy number in themajority were HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+),Most of the HBV-DNA copy number less were no infectious virus carrier and the negative person.Fluorescence quantitative PCR can directly reflect the stateof hepatitisb virus(HBV)infection and viral load,PCR ismore conducive to judge the severity and infectious dis⁃eases,more conducive to guide clinicaldrug selection and curativeeffectobservation than ELISA.

Fluorescence quantitative PCR;Hepatitis B Virus DNA:ELISA

R446.61；R512.62

A

1008-4118（2014）02-0012-03

2014-01-15

10.3969/j.issn.1008-4118.2014.02.04