不同TgAb浓度对血清Tg放免法浓度测值影响的研究

何健 潘明志  黄蕤  唐恭顺

[摘要] 目的 探讨不同浓度的抗甲状腺球蛋白抗体（TgAb）对甲状腺球蛋白（Tg）测量值的干扰。 方法 通过混合Tg和TgAb标准品，混合患者的血清高Tg低TgAb和高TgAb低Tg产生实验样本，用放射免疫法测量Tg。比较混合前后Tg浓度值。 结果 Ⅰ组试验样本的变异系数为（4.21±3.51）% （0～14.82） （r=0.998）；Ⅱ组试验样本的变异系数为（2.83±2.23）% （0.87～11.21） （r=0.999）；Ⅰ组样本中，增加TgAb浓度，Tg的测量值呈比例下降，呈明显的直线负相关趋势（P均＜0.01）；Ⅱ组样本中，随着TgAb浓度增高，Tg的测量值呈比例下降，呈明显的直线负相关趋势（P均＜0.05）。 结论 血清TgAb浓度过高，Tg的测定值显著会低于实际Tg浓度值，且TgAb的浓度越高，对Tg分析产生的干扰越大。所以临床工作中，分析血清Tg测定值，需要结合血清TgAb测定值。

[关键词] 甲状腺球蛋白；甲状腺球蛋白抗体；分化型甲状腺癌；放射免疫法

[中图分类号] R736.1   [文献标识码] A   [文章编号] 2095-0616（2014）08-07-04

Study of influence of different TgAb concentrations on radioimmunoassay measurement of serum Tg concentrations

HE Jian1,2  PAN Mingzhi2  HUANG Rui2  TANG Gongshun2

1.Department of Nuclear Medicine,Chengdu Second People's Hospital,Chengdu 610017,China;2.Department of Nuclear Medicine,West China Hospital of Sichuan University,Chengdu 610041,China

[Abstract] Objective To evaluate the interference of different concentrations of anti-thyroglobulin antibodies (TgAb) on the measurement values of thyroglobulin (Tg). Methods Through blending Tg and TgAb standards,the patients'serum high Tg and low TgAb and high TgAb and low Tg were blended to produce experimental samples. The radioimmunoassay was used to measure Tg.The Tg concentration values before and after blending were compared. Results The variation coefficient of the experiment samples in group I was (4.21±3.51)% (0-14.82) (r=0.998);The variation coefficient of the experiment samples in group Ⅱ was (2.83±2.23)% (0.87-11.21)(r=0.999).In the samples of group I,when increasing the TgAb concentration,the Ig measurement value dropped proportionally, presenting a significant linear negative correlation trend (P＜0.01 for all);In the samples of group Ⅱ,as the TgAb concentration increased,the Ig measurement value dropped proportionally,presenting a significant linear negative correlation trend (P＜0.05 for all). Conclusion When the serum TgAb concentration is excessively high,the measurement value of Tg is significantly lower than the actual Tg concentration value, and the higher the TgAb concentration is, the larger the interference produced by Tg is.Therefore,in clinical work,analysis of serum Tg measurement value should combine serum TgAb measurement value.

[Key words] Thyroglobulin;Thyroglobulin antibodies;Differentiated thyroid cancer; Radioimmunoassay

血清甲状腺球蛋白（thyroglobulin，Tg）是甲状腺滤泡上皮细胞合成的一种二聚体糖蛋白，贮存在细胞或者滤泡腔内，以胶体形式在细胞和腺腔内循环，仅微量Tg进入血液循环内。分化型甲状腺癌（differentiated thyroid cancer，DTC）患者经手术切除和131I清甲治疗后，血清Tg应小于1ng/mL或者检测不到，如血清Tg水平升高，提示有可能存在DTC临床复发或转移。因此，准确检测血清Tg浓度是判断分化型甲状腺癌（DTC）患者有无复发和转移的一种特异性高的检查方法[1-3]。血清Tg刺激产生甲状腺球蛋白抗体（thyroglobulin antibody，TgAb），由于TgAb的存在，干扰了血清Tg的测量[4]。当TgAb存在时，测量TSH刺激状态的Tg浓度，将导致评判甲状腺癌复发或转移的失败。有人认为TgAb对Tg影响的大小与TgAb浓度有关[5]。为了评估TgAb对血清Tg的影响，作者在各种TgAb浓度下用放免法测量Tg的浓度。

1 资料与方法

1.1 标本收集

收集四川大学华西医院2012年9～11月期间，已行甲状腺全切术、中央区淋巴结清扫术、131I清甲

表2  Ⅱ组实验样本等体积混合后浓度，表示为Tg（Ⅱa）（ng/mL）-TgAb（Ⅱb）（IU/mL）

Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb） Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb） Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb） Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb） Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb）

4.7～3.5 4.7～5.2 4.7～18.8 4.7～643.0 4.7～930.0

endprint

18.5～3.5 18.5～5.2 18.5～18.8 18.5～643.0 18.5～930.0

111.0～3.5 111.0～5.2 111.0～18.8 111.0～643.0 111.0～930.0

246.0～3.5 246.0～5.2 246.0～18.8 246.0～643.0 246.0～930.0

表3  Ⅰ组样本Tg的测量值（）

已知的Tg浓度

（ng/mL） 不同TgAb浓度条件下的Tg测值（ng/mL） 相关系数 P

10.0（U/mL） 30.0（U/mL） 100.0（U/mL） 300.0（U/mL） 1000.0（U/mL）

2 5.1±0.1 4.0±0.2 3.4±0.1 2.6±0.1 1.8±0.1 -0.844 0.000

12.5 11.0±0.5 8.8±0.4 8.2±0.7 7.0±0.3 5.9±0.3 -0.820 0.000

25.0 26.4±1.8 23.6±1.0 20.7±1.1 20.1±1.2 15.3±0.5 -0.898 0.000

100 104.1±3.2 103.7±2.0 88.2±1.0 76.7±2.5 65.5±3.0 -0.880 0.000

表4  Ⅱ组样本Tg的测量值（）

已知的Tg浓度

（ng/mL） 不同TgAb浓度条件下的Tg测值（ng/mL） 相关系数 P

3.5（U/mL） 5.2（U/mL） 18.8（U/mL） 643.0（U/mL） 930.0（U/mL）

4.7 4.5±0.2 4.5±0.2 3.4±0.6 2.1±0.1 2.0±0.2 -0.923 0.000

18.5 17.6±0.3 18.7±0.4 11.3±0.4 9.1±0.9 6.7±0.6 -0.850 0.000

111.0 102.3±5.1 100.5±5.1 56.0±3.4 45.3±0.4 39.3±2.2 -0.793 0.000

246.0 235.8±6.2 234.8±4.2 121.1±1.9 99.4±12.2 85.9±5.2 -0.780 0.001

治疗的DTC患者血清标本20例。纳入标准为：（1）均停服优甲乐3周，禁碘饮食3周。（2）由四川大学华西医院检验科Roche公司MODULAR E170电化学发光系统测定TSH、Tg及TgAb。（3）TSH值（77.2±18.5）IU/L，高Tg浓度~TgAb浓度，高TgAb浓度~低Tg浓度。排除标准：（1）未手术，或未甲状腺全切，中央区淋巴结未清扫。（2）未行131I清甲治疗。（3）未停服优甲乐或停药后TSH值低于30IU/L。

1.2 试验样本准备

Ⅰ组：Tg标准品浓度分别为10，25，50，100和200.0ng/mL，TgAb标准品浓度分别为30，100，300，1000和3000IU/mL。等体积两两混合Tg和TgAb标准品，分别获得混合后不同浓度Tg和TgAb的样本（表1）。Ⅱ组：ⅡaDTC患者低水平TgAb（＜10U/mL），不同的Tg浓度（9.3，37.6，221.9和492.0ng/mL）的血清样本；ⅡbDTC患者低水平Tg（＜0.1ng/mL）不同的TgAb浓度（7.0，10.4，37.5，1286.0和1860.0IU/mL）的血清样本。Ⅱa与Ⅱb等体积两两混合血清样本，分别获得不同浓度Tg和TgAb的血清标本。见表2。

1.3 Tg和TgAb测量

Tg测量使用RIA法，试剂盒购自潍坊三维生

表1  Ⅰ组标准品等体积混合后浓度，表示为Tg（ng/mL）-TgAb（IU/mL）

Tg-TgAb Tg-TgAb Tg-TgAb Tg-TgAb Tg-TgAb

5.0～15.0 5.0～50.0 5.0～150.0 5.0～500.0 5.0～1500.0

12.5～15.0 12.5～50.0 12.5～150.0 12.5～500.0 12.5～1500.0

25.0～15.0 25.0～50.0 25.0～150.0 25.0～500.0 25.0～1500.0

100～15.0 100～50.0 100～150.0 100～500.0 100～1500.0

物工程集团有限公司，其检测低限为1μg/L，批内变异系数3.2%～6.8%，批间变异系数4.7～8.5%。TgAb测量采用IRMA法，由自潍坊三维生物工程集团有限公司提供，其检测低限为3IU/mL，批内变异系数＜10%，批间变异系数＜15%。Ⅰ组和Ⅱ组，每一浓度，一式三份，进行Tg的重复性测量。

1.4 统计学方法

将每一混合后样本作Tg含量测定，测定结果用四格表Kappa检验，SPSS version 11软件分析，进行Spearman相关分析，|r|＞0.95存在显著性相关；|r|≥0.8高度相关；0.5≤|r|<0.8中度相关；0.3≤|r|<0.5低度相关，以P＜0.05为差异有统计学意义。评估样本中不同浓度TgAb对Tg测量的影响。

2 结果

2.1 Tg测量的重复性

Ⅰ组试验样本的变异系数为（4.21±3.51）%（0～14.82）（r=0.998）。Ⅱ组试验样本的变异系数为（2.83±2.23）%（0.87～11.21）（r=0.999）。

2.2 TgAb对Tg的影响

Ⅰ组样本中，增加TgAb浓度，Tg的测量值呈比例下降，呈明显的直线负相关趋势（P均＜0.01）。低浓度（10U/mL）的TgAb样本中，Tg浓度测量值高于已知的Tg浓度的样品（表3）；Ⅱ组样本中，随着TgAb浓度增高，Tg的测量值呈比例下降，呈明显的直线负相关趋势（P均＜0.05）。见表4。

3 讨论

约10%~25%的DTC患者清甲治疗后有转移或复发[6-7]，而Tg被视为预测DTC转移或复发的敏感和特异性的肿瘤标志物。TgAb与存留的抗原刺激相关，40%的DTC患者TgAb呈阳性，较正常人群增高[8，15]。范群等[9]认为TgAb持续阳性可能表明病灶复发或转移，然而，其他的研究已经报道TgAb水平和病灶残留没有相关性[10]。因此，血清高浓度的TgAb对Tg值的干扰，将影响DTC患者下一步的治疗决策。内源性TgAb干扰Tg测量，因此我们可以在一定TgAb浓度下预测Tg浓度。当存在TgAb时，即使TgAb的浓度很低，由放免测定Tg的值通常也低于其真实值[11]。Tg测量值取决于TgAb浓度，其程度与TgAb的浓度呈正相关[12]。在本文研究中，通过A组和B组的实验样品测试Tg，来评估TgAb对Tg测量的影响。

本研究发现，在高浓度的TgAb中，Tg已知值是的测量值的2倍多。如表4中，Tg已知值为4.7ng/mL的血清，在含有1860IU/mL TgAb的样品中测得值仅为2ng/mL。可以认为，当RIA测量值Tg为2.0ng/mL，而TgAb大于1860IU/mL的患者，其Tg值可能大于4.7ng/mL。因此，当应用Tg值为2.0ng/mL来评估患者时，患者可能被错误归类为低风险患者[13]，而停止进一步治疗。一个Tg已知值为18.5ng/mL的血清样本，当含有gAb浓度为1286IU/mL时，测量值为9.1ng/mL。即TgAb大于1286IU/mL时，Tg值为18.5ng/mL的患者，Tg测定值可能低于10ng/mL。因此，当Tg值为10ng/mL，而影像学检查无阳性发现时，患者可能被误认为未发生远处转移[14]。相比早期诊断疾病复发或转移的患者，疾病的处理将被延迟，导致患者预后差。

endprint

在本研究中，我们使用从患者得到的人类TgAb血清，对Tg测量的影响进行评估，在已知的Tg浓度值范围内，验证人类TgAb的影响。本研究的结果表明，在参考范围内，人类TgAb浓度可致Tg测值降低，高浓度的TgAb可以导致Tg值更低；因此，考虑到伴随TgAb浓度的高低，Tg测量方法的发展，将决定临床医生参考其临床意义。与使用患者的血清的试验相反，低浓度的TgAb导致过高地估计的Tg，在本研究中没有进一步论证。

Tg测值的影响不只依赖分析方法类别，还有被患者TgAb的识别的Tg抗原决定簇类型。因此，本次研究可能不适合应用到所有的检测方法和所有患者。然而，研究预测的Tg值，比未考虑TgAb干扰测量的Tg值更最接近真实的Tg值。对于DTC患者，可能在预测病灶复发或癌症复发上更有价值[16]。本研究的可靠性有赖于医生在临床中进行临床实践。

本研究是有一定局限性。首先，患者标本是依据电化学发光筛选的，而本研究运用的是放射免疫法，方法学上存在差异。其次，尽管尽力规范实验室Tg测定操作，实验室之间的差异仍然存在，这可能与基因多态性相关，比如蛋白质一级结构变化的介导，可能会导致改变蛋白质加工、修改或交联糖基化途径[8]。血清TgAb检测的结果因抗原决定部位而存在差异，尤其是在患者没有甲状腺炎的情况下[5]。第三，用血清Tg、TgAb测量值，来估计的真实的Tg值，而真实的TgAb值应该是一个决定性因素。纳入标准的标本，我们没有评估血清Tg对TgAb的影响力。第四，在本研究中，我们只用四个浓度的血清Tg和五个浓度的TgAb，估算已知Tg浓度不是最准确的，还需要大样本进一步的研究真正的Tg浓度。

综上所述，用Tg和TgAb测量浓度预测真正的Tg浓度，用于评估DTC患者病灶复发或转移，将对DTC患者进一步临床治疗提供更多信息，可能比单纯放免法测量Tg更有价值。

[参考文献]

[1] 戴庆靖.甲状腺球蛋白测定的临床意义及影响因素[J].同位素，2007，20（2）：120-123.

[2] 高云朝.血清甲状腺球蛋白及其抗体在化学发光免疫分析时的相互影响[J].检验医学，2007，22（5）：558-560.

[3] 唐恭顺，胥劲，俞英，等.分化型甲状腺癌患者血清Tg测定值与内源性TgAb浓度的相关性研究[J].四川大学学报（医学版），2011，42（6）：856-860

（下转第页）

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（收稿日期：2014-01-27）

endprint

在本研究中，我们使用从患者得到的人类TgAb血清，对Tg测量的影响进行评估，在已知的Tg浓度值范围内，验证人类TgAb的影响。本研究的结果表明，在参考范围内，人类TgAb浓度可致Tg测值降低，高浓度的TgAb可以导致Tg值更低；因此，考虑到伴随TgAb浓度的高低，Tg测量方法的发展，将决定临床医生参考其临床意义。与使用患者的血清的试验相反，低浓度的TgAb导致过高地估计的Tg，在本研究中没有进一步论证。

Tg测值的影响不只依赖分析方法类别，还有被患者TgAb的识别的Tg抗原决定簇类型。因此，本次研究可能不适合应用到所有的检测方法和所有患者。然而，研究预测的Tg值，比未考虑TgAb干扰测量的Tg值更最接近真实的Tg值。对于DTC患者，可能在预测病灶复发或癌症复发上更有价值[16]。本研究的可靠性有赖于医生在临床中进行临床实践。

本研究是有一定局限性。首先，患者标本是依据电化学发光筛选的，而本研究运用的是放射免疫法，方法学上存在差异。其次，尽管尽力规范实验室Tg测定操作，实验室之间的差异仍然存在，这可能与基因多态性相关，比如蛋白质一级结构变化的介导，可能会导致改变蛋白质加工、修改或交联糖基化途径[8]。血清TgAb检测的结果因抗原决定部位而存在差异，尤其是在患者没有甲状腺炎的情况下[5]。第三，用血清Tg、TgAb测量值，来估计的真实的Tg值，而真实的TgAb值应该是一个决定性因素。纳入标准的标本，我们没有评估血清Tg对TgAb的影响力。第四，在本研究中，我们只用四个浓度的血清Tg和五个浓度的TgAb，估算已知Tg浓度不是最准确的，还需要大样本进一步的研究真正的Tg浓度。

综上所述，用Tg和TgAb测量浓度预测真正的Tg浓度，用于评估DTC患者病灶复发或转移，将对DTC患者进一步临床治疗提供更多信息，可能比单纯放免法测量Tg更有价值。

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[16] 任艳鑫，隋军，李晓江，等. 血清Tg、TGAb与分化型甲状腺癌关系的临床分析[J]. 现代肿瘤医学，2008，16（9）： 1488-1489.

（收稿日期：2014-01-27）

endprint

在本研究中，我们使用从患者得到的人类TgAb血清，对Tg测量的影响进行评估，在已知的Tg浓度值范围内，验证人类TgAb的影响。本研究的结果表明，在参考范围内，人类TgAb浓度可致Tg测值降低，高浓度的TgAb可以导致Tg值更低；因此，考虑到伴随TgAb浓度的高低，Tg测量方法的发展，将决定临床医生参考其临床意义。与使用患者的血清的试验相反，低浓度的TgAb导致过高地估计的Tg，在本研究中没有进一步论证。

Tg测值的影响不只依赖分析方法类别，还有被患者TgAb的识别的Tg抗原决定簇类型。因此，本次研究可能不适合应用到所有的检测方法和所有患者。然而，研究预测的Tg值，比未考虑TgAb干扰测量的Tg值更最接近真实的Tg值。对于DTC患者，可能在预测病灶复发或癌症复发上更有价值[16]。本研究的可靠性有赖于医生在临床中进行临床实践。

本研究是有一定局限性。首先，患者标本是依据电化学发光筛选的，而本研究运用的是放射免疫法，方法学上存在差异。其次，尽管尽力规范实验室Tg测定操作，实验室之间的差异仍然存在，这可能与基因多态性相关，比如蛋白质一级结构变化的介导，可能会导致改变蛋白质加工、修改或交联糖基化途径[8]。血清TgAb检测的结果因抗原决定部位而存在差异，尤其是在患者没有甲状腺炎的情况下[5]。第三，用血清Tg、TgAb测量值，来估计的真实的Tg值，而真实的TgAb值应该是一个决定性因素。纳入标准的标本，我们没有评估血清Tg对TgAb的影响力。第四，在本研究中，我们只用四个浓度的血清Tg和五个浓度的TgAb，估算已知Tg浓度不是最准确的，还需要大样本进一步的研究真正的Tg浓度。

综上所述，用Tg和TgAb测量浓度预测真正的Tg浓度，用于评估DTC患者病灶复发或转移，将对DTC患者进一步临床治疗提供更多信息，可能比单纯放免法测量Tg更有价值。

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（收稿日期：2014-01-27）

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