五味子多糖对裸鼠脑胶质瘤细胞增殖的影响

唐泽波 温 娜 金 宏 刘兴吉 齐 玲 于洪泉

(吉林医药学院后勤管理处,吉林 吉林 132013)

恶性胶质瘤在采用手术、放疗和化疗等治疗方法后，患者术后生命仍然不超过1年〔1〕。目前尚缺乏满意的治疗手段。五味子为木兰科五味子的干燥成熟果实，有效成分为木脂素、多糖和挥发油等。五味子多糖(CPSC)是从五味子成熟干燥果实中提取的含有五味子总多糖、17种以上氨基酸和16种以上微量元素的混合物。王艳杰等〔2〕鉴定出CPSC中含有鼠李糖(1.69%)、阿拉伯糖(1.78%)、葡萄糖(79.47%)、半乳糖(10.48%)等单糖成分，并推测CPSC中可能还含有甘露糖(1%)和岩藻糖(5.59%)。研究表明CPSC具有抗肿瘤活性〔3～7〕，但其具体的抗肿瘤作用机制尚不清楚。本文前期研究发现CPSC可以抑制脑胶质瘤细胞的生长〔8〕。本文进一步研究CPSC对体外培养裸鼠脑胶质瘤细胞生长的作用。

1 材料与方法

1.1主要试剂 裸鼠脑胶质瘤细胞本实验室提取，细胞培养基RPMI-1640 (Thermo公司)，小牛血清(Gibco公司)，CPSC(北华大学提供)，胰蛋白酶(Gibco公司)，四甲基偶氮唑(MTT)(Sigma公司)，二甲基亚砜(DMSO)(Thermo公司)。

1.2提取原代裸鼠胶质瘤细胞 留取新鲜的裸鼠脑肿瘤组织，用冷PBS冲洗后将组织剪成碎块，置于10 ml离心管中，并加入木瓜蛋白酶放于37℃培养箱中消化30 min，吸取上清液，加血清终止消化，以300 r/min离心5 min后弃上清，加培养液反复吹打，过滤后以300 r/min速度离心5 min，离心弃上清，加入含10%血清培养液培养，台盼蓝计数活细胞，以2×106/75 cm2密度将细胞接种于培养瓶中，37℃、5%CO2及饱和湿度下培养12 h待用。

1.3MTT法检测CPSC对裸鼠脑胶质瘤细胞生长的影响 将CPSC用85%乙醇溶解后，取适量液体加入含5%小牛血清RPMI-1640细胞培养液，配制成终浓度为200、400、800 μg/ml的药物。取对数生长期细胞，用胰酶消化收集细胞，用含5%小牛血清RPMI-1640细胞培养液调整细胞悬液浓度为8×106/ml。取96孔细胞培养板，每孔中加入100 μl，置入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养24 h，使细胞同步化。分别于24、48和72 h弃去上清液，加入含不同浓度的CPSC，每个药物浓度重复5次。药物作用结束时，每孔加入MTT 20 μl，37℃继续孵育4 h，终止细胞培养，弃去上清液，每孔分别加150 μl DMSO，摇床震荡均匀使MTT沉淀完全溶解，15 min后在酶联免疫检测仪上490 nm波长处测定各孔吸光度(A)值，用不加细胞的空白孔调零。

1.5统计学方法 应用SPSS17.0软件，组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)。

2 结 果

在药物作用不同时间里，细胞的生长反应不一，但主要以高浓度长时间作用时表现为抑制其生长为主。CPSC浓度在200 μg/ml时抑制细胞无明显变化；在24 h和48 h时，药物浓度在400 μg/ml和800 μg/ml抑制细胞生长不明显；但在72 h时，药物浓度在400和800 μg/ml时，与对照组相比，均具有显著性差异(P<0.01)，抑制作用较明显。见表1。

表1 不同浓度五味子多糖对原代培养裸鼠胶质瘤细胞生长的作用±s)

3 讨 论

诱导或促进肿瘤细胞凋亡是治疗肿瘤的基本方法之一。五味子抗肿瘤作用主要集中在木脂素和多糖部位〔5〕。其中，CPSC是其抗肿瘤的主要成分之一，其药理研究表明，具有抑瘤〔3～7〕、抗疲劳〔9〕、抗衰老〔10〕、抗突变〔11〕、增强免疫〔12〕等作用。CPSC具有一定的抑瘤作用，其抑瘤作用可能不是直接杀死瘤细胞，而与细胞凋亡、活化免疫细胞有关。王艳杰等〔3〕研究结果表明：CPSC够抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长，高、中剂量组能够延长H22、S180荷瘤小鼠的生存时间。其高剂量组抑瘤率达到45.4%。另外，于赫等〔4〕研究发现:高、中剂量对小鼠H22肝癌移植瘤具有抑制作用，平均抑瘤率为52.83%,且高剂量可在器官水平上增强H22荷瘤小鼠的免疫能力，从而起到间接抗肿瘤作用。因此，CPSC具有预防和治疗肿瘤的潜在价值。

本实验发现，CPSC在高浓度和长时间作用时，抑制原代培养的裸鼠脑胶质瘤细胞的生长。CPSC呈现这种抑制增殖效应，需进一步研究其作用机制，明确其最佳作用时间和浓度。这从另一角度提示我们，在运用CPSC进行抗肿瘤治疗时，一定要注意药物作用的时间和剂量。这样才能达到理想的治疗效果。

4 参考文献

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8温 娜,唐泽波,袁 瑞,等.五味子粗多糖对脑胶质瘤细胞生长的作用〔J〕.中国老年学杂志,2013;33(12):2837-8.

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