马齿苋总黄酮提取工艺研究

陶贵斌，赵晶丽，郭 悦，高红梅*

（1.长春中医药大学药学院，长春 130117;2.吉林工业职业技术学院，吉林 吉林 132013）

马齿苋总黄酮提取工艺研究

陶贵斌1，赵晶丽2，郭 悦1，高红梅1*

（1.长春中医药大学药学院，长春 130117;2.吉林工业职业技术学院，吉林 吉林 132013）

目的 采用正交试验优选提取马齿苋中总黄酮的最佳工艺条件。方法 以总黄酮含量为指标，通过正交试验考察料液比、提取次数、提取时间等因素对马齿苋总黄酮提取率的影响，优选马齿苋总黄酮的水提取工艺。结果 最佳条件为料液比为1∶20，煎煮2次，每次1.5 h。结论 采用水煎煮法提取马齿苋中总黄酮，方法简单，成本低廉。

马齿苋;总黄酮;正交试验;分光光度法

马齿苋为马齿苋科植物马齿苋Portulaca oleracea L.的干燥地上部分，又名五行草，以其叶青，梗赤，花黄，根白，子黑也。用于热毒血痢，痈肿疗疮，湿疹，丹毒，蛇虫咬伤，便血，痔血，崩漏下血［1］。现代药理研究［2-3］证明，马齿苋中黄酮类成分为有效成分之一。

具有抗氧化、降糖等作用。本实验对马齿苋总黄酮的水提工艺方法进行了实验研究，为马齿苋的开发利用研究提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 药材来源 马齿苋为马齿苋科植物马齿苋的干燥地上部分，采自吉林省长白山地区，经鉴定，符合《中国药典》［1］2010 版（一部）马齿苋标准。

1.2 仪器 TU-1810PC型分光光度计;电子天平（d=0.000 01 g）;芦丁对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号100080-200707）;试剂、试药均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 正交实验设计［4-5］选用正交表L（34），分别以

9总黄酮提取量作为考察指标，对马齿苋总黄酮提取过程中影响较大的溶剂量（A）、提取时间（B）、提取次数（C）3个因素进行考察，每个因素3个水平，见表1。

表1 四因素三水平正交试验表

2.2 提取方法［6-7］称取药材9分，每分200 g，按L9（34）正交表实验，提取液滤过合并，浓缩成稠膏状，70℃减压干燥得浸膏，作为供试品。

2.3 溶液的制备

2.3.1 供试品溶液的制备 称取供试品（过60目）约0.3 g，研细，精密称定，加70%乙醇250 mL，精密称重，超声处理30 min，冷却至室温，70%乙醇补足失重，摇匀，精密量取续滤液2 mL，备用。

2.3.2 对照品溶液的制备 称取芦丁约20 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，加70%溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密移取1 mL，置10 mL容量瓶，用70%乙醇定容，得到0.201 6 mg/mL的标准溶液。

2.4 测定波长的选择 精密量取供试品溶液和对照品溶液各2 mL分别置10 mL容量瓶中，加水1 mL，加入5%亚硝酸钠0.4 mL，摇匀，放置6 min，加入10%硝酸铝0.4 mL，摇匀，放置6 min，加入4.3%氢氧化钠4.0 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，测定200～800 nm范围内吸收波长，结果对照品溶液在510 nm有最大吸收波长，供试品溶液在510 nm有最大吸收波长，二者吸收波长基本一致。因此确定510 nm为测定波长。

2.5 方法学考察

2.5.1 标准曲线绘制 精密量取芦丁对照品溶液0.5，1.0，1.5，2、2.5，3 mL，分别置 10 mL 量瓶中，加水至3 mL，加入5%亚硝酸钠0.4 mL，摇匀，放置6 min，加入10%硝酸铝0.4 mL，摇匀，放置6 min，加入4.3%氢氧化钠4.0 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以试剂做空白为参比，在510 nm波长处测定吸光度，结果得线性方程为:Y=2.668 4X+0.017 5，r2=0.999 9。总黄酮含量在0.033 6～0.201 6 mg/mL范围内线性关系良好。

2.5.2 精密度实验 精密量取芦丁对照品溶液（0.201 6 mg/mL）0.5 mL置10 mL量瓶中，按“2.4”项下加水至3 mL继续操作，在波长510 nm处连续6次测定吸光度，结果RSD为0.54%（n=6），表明仪器的精密度良好。

2.5.3 稳定性实验 精密量取芦丁对照品溶液（0.201 6 mg/mL）0.5 mL，按“2.4”项下测定方法，测定0，5，10，15，20，30 min 时吸光度，结果对照品的RSD为0.68%，供试品的RSD为0.51%，表明对照品溶液在30 min内稳定性良好。

2.5.4 重现性实验 取马齿苋总黄酮提取物，共6分，按“2.3.1”项下制备供试品溶液，分别精密量取供试品溶液2 mL置10 mL量瓶中，按“2.4”项下测定吸光度，结果供试品中总黄酮平均含量为10.21%，RSD为1.04%（n=6），表明本方法重复性良好。

2.5.5 加样回收率 取已知含量（10.21%）马齿苋总黄酮提取物6分，每分0.5 g，精密称定，并加入一定量的芦丁对照品，按“2.4”项下供试品溶液制备方法，依法独立操作，按“2.4”项下测定吸光度，计算回收率。以芦丁的含量计，平均加样回收率为98.03%，RSD为1.67%。

2.5.6 最佳工艺验证试验 称取马齿苋药材500 g，按最佳提取工艺，即加入20倍量水，煎煮2次，每次1.5 h ，合并滤液，浓缩干燥，称重。平行3次试验。

3 小结

参照三氯化铝显色法原理［8］提取马齿苋中的总黄酮，是一种简便、快速的方法，具有较高的精密度和准确度。提取溶剂量、时间次数各因素对提取影响顺序为:提取次数＞提取溶剂量＞提取时间，提取次数对总黄酮含量影响较大，但第3次提取液颜色变浅、提取量较低，不适宜再提取。

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［1］中华人民共和国药典委员会.中国药典［M］.北京:化学工业出版社，2010.

［2］王国玉，王浩宇，佟继铭.马齿苋的化学成分与药理作用研究现状［J］.承德医学院学报，2012，29（1）:82-85.

［3］高红梅，陈新，王月珍.马齿苋降血糖有效部位研究［J］.长春中医药大学学报，2012，28（3）:536-537.

［4］张爱军，徐多多，张喜，等.紫外可见分光光度法测定乌腺金丝桃中总黄酮的含量［J］.吉林中医药，2012，32（11）:1148-1149.

［5］何凌.淫羊藿总黄酮提取物的制备工艺研究［J］.吉林中医药，2007，27（11）:57-58.

［6］韩亚男，程新宇，侯俊玲，等.大孔树脂纯化甘草地上部分总黄酮的工艺［J］.吉林中医药，2014，34（1）:82-86.

［7］董金香，孙旭，邱野，等.大孔树脂纯化葛根总黄酮工艺研究［J］.吉林中医药，2011，31（9）:909-910，924

［8］李庆杰，王怀生，王莲萍，等.卷柏总黄酮提取工艺研究［J］.长春中医药大学学报，2012，28（2）:355-356.

Extraction process of portulaca total flavone

TAO Guibin1，ZHAO Jingli2，GUO Yue1，GAO Hongmei1*
（1.Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130117，China;2.Jilin Vocational College of Industry and Technology，Jilin 132013，Jilin Province，China）

ObjectiveTo optimize the extraction technology of portulaca total flavones by orthogonal test.MethodsUsing the content of total flavonoids as index，the water extraction technology of portulaca total flavones was optimized by observing the effect of factors such as the ratio of solid to liquid，times of extracting，extracting time on the extraction ratio of portulaca total flavones by orthogonal test.ResultsThe best conditions were as follows:the ratio of solid to liquid was 1:20，with 2 decoctions of 1.5 h each time.ConclusionIt was easy and cheap to extract portulaca total flavones by boiling with water method.

portulaca oleracea L;total flavones;orthogonal test;spectrophometric method

R248.1

A

2095－6258（2014）05－0808－02

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.017

吉林省科学发展计划项目（20130727017YY）;吉林省中医药管理局科技项目（2012-016）。

陶贵斌（1980－）男，药学硕士。研究方向:药物分析。

高红梅，女，副教授，电子信箱:ghmice 2010@126.com。

2014－05－20）