Notch1和c-myc在三阴乳腺癌中的表达及意义

秦景云

·论著·

Notch1和c-myc在三阴乳腺癌中的表达及意义

秦景云

目的检测三阴乳腺癌组织(TNBC)中Notch1、c-myc表达并探讨其意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测63例TNBC组织和30例癌旁正常乳腺组织Notch1、c-myc的表达情况。结果TNBC组织中Notch1、c-myc阳性表达定位于细胞质和细胞核，其表达率分别为71.43%(45/63)、69.84%(44/63)，明显高于癌旁正常组织(P<0.01)；63例TNBC组织中，Notch1、c-myc蛋白在组织学分级Ⅲ级阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ级(P<0.05)，Notch1、c-myc的病理分期Ⅲ-Ⅳ期的表达率高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)，Notch1、c-myc阳性表达与淋巴结转移有关(P<0.05)；相关性分析显示，二者之间呈正相关(P<0.05)。结论Notch1、c-myc在TNBC中呈明显高表达，与TNBC的发生、发展和转移密切相关。

三阴乳腺癌；Notch1；c-myc；免疫组化

三阴乳腺癌(Triple negative breast cancer,INBC)是指雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone reeeptor,PR)和人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor2,HER-2)都为阴性的乳腺癌亚型,是乳腺癌中的一种特殊类型，占乳腺癌总数的10%～15%。由于此类乳腺癌内分泌治疗和曲妥珠单抗靶向治疗无效，预后很差，较早发生局部复发和远处转移，易发生 脊髓、脑膜、脑、肝和肺转移[1]。Notch是一个跨膜受体家族，其异常表达与某些恶性肿瘤的发生、发展关系密切。本研究拟用免疫组织化学SP法检测Notch1、c-myc在三阴乳腺癌组织中的表达情况，进一步了解癌基因蛋白与三阴乳腺癌预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 所有病例均来自2009年1月至2012年12月在我院手术治疗，并且病理诊断和免疫组织化学检测ER、PR和Her-2均阴性的三阴乳腺癌，共63例，均为女性，年龄26～79岁，中位年龄(41.8±2.5)岁。所有患者术前均未进行放化疗和内分泌治疗。所有手术标本临床病理资料齐全，均统一重新切片，HE染色再次确定诊断。病例中42例伴淋巴结转移转移；病理类型为浸润性导管癌38 例、浸润性小叶癌25例。病理分级为：Ⅰ级15例，Ⅱ级26例，Ⅲ级22例[2]。临床病理分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期10例，Ⅲ期25例，Ⅳ期20例。所有标本常规取材，中性甲醛固定，石蜡切片(4 μm)，HE染色。同时，另取标本中的30例的癌旁正常组织作为对照组。

1.2 方法 兔抗人Notch1抗体、鼠抗人c-myc抗体工作液、即用型SP试剂盒和DAB染色剂均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。采用SP法，抗原热修复，免疫组化染色过程按试剂盒说明操作，苏木素衬染。

1.3 结果判定 Notch1阳性表达主要定位于细胞质和细胞核，部分定位为细胞膜，c-myc阳性表达定位于细胞质和细胞核，以细胞核或(和)细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性表达。每张切片观察5个高倍视野(400×)，阳性细胞数<5%为(-)，≥5%和<25%为(+)，≥25%和<50%为(++)，≥50%(+++)。

1.4 统计学分析 应用SPSS 16.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验或Fisher确切概率法，相关性分析采用Spearman等级相关，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Notch1、c-myc在三阴乳腺癌组织和正常组织中的表达 Notch1 阳性表达主要位于细胞胞质和胞核，少量位于胞膜，呈棕黄色颗粒,阳性率为71.43%(45/63)，c-myc阳性表达主要位于细胞胞质和胞核，呈成棕黄色颗粒，阳性率69.84%(44/63)，二者的阳性表率明显高于正常组织的3.33%(1/30)和3.33%(1/30)(P<0.01)。

2.2 三阴乳腺癌组织中，二种蛋白的表达与临床病理指标的关系 在三阴乳腺癌组织中，Notch1的阳性表达与年龄无关，而与肿瘤的大小、组织分级、TNM分期和淋巴结转移有关。c-myc阳性表达与年龄、肿瘤大小无关，而与肿瘤的组织分级、TNM分期和淋巴结转移有关。见表1。

表1 Notch1、c-myc在三阴乳腺癌组织中的表达与临床病理的关系 例

2.3 三阴乳腺癌中Notch1和c-myc蛋白之间表达的关系 Spearman等级相关性分析结果表明，在三阴乳腺癌组织中Notch1与c-myc的表达呈显著正相关(P<0.01)。见表2。

表2 Notch1和c-myc在三阴乳腺癌组织中表达的相关性 例

3 讨论

Notch基因编码一类大的跨膜Notch受体，在哺乳动物中Notch受体有四种：Notch1～Notch4。Notch基因包括胞外区、跨膜区(trammembrane domain,TM)和胞内区(notch intracellular domain,NICD)[3]。Notch受体与配体结合后激活Notch信号系统，蛋白水解后释放出NICD，NICD是受体蛋白的活性形式，NICD从细胞膜上脱离后进入细胞核，与DNA结合蛋白CSL结合。CSL和NICD作为Notch信号通路的初级效应分子，其形成NICD-CSL复合体激活靶基因的表达，在细胞的增殖、分化、凋亡以及肿瘤形成等过程中发挥重要的生物学作用[4]。其中Notch1是最常被检测到的Notch受体家族成员之一。

由于Notch信号通路可以与其它细胞信号通路发生交互作用(talk-cross)，因此许多不同的刺激可激活Notch通路。并且不同的Notch的配体和靶基因，在不同组织以及瘤发展的不同阶段，Notch作用也可能不同。因此，在人类恶性肿瘤中，Notch1作用可以是抑癌基因或是癌基因[5]。研究发现，在人类乳腺癌中Notch1更多的起到是癌基因的作用，Notch1信号表达下调可使细胞凋亡癌细胞生长抑制[6]。在三阴乳腺癌中，Notch1表达水平高的患者术后生存率低，并且对化疗的敏感性差[7]。本研究也发现，正常组织中Notch1的表达明显低于三阴乳腺癌组。三阴乳腺癌组中Notch1的表达随着病理分级增高逐渐增强。Notch1表达与肿瘤大小，临床分期关系密切(P<0.05)。

myc基因家族属于核蛋白类的癌基因，包括c-myc(cell-myc)、N-myc(human neuroblastomas)和L-myc(small cell lung carcinomas)三个成员，其中的c-myc是上述三者中作用最强的，定位于8号染色体，结构上由不编码蛋白质的第1外显子和编码蛋白质的第2,3外显子构成。myc基因家族及其产物可促进细胞增殖，永生化，去分化和转化等，在多种肿瘤形成过程中处于重要地位[8]。c-myc基因是禽类髓细胞病毒(AMN)MC-29的V-myc的细胞同源序列，c-myc基因的表达一般与细胞的生长状态有关，如有生长因子刺激成纤维细胞，可导致c-myc表达增强。在细胞培养过程中，用c-myc表达结构或反义寡脱氧核酸进行研究，发现c-myc在细胞 G0期到S期的过程中也起作用，表明c-myc表达的变化与细胞的增殖及分化状态有关，其表达产物在调节细胞生长、分化或恶性转化中发挥作用。c-myc基因主要通过扩增和染色体易位重排的方式激活，与某些组织肿瘤的发生、发展和演变转归有重要关系[9，10]。研究发现在乳腺癌细胞系有c-myc或c-myc相关序列的扩增，而且c-myc过量表达与肿瘤的早期复发有关[11]。本研究发现，三阴乳腺癌组织中c-myc的阳性表达与组织分级、病理分期和淋巴结转移有关(P<0.05)，与患者的年龄和肿瘤大小无关(P>0.05)。c-myc在三阴乳腺癌的阳性表达明显高于癌旁正常组织。

进一步相关性分析表明，Notch1、c-myc在三阴乳腺癌组织中呈正性相关。其机制可能是：c-myc作为Notch1的下游靶基因，Notch1促进肿瘤的发生发展是 c-myc 依赖性的[12]。由于三阴乳腺癌患者缺乏内分泌及靶向治疗的机会，在三阴乳腺癌中研究Notch1和c-myc的表达，有助于为三阴乳腺癌寻找新的靶点。

总之，Notch1、c-myc在三阴乳腺癌的发生、发展过程中存在一种相互协同作用，共同促进肿瘤的发生。二者的联合检测有助临床对三阴乳腺癌的研究，具有一定现实意义。

1 赵增虎，刘俊堂，丁瑞亮，等.吉西他滨联合卡培他滨治疗转移性三阴乳腺癌32例临床观察.解放军医药杂志，2013，25：36-38.

2 Elston CW,Ellis IO.Pathological prognostic factors in breast cancer.I.The value of histological grade in breast cancer:experience from a large study with long-term follow-up.Histopathology,2002,41:154-161.

3 Wang J,Fu L,Gu F,et al.Notch1 is involved in migration and invasion of human breast cancer cells.Oncol Rep,2011,26:1295-1303.

4 Leong KG,Karsan A.Recent insights into the role of Notch signaling in tumorigenesis.Blood,2006,107:2223-2233.

5 Qi R,An H,YuY,et al.Notchl signaling inhibits growth of human hepatocellular carcinoma through induction of cell cycle arrest and apoptosis.Cancer Res,2003,63:8323-8329.

6 Zang S,Chen F,Dai J，et al.RNAi-mediated knockdown of Notch1 leads to cell growth inhibition and enhanced chemosensitivity in human breast cancer.Oncol Rep,2010,5:893-899.

7 Dickson BC,Mulligan AM,Zhang H,et al.High-level JAG1 mRNA and protein predict poor outcome in breast cancer.Mod Pathol,2007,20:685-693.

8 Wang HB,Liu GH,Zhang H,et al.Sp1 and c-Myc regulate transcription of BMI1 in nasopharyngeal carcinoma.FEBS J,2013,280:2929-2944.

9 Xie Y,Zhang J,Xu Y,et al.SirT1 Confers Hypoxia-induced Radioresistance via the Modulation of c-Myc Stabilization on Hepatoma Cells.J Radiat Res,2012,53:44-50.

10 Takwi AA,Becker Buscaglia LE，Zhang J,et al.A statin-regulated microRNA represses human c-Myc expression and function.EMBO Mol Med,2012,4:896-909.

11 Benharroch D,Yermiahu T,Geffen DB,et al.Expression of c-myc and c-ras oncogenes in the neoplastic and non-neoplastic cells of Hodgkin's disease.Eur J Haematol,1995,55:178-183.

12 Klinakis A,Szabolcs M,Politi K,et al.Myc is a Notch1 transcriptional target and a requisite for Notch1-induced mammary tumorigenesis in mice.Proc Natl Acad Sci,2006,103:9262-9267.

ExpressionandsignificanceofNotch1andc-mycinhumantriple-negativebreastcancer

QINJingyun.DepartmentofThoracicSurgery,HandanCentralHospital,Hebei,Handan056001,China

ObjectiveTo investigate the expression of Notch1 and c-myc in human triple-negative breast cancer(TNBC),and to explore its clinical significance.MethodsThe expression levels of Notch1 and c-myc were detected by immunohistochemistry(SP) in 63 cases of TNBC and 30 cases of cancer adjacent normal breast tissues.ResultsThe expression of Notch1 and c-myc in human breast cancer was located in nucleus and cytoplasm.The positive expression rates of Notch1 and c-myc were 71.43%(45/63),69.84%(44/63),respectively in TNBC tissues,which were significantly higher than those in adjacent normal breast tissues(P<0.05).Among 63 cases of TNBC,the positive expression rates of Notch1 and c-myc at histological grade Ⅲ were significantly higher than those at grade Ⅰ～Ⅱ(P<0.05).In addition,the positive expression rates of Notch1 and c-myc in stage Ⅲ～Ⅳ were significantly higher than those in stage Ⅰ～Ⅱ(P<0.05).Furthermore,the expression levels of Notch1 and c-myc were positively correlated to lymph node metastasis(P<0.05).ConclusionNotch1 and c-myc are highly expressed in TNBC,which is closely correlated with the occurrence,development and metastasis of TNBC.

triple-negative breast cancer；Notch1；c-myc；immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.11.004

056001 河北省邯郸市中心医院胸外科

R 737.9

A

1002-7386(2014)11-1614-03

2013-12-11)