血肿消合剂对脑出血大鼠模型脑组织SOD、MDA的影响*

王爱凤，张社峰

(1.河南省人民医院药学部，河南郑州450003;2.河南省中医药研究院，河南 郑州450004)

高血压性脑出血是最常见的非外伤性脑出血，占所有脑出血的60%［1］，是高血压病在脑部的严重并发症。该病发病急，致死率40% ～70%，即使患者得以生存，大多数也遗留严重的神经功能障碍。目前，无论是常规的内科治疗，还是外科血肿清除手术治疗，均不是十分有效的治疗方法［2］。有学者［3］运用活血化瘀法、通腑泄热法治疗高血压脑出血，取得满意效果。血肿消合剂是河南省中医院王松龄主任医师经验方，临床研究［4］显示，其治疗高血压脑出血效果较好。本研究通过观察血肿消合剂对脑出血大鼠模型脑组织SOD、MDA的影响，探讨其治疗高血压脑出血的可能机制。

1 材料与方法

1.1 动物与分组

SD大鼠216只，雄性，体质量250～300 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证号:SCXK(京)2002－0003。将大鼠分为假手术对照组(30只)，模型对照组(42只)，血肿消合剂大(36只)、中(36只)、小剂量组(36只)和脑血康对照组(36只)。动物进入实验室后，按每笼放养5只标准放置大鼠，饲养3 d后启用。动物室光照充足，通风和空调设备良好，实验室按常规定期消毒。

1.2 药品、试剂与仪器

血肿消合剂处方组成:三七180 g，大黄100 g，莪术 200 g，川芎 200 g，生蒲黄 100 g， 黄芩120 g，茯苓300 g。由河南省中医院制剂室提供，批准文号为郑卫(2001)Вw－10398，每瓶25 mL，含生药25 g。脑血康口服液，10 mL/支，河南省宛西制药股份有限公司产品，批号060201。注射用生理盐水，北京双鹤药业有限公司产品;胶原酶Ⅶ型，购自美国Sigma公司;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒，均由南京建成生物工程研究所提供，批号分别为20020905，20020828;水合氯醛等均为国产分析纯。SN－2型调整脑立体定位仪，产地日本。

1.3 脑出血大鼠模型的建立

用100 g/L水合氯醛按3.0μL/g体质量的剂量腹腔注射麻醉大鼠;将麻醉后的大鼠俯卧位固定于脑立体定位仪上，剃毛，常规消毒;头皮下正中切口约0.8 cm，暴露颅骨;以前囟为零点，向右旁开4 mm，向后1 mm，在颅骨表面用牙钻钻孔。将固定在立体定向仪上的微量注射器(针头直径约0.7 mm)垂直插入脑组织，深度为5 mm(此处为尾状核部位)，用自动推进器向右侧尾状核推入含0.5 u/μL 胶原酶Ⅶ(生理盐水配制成 1 u/μL);退针后缝合头皮。通过破坏尾状核内的血管基底膜，造成脑实质出血。假手术组采用同样手术方法，但注入等体积生理盐水。

1.4 给药方法

大鼠造模前称量体质量、编号。给药剂量按大鼠与人体表面积等效剂量折算，动物造模麻醉清醒后即刻给药。假手术对照组和模型对照组以生理盐水4μL/g体质量灌胃，血肿消合剂大、中、小剂量组依次给予血肿消合剂 9，4.5，2.25 μL/g体质量灌胃，脑血康对照组给脑血康口服液2.7 mL/g体质量灌胃，均1 d 2次。连续给药3 d。

1.5 检测指标

1.5.1 大鼠死亡数量、死亡率

观察各组大鼠的死亡数量，计算死亡率。

1.5.2 神经功能缺失评分

于造模24 h，72 h按Longa等的5级评分标准进行评分。0分:无功能障碍。1分:不能伸展右侧前肢。2分:向右侧旋转。3分:向右侧倾倒。4分:无自主活动伴意识丧失。

1.5.3 脑组织MDA含量、SOD活性

在最后一次神经功能缺失评分后，处死大鼠;取脑组织块约0.3 g(电子天平称量)，用冰生理盐水冲洗，除去血液，滤纸拭干;称量质量放入匀浆器中，以0.1 g∶0.9 mL比例加入预冷的生理盐水，制备脑组织匀浆;用低温低速离心机将匀浆以3 000～4 000 r/min离心15 min;取上清液，即为100 g/L组织匀浆;分装，放－86℃冰箱保存备用。采用722分光光度计以硫代巴比妥酸法检测MDA、黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性，并按Folin－酚试剂法标定蛋白含量，所有操作均严格按说明书进行。

1.6 统计学方法

采用SPSS10.0统计分析软件处理。计量资料数据以均数()±标准差(s)表示，组间比较采用t检验;计数资料采用χ2检验。以P＜0.05为差别有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠死亡数量、死亡率对比

见表1。

2.2 神经功能缺失评分

假手术组大鼠未出现神经功能障碍。造模各组大鼠出现明显的神经功能障碍。给药后各药物组较模型对照组症状均有不同程度恢复;除血肿消合剂小剂量组外，其余各组24，72 h神经功能缺失评分均较同时间点模型对照组下降，差别有统计学意义(P ＜0.05或 P ＜0.01)。见表2。

表2 各组大鼠的神经功能缺失评分对比

2.3 各组大鼠脑匀浆MDA含量、SOD活性对比

造模72 h，与模型对照组对比，各药物组MDA含量下降，但只有血肿消合剂中剂量组较之差别有统计学意义(P＜0.05);各药物组SOD活性均增高，差别有统计学意义(P＜0.01)。见表3。

3 讨论

高血压性脑出血属于中医学“中风”范畴。瘀血、浊邪、热毒是本病的主要病机。高血压脑出血的病理检查可见病变侧脑组织肿胀、充血，切面显示病损区有多发性瘀点、片状出血或血肿，可见瘀血是高血压脑出血病理变化的结果。高血压脑出血后脑水肿、缺血性损害、脑局部血流量下降亦符合血瘀病机。脑局部血流量下降是神经功能恶化的直接因素，提高病灶区脑局部血流量、减少病理产物蓄积、减轻毒性脑损害是治疗脑出血的关键。血肿消合剂具有破血化瘀、泄浊解毒开窍作用。方中田三七、大黄具有出血者止血、瘀血者活血的双向调节作用，可有效预防再次出血和出血后的瘀血，活血而不加重脑水肿。大黄通腑泻热解毒。茯苓健脾渗湿，泻浊强脑，有利于颅内压下降、昏迷病人清醒。莪术、川芎、生蒲黄活血化瘀，莪术偏于破血，但蒲黄又能止血，故三七、莪术、川芎、生蒲黄合用具有化瘀通脉、凝血止血的双重作用。黄芩清热解毒。诸药合用，共奏破血逐瘀、泄浊解毒、醒神通脉之效。现代医学认为:出血后脑损伤是一个恶性级联过程，自由基反应和氧化应激效应参与了脑出血损伤机制，其中MDA毒性作用最大。SOD是自由基清除剂，增加SOD可起到神经保护作用［5］。MDA、SOD水平与血肿体积、发病时间、神经功能损伤程度具有密切关系，可作为判定病情和评估预后的参考指标。本研究结果显示:血肿消合剂大、中、小剂量能显著提高脑组织中SOD活性(P＜0.05或P＜0.01);血肿消合剂中剂量能明显降低MDA含量(P＜0.01)，提示血肿消合剂能减轻脑组织的脂质过氧化损伤。

［1］David O Wiebers，Valery L Feigin，Robert D Brown Jr.脑卒中手册［M］.北京:人民卫生出版社，2008:205.

［2］Naval NS，Nyquist P，Carhuapoma JR.ICH aspiration and thrombolysis［J］.J Neurol Sci，2007，261(1/2):80 －83.

［3］马云枝，庄志江，张丽红.活血化瘀法治疗急性高血压性脑出血64例［J］.陕西中医，2006，27(2):163 －165.

［4］赵彦青，王伟民.血肿消合剂干预高血压性脑出血后毒性脑损伤的研究［J］.上海中医药杂志，2007，41(6):32－33.

［5］程泽沛，蔡志友，刘薇，等.急性自发性脑出血血清SOD、MDA和反应性高血糖的临床研究［J］.重庆医学，2008，37(13):1450－1452.