缺氧缺血性脑病新生大鼠肾脏Bax和Caspase-3蛋白的表达与肾细胞凋亡的作用机制

刘钊 李易明 王冀 王蕾 李文建

·论著·

缺氧缺血性脑病新生大鼠肾脏Bax和Caspase-3蛋白的表达与肾细胞凋亡的作用机制

刘钊 李易明 王冀 王蕾 李文建

目的探讨缺氧缺血性脑病(HIE)新生大鼠肾脏Bax和Caspase-3蛋白的表达与肾细胞凋亡的作用机制。方法新生7 d Wistar大鼠制备HIE模型。分为假手术对照组和HIE组，于HIE后6、12、24和48 h处死大鼠，取肾脏组织，应用流式细胞术检测肾细胞凋亡情况；应用免疫组织化学法检测肾细胞Bax和Caspase-3蛋白的表达情况；ELISA法检测TNF-α、IL-1β的分泌；应用Western blot技术检测肾细胞凋亡与p38MAPK信号通路的关系。结果HIE组6 h肾脏阳性凋亡细胞开始增多，24 h达到高峰，各时间点阳性凋亡细胞均高于对照组(P<0.05)； HIE组12 h Bax和Caspase-3阳性细胞表达开始增多，24 h达到高峰，各时间点阳性细胞均高于对照组(P<0.05)；HIE组6 h TNF-α、IL-1β分泌开始增多，TNF-α12 h达到高峰，IL-1β 24 h达到高峰各时间点TNF-α、IL-1β均高于对照组(P<0.05)；HIE组6 hp-p38MAPK蛋白表达开始增多并达到高峰，各时间点p-p38MAPK蛋白均高于对照组(P<0.05)。结论HIE新生大鼠肾脏细胞Bax和Caspase-3蛋白表达增加，提示Bax和Caspase-3蛋白表达对肾脏细胞凋亡有促进作用，其可能通过p-p38MAPK信号通路实现的。

Bax；Caspase-3；凋亡；缺氧缺血性脑病；肾脏细胞；p-p38MAPK

缺氧缺血性脑病是围产期窒息导致脑组织缺氧缺血性损伤，是新生儿常见疾病，是新生儿死亡或运动、智力障碍的常见原因[1]。HIE除脑组织缺氧缺血性损伤外，全身多器官均有损伤，其中，肾脏为损伤的重要脏器之一。目前，人们对HIE造成的脑损伤研究报道较多[2，3],而对HIE发生后肾脏损伤研究较少，凋亡相关基因的表达对肾细胞凋亡的影响鲜有报道。本研究通过应用流式细胞术检测肾细胞凋亡情况；应用免疫组织化学法检测肾细胞Bax和Caspase-3蛋白的表达情况；ELISA法检测TNF-α、IL-1β的分泌；应用Western blot技术检测肾细胞凋亡与P38MAPK信号通路的关系，探讨HIE新生儿肾脏损伤的发生机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料 Annexin V-FITC/PI试剂盒(美国BD公司)；鼠抗兔Bax和Caspase-3单抗、TNF-α、IL-1 βELISA试剂盒(美国 eBioscience公司)；蛋白酶抑制剂、去磷酸化酶抑制剂、p-P38和β-actin抗体(美国Sigma公司)；……