半夏止咳糖浆质量标准研究

★ 肖光清 黄文平 黄琴 乔培 黄陆强 李东勲,

(1.江西中医药大学 江西 南昌 330004；2.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 江西 南昌 330006)

半夏止咳糖浆是由姜半夏、紫菀、甘草、麻黄、苦杏仁、款冬花、陈皮、瓜蒌皮等八味药材组成的方剂，收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第十四册，具有止咳祛痰之功效[1]，多用于风寒咳嗽，痰多气逆。原标准中只有检查项，并无鉴别项。相关文献报道[2-4]，对本品运用HPLC只针对麻黄和陈皮进行了鉴别，为更有效的控制本品质量，保证用药安全，本文对方剂中紫菀、甘草进行了薄层鉴别，运用HPLC对橙皮苷进行含量测定。

1 仪器与药品

Agilent LC-1260型高效液相色谱仪系列；PBQ-Ⅰ薄层自动铺板器(重庆南岸实验电器厂)；SPU-Ⅰ自动喷雾显色仪(日本岛津)；CQ-250超声波清洗器(上海船舶电子设备研究所)；SimplicityTM型超纯水系统(Millipore公司)；AG-135电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；定量毛细管(美国Drummond公司)；层析缸(200×100mm，上海信谊玻璃仪器厂)；硅胶G板(薄层层析用，青岛海洋化工有限公司)。

橙皮苷对照品(含量测定用，批号：110721-200512，中国药品生物制品检定所)；紫菀对照药材(批号：120956-200505，中国药品生物制品检定所)；甘草苷对照品(批号：111610-200604，中国药品生物制品检定所)；乙腈(色谱纯)，其他试剂为分析纯。

半夏止咳糖浆6批(重庆东方药业股份有限公司，批号分别为120201和120203；太极集团四川南充制药有限公司，批号分别为110125和130701；贵州汉方药业有限公司，批号分别为120802和120406)。

2 方法与结果

2.1 紫菀的鉴别

2.1.1 供试品溶液的制备 精密量取本品20mL，加蒸馏水10mL搅拌混匀，加乙酸乙酯萃取两次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液。

2.1.2 对照药材溶液的制备 取紫菀对照药材1g，加水煎煮30min，滤过，滤液浓缩至20mL，按“2.1.1”项下方法制备，制成紫菀药材对照品溶液。

2.1.3 阴性对照溶液的制备 按处方除去紫菀药材，依本品制备工艺制成阴性样品，按“2.1.1”项下方法制备，制成阴性样品溶液。

2.1.4 薄层色谱的鉴别 按薄层色谱法试验，吸取紫菀对照药材叶3μL，供试品及阴性样品溶液各5μL，分别点于同一含1%氢氧化钠的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇(15∶4∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷4%氢氧化钠溶液，置紫外光灯365nm下检视，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照溶液在此位置没有斑点，如图1所示。

1.阴性对照液；2.紫菀对照药材；3～5.供试品溶液

2.2 甘草的鉴别

2.2.1 供试品溶液的制备 精密量取本品20mL，加入2mL浓盐酸和30mL氯仿，回流提取1h，放冷，分取氯仿层，残夜再以30mL氯仿萃取一次，合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液制备 取甘草苷对照品1mg，加甲醇1mL制成对照品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液制备 按处方除去甘草药材，依本品制备工艺制成阴性样品，按“2.2.1”项下方法制备，制成阴性样品溶液。

2.2.4 薄层色谱的鉴别 按薄层色谱法试验，吸取甘草苷对照品3μL，供试品及阴性样品溶液各5μL，分别点于同一含1%氢氧化钠的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(1.5∶4∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷磷钼酸试液和10%硫酸乙醇溶液，烘至显色清晰，供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照溶液在此位置没有斑点，如图2所示。

1.甘草阴性对照品；2.甘草苷对照品；3～5供试品溶液

图3 橙皮苷对照品

图4 供试品溶液

图5 阴性对照溶液

2.3 橙皮苷的含量测定

2.3.1 色谱条件 参照《中国药典》2010年版一部陈皮项下HPLC测定橙皮苷的方法，经优化后，色谱柱：Cosmosil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液(19∶81)，流速：1mL/min，检测波长283nm，柱温：30℃。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2500，分离度大于1.5。

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成0.2576mg/mL的溶液，作为对照品溶液。

2.3.3 供试品及阴性样品溶液的制备 精密吸取10mL，置于25mL量瓶中，分多次加入70%乙醇，边摇边加至刻度，取上清液，即得供试品溶液。取不含陈皮的阴性样品10mL，同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.3.4 干扰试液 分别吸取阴性样品溶液、橙皮苷对照品溶液、供试品溶液各10μL于高效液相色谱仪，结果显示样品与对照品相同位置有较大吸收，阴性对照无干扰，如图3～5所示。

2.3.5 线形关系的考察 精密吸取“2.3.2”项下对照品，加甲醇稀释成以下浓度：0.01288,0.0322,0.0644,0.1288,0.1932,0.2576 mg/mL；分别吸取10μL，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定对照品峰面积，将样品浓度与峰面积进行回归处理，回归方程为：Y=10451.7X-2.80，r=0.9999(n=6)，橙皮苷对照品在0.01288～0.2576mg/mL范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL，按上述色谱条件，重复进样6次，测定供试品溶液中橙皮苷峰面积值，结果经数据处理RSD为1.49%。

2.3.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液10μL，按上述色谱条件，每隔2h或4h，测定供试品溶液中橙皮苷峰面积值，结果经数据处理RSD为0.88%。

2.3.8 重复性试验 精密吸取本品10mL，共六份，按“2.3.3”项下方法处理制成供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，计算含量，测定结果经数据处理RSD为1.36%。

2.3.9 加样回收率试验 精密量取已知含量的样品6份，分别加入橙皮苷对照品适量，按“2.3.3”项下方法处理，测定，计算回收率，结果见表7。

表1 橙皮苷家养回收率测定结果

2.3.10 样品测定 取不同批号样品，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，结果见表2。

表2 6批半夏止咳糖浆中橙皮苷的含量测定结果/mg·mL-1

3 讨论及结论

3.1 薄层方法的考察 由于本制剂中含糖量比较高，对于成分的提取，糖为杂质，故在薄层供试品溶液的制备时，比较了醇沉与不醇沉的方法，结果显示两者影响的效果一样，为了操作简便，故采用不醇沉的方法。在紫菀的薄层色谱中，斑点的分散与色带的产生，在不知具体是何成分产生的斑点情况下，以展开剂的极性大小来探究可能成分的性质，故在制备供试品时，比较了以乙酸乙酯和氯仿提取的方法，结果以乙酸乙酯的方法佳，结果的重现性好。在甘草中，主要含有甘草苷和甘草次酸等化合物，通过水浴回流提取和用乙酸乙酯萃取处理，发现水解后成分在薄层色谱中能表现出来。根据药材含有的成分以及成分的理化性质来确定展开剂的极性大小、比例的多少。通过摸索实验探究，最终确定最适的展开剂类型及比例。

3.2 供试品溶液制备的考察 《中国药典》2010版陈皮中橙皮苷采用甲醇为溶剂进行索氏提取，而本制剂中陈皮经煎煮提取后制成了糖浆，糖为主要杂质，因此实验中我们分别比较50%甲醇、甲醇、70%乙醇、乙醇醇沉对橙皮苷的提取效果。结果发现70%乙醇提取效果佳。通过含量测定，发现陈皮中橙皮苷的转移率只有10%，在处方中，陈皮的用量不低，而转移率不高，通过对橙皮苷的结构发现，结构中含有多个羟基，根据相似相溶原理，此化合物应易溶于水，但研究却不溶于水，只微溶于极性低的有机溶剂，却极易溶于无机碱，原因可能是橙皮苷的空间结构位阻，导致溶解性的差异。

[1]WS3-B-2681-97，半夏止咳糖浆[S].

[2]崔静茹，杜智敏.半夏止咳糖浆的制备与鉴别[J].实用心脑肺血管病杂志，2008，16(7)：61-63.

[3]徐艳丽，郎轶咏.HPLC测定半夏止咳糖浆中盐酸麻黄碱含量[J].中成药，2009，31(10)：1 648-1 649.

[4]阳文武，张德伟，肖琦等.半夏止咳糖浆质量标准研究[J].中国民族民间医药，2013，22(20)：14-15.