肾复宁颗粒抑制5/6肾切除CRF大鼠肾组织α－SMA表达的实验研究＊

徐军建 苏衍进 曹君一 陕西中医学院附属医院（咸阳712000）

△陕西中医学院（咸阳712046）

▲山西省大同市中医医院（大同037000）

慢性肾功能衰竭（CRF）简称慢性肾衰，是指由各种原因引起肾脏进行性损害并持续性恶化、造成肾单位被严重破坏、肾实质发生不可逆的损害，导致机体在代谢废物的排泄和调节水、电解质及酸碱平衡等方面发生紊乱的一种临床综合征。肾纤维化是慢性肾衰竭发生及发展的共同途径，它包括肾小管萎缩、肾小球硬化和肾间质纤维化，是各种肾脏病进展到终末期呈现的基本病理变化。因此，抗肾纤维化是治疗慢性肾衰竭的最佳途径。近年来，抗肾间质纤维化治疗已成为慢性肾脏病的研究热点。西医对肾纤维化治疗的研究很多，多运用血管紧张素受体拮抗剂和血管紧张素转化酶抑制剂及醛固酮受体拮抗剂，如他汀类降脂药、螺内酯等，经实验研究和临床观察证实其对肾脏有一定的抗纤维化作用，但临床疗效并不十分理想。

我们经文献检索，发现国外对中药抗肾间质纤维化的研究极少，国内学者在中医药防治肾纤维化方面已经进行了大量探索性研究，发现了具有抗肾间质纤维化作用的许多单味中药、中药提取物及中药复方，体现出中医药在防治肾间质纤维化方面的优势和特色。

笔者经过长期临床实践和文献研究，总结出了肾复宁颗粒（黄芪、丹参、当归、大黄），主要功效为益气活血、降浊排毒，针对慢性肾衰竭气虚血瘀，浊毒内蕴的病机特点，此方寒热偏性不明显，药性平和，广泛适用于慢性肾衰竭的各个证型，经临床观察对慢性肾衰竭具有很好的治疗效果。为探讨上述方药作用机理，具体实验研究如下：

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康SD雄性大鼠75只，由西安交通大学实验动物中心提供。

1.2 实验药物 肾复宁颗粒：组成为黄芪、丹参、当归、大黄，比例为6：6：2：1。上方药物由陕西康惠制药股份有限公司制备。

1.3 主要实验试剂 10%多聚甲醛溶液；HE染色试剂；Masson染色试剂；兔抗鼠α－SMA抗体：bs－0189R；免疫组化染色试剂盒：SP－0023。

1.4 方 法 根据文献制作5/6肾切除大鼠CRF模型［1］。术后将手术组大鼠按随机数字表法分为模型对照组、肾复宁颗粒大剂量组、肾复宁颗粒中剂量组、肾复宁颗粒小剂量组，每组各15只。造模4周后，对小、中、大剂量分别给予肾复宁颗粒3g/（kg·d）、6g/（kg·d）、9g/（kg·d）开始灌胃，假手术组和模型对照组分别予以4mL生理盐水灌胃。共干预8周，之后处死大鼠，测定血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）及肾组织中α－SMA的表达水平。

1.5 统计学方法

2 结 果

2.1 肾复宁颗粒对CRF大鼠血Scr、BUN的影响 见表1。

表1 肾复宁颗粒对CRF大鼠血肌酐和尿素氮的影响（±s）

表1 肾复宁颗粒对CRF大鼠血肌酐和尿素氮的影响（±s）

注：与假手术组比较△P＜0.01；与模型对照组比较▲P＜0.01；与中药小剂量组比较□P＜0.01；与中剂量组比较■P＜0.05；与中药小剂量组比较☆P＜0.05。

15 25.73±3.26 6.38±0.77模型对照组 13 56.77±7.47△ 10.28±1.85△中药小剂量组 14 42.71±6.44▲ 9.37±1.25中药中剂量组 15 40.87±4.02▲☆ 8.86±1.02▲☆中药大剂量组 15 36.27±3.88▲□■ 7.88±0.86血肌酐 尿素氮假手术组组 别 n▲□■

2.2 肾复宁颗粒对CRF大鼠肾间质α－SMA阳性积分结果 见表2。

表2 肾复宁颗粒对CRF大鼠肾间质α－SMA阳性积分结果（±s）

表2 肾复宁颗粒对CRF大鼠肾间质α－SMA阳性积分结果（±s）

注：与假手术组比较△P＜0.01；与模型对照组比较▲P＞0.05；与模型对照组比较★P＜0.05，与中药小剂量组比较☆P＞0.05；与模型对照组比较□P＜0.01，与中药小剂量组比较■P＜0.05，与中药中剂量组比较◆P＜0.05。

α－SMA组别15 12 3 0 0 1.20±0.41模型对照组 13 1 2 8 2 2.85±0.80△中药小剂量组 14 1 5 6 2 2.64±0.84▲中药中剂量组 15 4 6 4 1 2.13±0.92★☆中药大剂量组 15 5 6 3 1 2.00±0.93阳性积分假手术组肾组织病变程度n － ＋ ＋＋＋＋＋□■◆

3 结 论肾复宁颗粒可以使CRF大鼠的一般生存状态得以改善，降低Scr、BUN，抑制CRF大鼠残余肾组织中α－平滑肌肌动蛋白（α－SMA）在肾组织中的表达，从而使肾脏纤维化减轻，延缓CRF发展至终末期的进程，有效地保护和改善肾功能。

4 讨 论慢性肾衰竭发生及发展的共同途径为肾纤维化。而现代医学研究表明：α－SMA是细胞骨架蛋白的一种，是肌成纤维细胞（MFB）激活的特异性蛋白，广泛分布于平滑肌、外周细胞、肌上皮细胞及某些基底细胞中。正常肾组织中几乎无肌成纤维细胞，α－SMA仅表达于肾脏血管的中层［2－5］。在肾小管间质纤维化发生发展过程中，肌成纤维细胞随即出现，并过度沉积在ECM中，而该细胞主要表达α－SMA，故α－SMA的表达在肾纤维化进展过程中具有很重要的意义，因此，抑制肾组织中α－SMA的表达，是有效治疗慢性肾衰竭、延缓肾间质纤维化进展的重要措施之一。

慢性肾衰属中医虚劳、关格、水肿等范畴，笔者在长期临床实践过程中认为：其病机为气虚血瘀，浊毒内聚，治疗以益气活血，通腑泄浊为则，临床方选肾复宁颗粒（黄芪、丹参、当归、大黄）治疗多例患者，获较好疗效。现代药理研究表明：黄芪具有双向免疫调节功能，可以改善机体微循环，改善血流变学特性，增加肾血流量，有利于有害物质的清除，减轻脂质在肾小球和肾间质的沉积，抑制系膜细胞和间质成纤维细胞活化，减少细胞外基质分泌，减轻肾间质纤维化，消除蛋白尿，保护肾功能。大黄：改善氮代谢紊乱；减轻肾小球代偿性肥大，缓解其高代谢状态；改善CRF大鼠肾小管的损害，抑制CRF肾小球系膜细胞增殖以及细胞外基质增生。丹参：改善CRF患者的血液流变学状态，抑制血小板的聚集，使血液黏度降低，改善肾脏微循环，保护血管内皮细胞。

本研究表明：假手术组Scr、BUN无明显异常，模型对照组和肾复宁颗粒小、中、大剂量组Scr、BUN指标均高于假手术组（P＜0.01），肾复宁颗粒小、中、大剂量组较模型对照组均明显降低（P＜0.01），其中又以肾复宁颗粒大剂量组降低尤为显著。肾组织α－SMA水平检查结果：模型对照组较假手术组α－SMA水平明显升高（P＜0.01），肾复宁颗粒小、中、大剂量组较模型对照组α－SMA水平均降低，其中以肾复宁颗粒中、大剂量组降低最为明显。

综上所述：肾复宁颗粒治疗慢性肾功能衰竭作用机理可能为：①改善肾脏微循环、增加肾血流量，降低血液粘稠度。②降低Scr、BUN，抑制CRF大鼠残余肾组织中α－平滑肌肌动蛋白（α－SMA）在肾组织中的表达，从而使肾脏纤维化减轻，延缓CRF发展至终末期的进程，有效地保护和改善肾功能。

［1］胡安康，朱孝荣，袁红花.慢性肾衰竭大鼠模型的建立［J］.中国实验动物学报，2011，19（1）：34－38.

［2］Quinlan JM，YuWY，HornseyMA，et al.In vitro culture of embryonic mouse intestinal epithelium：Cell differentiation and introduction of reporter genes［J］.BMC DevBiol，2006，6：24.

［3］蒋文功，刘玉华.人类IgA肾病肾小球Ki－67阳性细胞、α－SMA表达的免疫组化研究［J］.广东药学院学报，2006，22（2）：188－190.

［4］杨汝春，王永钧，鲁 盈，等.益气祛风湿方对阿霉素大鼠肾组织α－SMA、ROCK1表达的影响［J］.中华中医药杂志.2009，48（1）：104－107.

［5］Eddy AA.Molecular insights into renal interstitial fibrosis［J］.J Am Soc Nephrol，1996，7（12）：2495－2508.