唐草片的基础研究和质量控制

邵宝平+杨莉娅+李倩+黄艳春+陈竟青+汝芸+张敏

摘 要 本文归纳总结了近年来唐草片的药理学及药学研究进展。唐草片作为中药具有清热解毒、活血益气的功效。现代药理毒理研究表明其具有抗病毒、调节免疫、抗氧化等作用，急性毒性试验证明了唐草片的安全性，药动学研究表明其与依非韦仑相隔1 h服用并不影响其代谢，与洛匹那韦同时使用，可以延迟洛匹那韦的吸收、推迟达峰时间、提高其生物利用度。在质量控制方面，建立了较完善的控制标准，唐草片严格遵循GMP规范要求，在原先质量标准基础上继续研究，建立了水溶性成分指纹图谱的内控标准。

关键词 唐草片 艾滋病 HIV 中西药合用

中图分类号：R286； R285 文献标识码：A 文章编号：1006-1533（2014）21-0020-04

The basic research and quality control of TangHerb*

SHAO Baoping**， YANG Liya， LI Qian， HUANG Yanchun， CHEN Jingqing， RU Yun， ZHANG Min

（Shanghai Hundreds ace Herbal Pharmaceutical Co. Ltd.， Shanghai 201007， China）

ABSTRACT The pharmacology and pharmaceutical researches of TangHerb are summarized based on the literatures published in recent years. TangHerb as a traditional Chinese medicine has the effects of heat-clearing， detoxicating， blood circulation and nourish qi. Pharmacology researches showed TangHerb has those functions such as anti-virus， regulation of the immune and antioxidant. Acute dermal toxicity test demonstrated the safety of TangHerb. TangHerb has no impact on the pharmacokinetics of efavirenz in HIV patients when taken in an hour after efavirenz. TangHerb may delay the absorption， increase the time to reach the maximum concentration， and improve the bioavailability of lopinavir. In product quality aspect， the requirements of GMP are strictly abided by in the production of TangHerb and its quality standard was established. The HPLC fingerprint for water-soluble composition in TangHerb is established by the continuous study on the basis of the original quality standards.

KEY WORDS TangHerb； AIDS； HIV； combination of Chinese and western medicine

唐草片是我国第一个、也是目前唯一一个获得国家食品药品监督管理局（CFDA）颁发新药证书，并获准上市的治疗艾滋病的纯中药制剂，具有自主知识产权。唐草片的处方、工艺、功能主治等都已申请了中国专利、美国专利、韩国专利、欧洲专利等。唐草片的面世改变了以往只能用西医治疗艾滋病的单一模式。在中医药理论指导下，结合现代医学对AIDS的认识，经过数百名患者的临床实践，最终总结出行之有效的唐草片处方。在此总结唐草片中医药理论、药效和毒理学、有效成分标准的基础研究和生产、质量控制的分析，确保新药唐草片有效性，为临床提供安全有效的产品。

唐草片的中医药理论

艾滋病是由人免疫缺陷病毒（HIV）感染而引起的，导致被感染者的免疫功能低下或丧失，继而发生多系统、多器官、多病原体的各种机会性感染。

唐草片治疗艾滋病的特点是清热解毒，活血益气。方中以老鹳草为君，臣以金银花，气味清香甘寒，寒能清热解毒，甘能养血补虚，善于化毒，既清气中之热，又解血中之毒，并具清透疏解宣散之力清热解毒；黄芪性甘而微温，补中益气，驱邪扶正；柴胡苦、微寒，善于和解表里，疏肝，升阳；尤以香薷一物，上之能开泄腠理，宣肺气，达皮毛，以解在表之寒，下之能通达三焦，疏泄膀胱，利小便，以导在里之水。佐瓜蒌润肺化痰，利气宽胸；菱角益气健脾；胡黄连清热燥湿；诃子以敛肺、涩肠、下气；糯稻根养胃止汗；之于瘀滞宛陈，佐银杏叶、红花、鸡血藤、全蝎，盖诸药皆有活血化瘀，通滞，祛宛生新之功效。甘草解毒、调和诸药，为使药。全方组成意在“清热解毒，活血化瘀，祛邪扶正”。诸药配伍攻补兼施，相辅相成，使热清而不伤正，滋补而不呆腻，故有益于艾滋病的治疗[1]。

唐草片的药效和毒理学研究

唐草片是由20余味精选中药材经过精选、检验、科学配伍、现代化提炼而成的中药制剂，其中所包含的化合物结构多样，作用靶点较多。现代药理研究表明其有以下作用。

抗病毒

中科院昆明动物研究所免疫学实验室对唐草片的抗体外HIV-1的作用进行研究，实验采用MTT比色法检测唐草片对细胞的毒性，用合胞体形成计数和抗原捕获ELISA等方法，结果显示，唐草片对宿主细胞基本没有毒性，显著抑制HIV诱导C8166细胞形成合胞体，唐草片在体外实验中可有效的抑制病毒HIV-1复制[2]。

调节免疫

1） 中国中医科学院广安门医院黄世敬等[3]分别应用丝裂霉素腹腔注射和60Co射线照射造成正常小鼠骨髓抑制模型，另外设立荷瘤小鼠组接受60Co射线照射治疗，上述实验组同时加用唐草片，通过检测外周血细胞数目、胸腺指数和脾脏指数、体重增长等指标，评价唐草片对放化疗小鼠免疫功能的影响，研究发现：唐草片对丝裂霉素和60Co射线造成的小鼠骨髓抑制模型有升高白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞作用；对60Co射线的抗肿瘤作用未见有明显的协同或拮抗作用。故认为唐草片对放化疗引起的免疫功能损伤有较好的改善作用，能修复损伤的免疫细胞，保护肝脏、延缓艾滋病的进程、防御患者的机会性感染。

2） 郑州大学临床药理学教研室郭玉忠等在唐草片对注射氢化可的松小鼠的免疫保护作用[4]和唐草片对小鼠免疫功能的影响[5]研究中，采用BALB/C小鼠腹腔注射氢化可的松，造成免疫功能抑制的动物模型，观察连续灌服唐草片的治疗组与模型组动物免疫功能的差异。检测其外周血细胞计数；测定胸腺指数、脾脏指数；紫外分光光度法测定碳廓清指数；ELISA法检测鼠血清中IL-2、INF-γ；免疫组化测定空肠IgA、CD4+ T和CD8+ T细胞的表达量。研究发现唐草片中剂量组与模型组相比，能够提高免疫抑制小鼠外周血白细胞和淋巴细胞计数、胸腺指数、脾脏指数、碳廓清指数、血清中IL-2、INF-γ水平，增加肠黏膜中IgA、CD4+ T和CD8+ T细胞的表达量。唐草片能够提高免疫抑制小鼠机体的免疫功能，对免疫失衡机体具有保护作用[6]。在艾滋病患者体内免疫平衡被打破，细胞免疫严重缺损，标志之一就是Th1型细胞因子（IL-2、INF-γ等）分泌大大减少[7]。因此，唐草片促进Th1型细胞因子分泌、增强细胞免疫功能的作用在艾滋病治疗中可能具有重要意义。肠黏膜免疫系统在机体内担负着重要的局部防御作用。在HIV感染者体内肠道黏膜是CD4+ T淋巴细胞删除的主要场所，由于免疫功能的逐渐破坏也成为继发感染的根源。分泌型IgA（SIgA）是肠黏膜主要的免疫球蛋白，对黏膜固有的和入侵的病原体具有抵抗作用。本研究研究发现唐草片可以促进肠黏膜IgA的分泌，增加淋巴细胞的数量，可能增强细胞免疫功能，从而改善肠道的屏障作用和免疫功能。这也可能是唐草片能够有效改善如腹泻、食欲不振等临床症状的作用机制之一。

抗氧化

唐草片含量丰富的抗氧化、清除自由基成分与抑制病毒复制、恢复肌体功能、修复损伤细胞、改善患者症状紧密相关，殷建华等[8]在抗艾滋病中成药唐草片抗氧化性的研究中发现，唐草片对羟自由基具有强清除作用，且清除作用较为稳定。唐草片能抑制病毒复制、恢复肌体功能、修复损伤细胞、改善患者症状、防御患者的机会性感染等初步确定与其抗氧化作用紧密相关。

安全性

郑州大学临床药理学教研室郭玉忠等对唐草片急性毒性试验和国家上海新药安全评价研究中心马璟等对SD大鼠口服唐草片（浸膏粉）长期毒性试验表明，唐草片小鼠经口最大给药量相当于原生药136.6 g/kg，相当于临床推荐剂量的233.3倍（按人体70 kg体重计算）；以1.05、2.10及4.20 g/（kg·d）剂量给SD大鼠口服唐草片（浸膏粉），以生理盐水作对照，每日1次，连续给药6个月，停药后继续观察2个月。结果表明，对照组与给药组均有少数动物因支气管肺炎死亡，系自发性病变，与给药无关。唐草片浸膏粉除引起部分雌鼠体重增长缓慢外，各剂量组动物血液学、血清生化、尿常规、病理学等检查均未发现其它与给供试品有关的毒性变化，未见任何不良反应。

唐草片与HAART合用的药代动力学研究

目前我国采用高效抗反转录病毒治疗（highly active antiretroviral therapy，HAART）艾滋病，有研究表明HAART联合唐草片治疗HIV感染具有较好的免疫学治疗效果和安全性。上海市公共卫生临床中心陈军等[9]发现唐草片联用依非韦伦，限定两者服药时间间隔1 h以上时，唐草片对HIV感染者中依非韦伦代谢无显著影响，唐草片并不影响依非韦伦的血药浓度；姚亚敏等[10]利用大鼠模型探索抗艾滋病辅助治疗唐草片对洛匹那韦药代动力学的影响，大鼠随机分为洛匹那韦组（36 mg/kg）和唐草片联用洛匹那韦组（洛匹那韦36 mg/kg，唐草片 864 mg/kg），灌胃给药，高效液相色谱法（HPLC）测定给药前后0、0.5、1、2、4、8、10、12、14、16、22 h的血药浓度，计算药动学参数。结果显示：唐草片与洛匹那韦合并用药后，洛匹那韦的峰浓度Cmax和曲线下峰面积AUC显著提高、半衰期t1/2和达峰时间Tmax延长。研究提示唐草片可延迟洛匹那韦的吸收、推迟达峰时间、提高生物利用度，具体作用机制需要深入研究，临床用药需要考虑相互作用。

唐草片的物质基础及其质量标准研究

唐草片组成为：金银花、龙葵、黄芪、鸡血藤、甘草、老鹳草、白花蛇舌草、木棉花、马齿苋、胡黄连、菱角、糯稻根、诃子、石榴皮、瓜蒌皮、红花、银杏叶、柴胡、香薷、全蝎。由于是20多味中药组成的复方制剂，成分复杂，分析难度大。制定快速、分离度好、可控度高的质量标准是关键。根据处方中主要药味所含的化学成分及其药理作用，结合本产品的生产工艺，对处方中的各药味分析，选择了主要有效成分作为控制产品质量关键点。

唐草片的质量标准研究[11]中分别制定了对主要药材老鹳草、石榴皮、糯稻根、甘草、柴胡、银杏叶等多味药材的薄层色谱鉴别，其方法专属性强，阴性对照没有干扰；检查项应符合片剂项下的各项规定；HPLC测定主药金银花中所含绿原酸的量，每片含金银花以绿原酸（C16H18O9）计，不少于0.5 mg。周淑琴等[12]对唐草片水溶性成分HPLC指纹图谱研究进行研究，建立了唐草片水溶性成分HPLC指纹图谱，标定了20个共有指纹特征峰，方法稳定可靠，精密度高，重复性好，已经作为企业的唐草片内控质量指标。

生产、质量控制

众所周知，中药提取物生产是中药制剂的基础，是提高中成药水平的重要环节，中药提取物生产主要为提取、过滤、浓缩和干燥等，其生产水平的高低直接影响到中成药产品的优劣。中药的提取技术的落后是导致中药制剂水平不高、产品质量不稳定的关键因素之一。有效地控制中药提取物质量，实施中药复方的现代化提取技术和管理，中药提取的专业化、集约化生产是中药实施现代化不可缺少的重要环节。唐草片工艺条件的筛选，通过采用溶媒动态提取、分离纯化技术和挥发油包合技术，极大地提取了处方中的有效成分。再经过液体干燥、制粒、压片、薄膜包衣、流水线内外包装一系列制剂工艺，经制剂成型工艺以及中试生产的研究，确定了最佳制备工艺，保证了处方中药材有效成分，在全部生产过程中，经过硬件及软件的完善保证有效成分的提取，并避免过程中的氧化损耗。科学的制剂配方和制备过程提高了活性成分的生物利用度。

出厂前进行全面的指纹定性检测、指标成分的定量检测、各种微生物限度检测，保证出厂产品符合CFDA批准的质量指标及药典规定指标。

上海百岁行药业有限公司于2013年8月通过国家新版GMP认证，整个生产过程严格按照《药品生产质量管理规范（2010年修订）》的要求组织生产。药品质量首要是抓源头，公司从物料的审计、购入、检验、储存、定期复检和生产投料等环节进行了严格监管，通过AAS、HPLC、GC、TLC、UV、IR等手段给予全面有效的控制，尤其加强了农药残留、重金属的监控，达到国际标准。生产中，从物料、标识、设备、环境、人员、卫生六大方面进行现场监控。产品的生产和质量健立了全面的质量管理体系，有明确的质量目标，注重人员培训与考核，注重风险管理，并在运行过程中不断完善，自从唐草片上市以来，上千批的数据显示唐草片质量均一、稳定、可控，在历年的政府部门抽检中合格率百分之百。

讨论

综上所述，唐草片有提高CD4+ T淋巴细胞计数的作用；使受损的免疫T细胞和B细胞得到恢复；使白细胞升高，促进IL-2和IFN-γ的分泌。

唐草片的基础研究表明，可改善乏力、脱发、食欲减退和腹泻等症状，改善活动功能状况，增加体重，故能延缓艾滋病的进程。唐草片在免疫重建、改善症状方面有优势。唐草片的血药浓度研究只是一个起步，已经可以看到，采用合适的方法服用，不影响西药的血药浓度，而且对有些西药可以提高其血药浓度，我们期待着广大临床工作者继续去探索。但需注意，联合用药时服药的时间应该有间隔，建议1 h左右。通过中西医合用的研究，可以用来弥补HAART治疗在临床上的不足，有待将两种治疗方法的联合运用。

唐草片是目前唯一获得CFDA的用于HIV感染及艾滋病患者的纯中药制剂，在临床应用中贯穿中医“清热解毒、活血益气”理论，有效解决由于正气亏虚、气滞、脾虚而引起免疫缺陷疾病。唐草片的抗HIV、抗氧化性等研究表明：多种多糖、皂苷、黄酮、酚类等活性物质具有提高免疫、可以提高患者CD4+ T细胞、抗氧化清除自由基、保肝护肝、改善其乏力、腹泻、消瘦等症状，唐草片适合用于提高患者生活质量、减少毒副作用小，安全可靠适合于长期服用。唐草片治疗艾滋病的创新基本理念是祛邪扶正、标本兼顾、多靶点治疗，发挥了中医药治疗疾病的优势和特点，为中医药治疗艾滋病提供了一个统一的、标准化的载体。

安全有效的保障在于对唐草片的生产全过程进行严格的质量把关和制备过程的科学控制，唐草片的工艺和质量标准已经达到了较高的水平，但还将继续工艺优化、提高质量标准，争取使唐草片的质量标准被收入国家药典中。

参考文献

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（收稿日期：2014-10-09）