老年缺血性脑卒中患者血清sFas和sFasL水平变化及临床意义

吴春芳 赵雪艳 陈 勇 张起顺

(河南大学淮河医院神经内科，河南 开封 475000)

近年研究表明，缺血性脑卒中与细胞凋亡有着密切关系〔1〕。细胞凋亡因子(Fas)及其配体(FasL)是在细胞凋亡过程中发挥重要调控作用的促细胞凋亡因子，且FasL能诱导免疫炎症反应，在调控免疫炎症反应过程中发挥重要中介作用〔2〕。在正常生理条件下，Fas和FasL的表达有限，而在缺血应激条件下，Fas和FasL能够大量表达，其中可溶性Fas(sFas)和可溶性FasL(sFasL)会分泌到胞质中，从而发挥促细胞凋亡作用。因此，在缺血性脑卒中患者血清中能检测到高水平的sFas和sFasL〔3〕。本研究主要探讨sFas和sFasL在老年缺血性脑卒中患者的动态表达水平及其临床意义。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2011年6月至2013年6月来我院就诊的老年缺血性脑卒中患者63例，均经CT检查确诊。入选标准：(1)无严重自身免疫性疾病或心血管系统疾病；(2)无恶性肿瘤；(3)无严重感染；(4)无严重肝、肾等重要脏器病变；(5)无精神障碍性疾病；(6)无血液系统疾病。男39例，女24例；年龄60～81〔平均(73.4±10.3)〕岁；所有患者入院后均采用格拉斯哥昏迷评分(GCS)标准进行评分，轻度组23例：GCS评分>12；中度组21例：8分

1.2试剂与仪器 sFas和sFasL酶联免疫吸附(ELISA)检测试剂盒(购于美国R&D有限公司)；酶标仪购自美国Thermo公司；其他试剂均为国产分析纯试剂。

1.3研究方法 抽取观察组患者发病后24、48、72 h、7、14 d的外周静脉血2 ml；对照组抽取外周静脉血2 ml。所有样品于4℃条件下，2 000 r/min离心15 min，收集血清，-70℃储存待测。血清sFas和sFasL水平的检测严格按照试剂盒说明书进行操作，按正常人血清sFas和sFasL水平进行梯度稀释，所有标本均设复孔，利用酶标仪测定450 nm的OD值，并根据所测数值制作标准曲线，最后计算出观察组患者血清sFas和sFasL浓度。

2 结 果

2.1sFas和sFasL标准曲线的制定 见图1，本研究建立的sFas和sFasL具有很好的线性关系(R2=0.989，0.975)。

2.2两组sFas和sFasL水平比较 观察组血清中sFas和sFasL水平在发病后24 h开始显著升高，均于发病后48 h达到峰值，此后随时间延长而逐渐下降。与对照组相比，观察组不同病情患者血清sFas和sFasL水平均显著升高，且在发病早期与对照组比较更为显著。患者病情越重，sFas和sFasL水平升高幅度越大。重度脑卒中患者均高于中度和轻度患者(P<0.05)；中度脑卒中患者均高于轻度患者(P<0.05)。见图2。

2.3sFas和sFasL表达水平与脑卒中病情分级的关系 sFas和sFasL表达水平与脑卒中GCS评分呈正相关(r=0.582,0.714)(P<0.05)。

图1 sFas和sFasL标准曲线的制定

图2 各组sFas和sFasL水平比较

3 讨 论

Fas(CD95)是一类细胞跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体家族成员，是在免疫系统介导细胞凋亡过程中起着关键作用的凋亡刺激因子〔4，5〕。Fas主要表达于人成熟的T、B淋巴细胞上，广泛分布于各种组织细胞的表面。FasL是Fas在体内的天然配体，二者结合是Fas在体内发挥作用的唯一途径。Fas/FasL作为介导细胞凋亡的重要膜蛋白分子，在正常免疫反应、造血调控、机体细胞数量的恒定与调控、无功能或异常细胞的清除等生理功能以及多种遗传性、获得性疾病的病理机制中具有十分重要的意义。Fas和FasL均可分泌或脱落至细胞外，成为可溶性功能活动分子，即sFas和sFasL〔6〕。

Zhang等〔7〕研究提示Fas信号在肺癌体内促进生长的关键作用，并进一步表明Fas信号可以通过肿瘤细胞前列腺素E2(PGE2)招募髓源性抑制细胞来促进肺癌生长。Chang等〔8〕研究表明，异乌药内酯可能通过诱导P21引起A549细胞的细胞周期阻滞，并诱导Fas和sFasL介导的细胞凋亡途径。Srivastava等〔9〕，揭示了尿sFas可作为原发或复发膀胱移型细胞癌的非侵入性诊断的生物标志物。Kim等〔10〕研究发现，黄芪甲苷能够通过阻断Fas/Fasl介导的凋亡途径从而达到治疗脱发的目的。Pardalis等〔11〕研究显示，与正常组小鼠相比，模型组小鼠血清sFas和sFasL水平显著升高，并于48 h达到高峰。

对于缺血性脑卒中患者，早在20世纪90年代Ohtsuka等〔12〕就已经发现了Fas/FasL系统与脑卒中的相关性。最近，Mahovic等〔13〕提示细胞凋亡在脑梗死发病机制中可能的作用。Gupta〔14〕研究提示，由于年龄的增高，机体细胞的凋亡进程加速，从而引起体内促凋亡的相关因子的表达升高。

本研究提示，脑卒中患者在发病早期由于急性缺血和缺氧，刺激了Fas基因的表达并诱导了sFasL的表达，随着神经细胞被诱导凋亡，Fas和FasL开始下降，逐渐恢复至接近正常水平，这一研究结果与时鹏等〔15〕一致。此外，本结果提示sFas和sFasL水平有望作为缺血性脑卒中患者预后的评价指标。

综上所述，血清sFas和sFasL参与了老年缺血性脑卒中的病理发展过程，能反映脑卒中的病情发展阶段，对临床诊断、治疗以及预后评判起到指导作用。

4 参考文献

1Allen CL，Bayraktutan U.Risk factors of ischaemic stroke〔J〕.Int J Stroke，2008；3(2)：105-16.

2Caulfield AJ，Walker ME，Gielda LM，etal.The pla protease of yersinia pestis degrades fas ligand to manipulate host cell death and inflammation〔J〕.Cell Host Microbe，2014；15(4)：424-34.

3Wei G，Chen DF，Lai XP，etal.Muscone exerts neuroprotection in an experimental model of stroke via inhibition of the fas pathway〔J〕.Nat Prod Commun，2012；7(8)：1069-74.

4Gu TW，Bae WY，Park HT，etal.Expression profile of fas-fas ligand in spiral ganglion cells during apoptosis〔J〕.Clin Exp Otorhinolaryngol，2014；7(1)：1-6.

5Szymanowski A，Li W，Lundberg A，etal.Soluble fas ligand is associated with natural killer cell dynamics in coronary artery disease〔J〕.Atherosclerosis，2014；233(2)：616-22.

6Yao SQ，He QC，Yuan JX，etal.Role of Fas/FasL pathway-mediated alveolar macrophages releasing inflammatory cytokines in human silicosis〔J〕.Biomed Environ Sci,2013；26(11)：930-3.

7Zhang Y，Liu Q，Zhang M，etal.Fas signal promotes lung cancer growth by recruiting myeloid-derived suppressor cells via cancer cell-derived PGE2〔J〕.J Immunol，2009；182(6)：3801-8.

8Chang WA，Lin ES，Tsai MJ，etal.Isolinderalactone inhibits proliferation of A549 human non-small cell lung cancer cells by arresting the cell cycle at the G0/G1 phase and inducing a Fas receptor and soluble Fas ligand-mediated apoptotic pathway〔J〕.Mol Med Rep，2014；9(5)：1653-9.

9Srivastava AK，Singh PK，Singh D，etal.Clinical utility of urinary soluble Fas in screening for bladder cancer〔J〕.Asia Pac J Clin Oncol,2014;27(10):111.

10Kim MH，Kim SH，Yang WM，etal.Beneficial effects of astragaloside Ⅳ for hair loss via inhibition of Fas/Fas L-mediated apoptotic signaling〔J〕.PLoS One，2014；9(3)：e92984.

11Pardalis V，Palli E，Lambropoulou M，etal.Expression of Fas (CD95/APO-1) and Fas ligand (FasL) in experimentally-induced acute pancreatitis〔J〕.J Invest Surg，2014；27(2)：65-72.

12Ohtsuka T，Hamada M，Sasaki O，etal.Clinical implications of circulating soluble Fas and Fas ligand in patients with acute myocardial infarction〔J〕.Coron Artery Dis，1999；10(4)：221-5.

13Mahovic D，Zurak N，Lakusic N，etal.The dynamics of soluble Fas/APO 1 apoptotic biochemical marker in acute ischemic stroke patients〔J〕.Adv Med Sci，2013；58(2)：298-303.

14Gupta S.Molecular and biochemical pathways of apoptosis in lymphocytes from aged humans〔J〕.Vaccine，2000；18：1596-601.

15时 鹏，王文静，王兆平.急性脑梗死患者血清sFas和sFasL水平的观察研究〔J〕.国际脑血管病杂志，2010；18(11)：823-6.