大鼠颅脑损伤后ICAM-1在神经细胞中表达谱及其意义

刘 刚 李 畅 任 强 陈为龙 朱海超 陈志明

(吉林省公安厅，吉林 长春 130051)

当颅脑损伤发生于老年人时，由于机体修复功能相对较差，死亡率极高。细胞间黏附分子(ICAM)-1在损伤后炎症反应中发挥重要作用，进而参与损伤后组织修复，但其在颅脑损伤后的表达研究在国内外却鲜有报道。本研究探讨ICAM-1表达与颅脑损伤后不同时间的关系。

1 材料与方法

1.1动物分组及模型建立 雄性SD大鼠50只，体重250 g，随机分为正常对照及脑损伤组。颅脑损伤组分别于伤后15、30 min、1、3、6、24、72、96、120 h处死，共计10组。采用改进的Feeney自由落体硬膜外撞击方法。损伤装置由底板、固定支架、垂直导杆、下落击锤和聚乙烯撞击圆锥组成。乙醚麻醉大鼠后，用 10%水合氯醛(0.35 g/kg体重)腹腔内注射麻醉，将大鼠头部固定后，剪去顶部皮毛，消毒皮肤后，沿中线左侧切头皮，分离骨膜，用牙科钻于中线旁2 mm，紧挨冠状 缝后开一直径5 mm的圆形窗，硬膜保持完整。用20 g砝码于30 cm高处通过一金属导杆坠落，用锌汀粉封闭骨窗，缝合头皮，置鼠笼喂养。正常对照组不做任何处理。

1.2苏木素-伊红(HE)染色 脑组织标本用10%甲醛溶液固定48 h，石蜡包埋，5 μm厚连续切片，常规HE染色。

1.3免疫组化染色 采用免疫组织化学SP法对脑组织中ICAM-1进行检测，按试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)说明书操作，用已知阳性的切片做阳性对照，磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗为阴性对照。

1.4统计学方法 应用SPSS3.0软件行方差分析和t检验。

2 结 果

2.1HE染色 挫伤处脑组织周围散在片状出血，脑损伤2 h后，损伤灶周围神经细胞尼氏体溶解消失，并伴有周围间隙增宽，呈脑水肿改变，伤后24 h，神经细胞变性坏死，伤后72 h，出血基本吸收，伤后120 h可见有纤维组织增生。

2.2ICAM-1表达在颅脑损伤后随时间变化 ICAM-1在正常未受颅脑损伤脑组织表达量较少，颅脑损伤0.15、30 min、1、3、6、24、72、96、120 h ICAM-1平均灰度值分别为56±3.5、58±4.2、57±3.9、67±7.2、145±6.8、130±7.9、110±6.2、98±4.3、68±6.3、53±9.2。在颅脑损伤3 h后表达增高，且达峰值，表现为平均灰度值增高，96 h后表达下降，至120 h表达接近正常。见图1。

图1 ICAM-1在颅脑损伤后的免疫组化表达

3 讨 论

ICAM-1属于免疫球蛋白超家族成员〔1～3〕，为β2 整合素的配体分子。ICAM-1特异性介导抗原提呈细胞与T淋巴细胞的黏附，在炎症反应早期，ICAM-1表达即增高，且可持续至48 h之后，提示ICAM-1可作为非常有意义的法医学损伤时间推断指标。

损伤时间推断是法医病理学检验中的重要内容之一，目前为止，免疫组织化学方法仍然是法医学皮肤损伤时间推断的重要检测方法，但有效免疫组织化学指标的缺乏是限制该方法应用于法医病理学实践的主要问题，而对于有效免疫组织化学指标的寻找是目前法医病理学者急需解决的热点问题。本研究结果发现，在正常未受颅脑损伤脑组织中，ICAM-1表达量较少〔4～7〕，ICAM-1在颅脑损伤后随时间变化呈规律性表达，这也意味着ICAM-1可作为有效的免疫组织化学指标，在法医学颅脑损伤时间判定中发挥重要作用。ICAM-1很有可能参与脑损伤后免疫应答反应，从而在颅脑损伤修复过程中发挥重要作用，但其具体分子机制仍值得进一步的深入研究。

4 参考文献

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