贵妃鸡蛋色素的提取及初步鉴定

刘艳芳

(阜阳职业技术学院，安徽阜阳 236031)

贵妃鸡又名贵妇鸡［1］，原产于英国皇室，其身披黑白花羽，天生丽质，头戴凤冠，恰似欧洲贵妇人的帽子，又像古代皇妃的凤冠，因此，被英国皇室定名为“贵妃鸡”。贵妃鸡体态玲珑，袅娜多姿，外貌奇特，善通人性，在我国有着“皇家鸡”之称，其肉质极为鲜美，既有土鸡的香滑，又有野鸡的结实，更有飞禽的美味，被美食界誉为“禽中极品”［2］，深受国内外市场欢迎。随着人们生活水平的提高，市场上出现了琳琅满目的禽蛋，贵妃鸡蛋也逐渐进入餐桌。贵妃鸡蛋的价格比普通鸡蛋高出数倍，多数人认为贵妃鸡蛋的蛋黄色度深，具有营养保健功能，较适宜老年人、儿童食用，但因其蛋黄色素成分未能确定，其功能价值缺乏理论性指导。目前，对贵妃鸡的研究主要集中在肉的品质上，而对于贵妃鸡蛋的研究还比较少［3］，特别是对蛋黄部分色素的成分的研究更是未见报道。本文对贵妃鸡蛋的色素成分进行提取，并通过化学和光谱分析等方法对其组分进行初步鉴定，旨在为贵妃鸡蛋与普通鸡蛋功能差异提供依据，为大众餐桌禽蛋的选择提供参考。

1 材料与方法

1.1 主要试剂、材料及仪器

贵妃鸡蛋由安徽省阜阳市颍州区特种动物养殖协会提供，均为32～35周龄的贵妃鸡所产;用于提取及纯化的试剂均为分析纯;色素标准品购自美国sigma公司;上海精科UV756紫外可见分光光度计;BECO冷冻干燥机;日立L-2000高效液相色谱仪。

1.2 实验方法

1.2.1 贵妃鸡蛋色素的纯化

1)贵妃鸡蛋中脱脂色素的制备

先将贵妃鸡蛋的蛋壳清洗干净并晾干，用分蛋器将蛋清及蛋黄分离开来，再把蛋黄部分放入真空冷冻干燥机中，在-30℃冷冻干燥4 d后，收集冻干粉，充氮气密封，低温避光保存。

称取蛋黄冻干粉25 g，在室温下选择石油醚∶丙酮溶剂(2∶1，体积比)200 mL为提取液，分3次搅拌浸提，每次浸提时间为70 min。而后将3次浸提液合并于500 mL分液漏斗中，反复用少量蒸馏水洗涤5次，静置分层，弃去下层水相，把无水碳酸钠加入上层的有机相中脱水、过滤。将收集液 真 空 浓 缩 (40℃ 以 下)［4］，浓 缩 物 上 柱(MgO∶硅藻土 =1∶2，质量比)处理，用石油醚∶丙酮(95∶5，体积比)洗脱除去胆固醇和中性脂肪，最后用丙酮洗脱后收集色素组分，将色素组分用氮吹仪吹干，即得贵妃鸡蛋脱脂色素。充氮气密封，低温避光保存。

2)贵妃鸡蛋脱脂色素的纯化［5-7］

贵妃鸡蛋中色素组分的纯化采用薄层色谱法。称取3 g薄层色谱硅胶，加去离子水15 mL于小烧杯中，调成糊状，而后将糊状物均匀地铺在长方形的玻璃片上，自然晾干后放入105～110℃烘箱中，60 min后取出冷却，即可制得0.75 mm薄层色谱板。在薄层色谱板下端2 cm处轻划一道样线，将贵妃鸡蛋黄色素组分用丙酮溶解后，使用微量进样针在样线的某处点样，要求点样斑点直径小于2 mm，待溶剂挥发后放入层析缸。用石油醚∶丙酮∶苯(7∶2∶l，体积比)作为展层剂。将薄层板倾斜放入封闭的层析缸中，在避光处展开。展开后，刮下并收集各明显色素带，先后两次用石油醚∶丙酮(3∶7，体积比)洗脱液洗脱，再上分液漏斗萃取，真空浓缩即得贵妃鸡蛋纯化色素组分，充氮气密封，低温避光保存。

1.2.2 贵妃鸡蛋纯化色素的光谱鉴定［8-10］

将贵妃鸡蛋纯化色素用丙酮稀释为适宜浓度，用分光光度计对其在360～710 nm波长处进行扫描，记录UV-VIS扫描图谱。

1.2.3 贵妃鸡蛋纯化色素的化学鉴定［11］

1)与浓硫酸的反应

在贵妃鸡蛋纯化色素中加入10 mL的氯仿、2 mL的浓硫酸，并静置10 min以上，观察其颜色的变化。

2)与三氯化锑的反应

在贵妃鸡蛋纯化色素中加入10 mL的氯仿、2 mL的三氯化锑氯仿溶液，并静置反应10 min以上，观察其颜色的变化。

1.2.4 贵妃鸡蛋纯化色素的色谱分析

1)贵妃鸡蛋纯化色素的薄层色谱分析［12-14］

称取1g薄层色谱硅胶，按照本文的方法制备0.25 mm的薄层色谱板。在薄层色谱板下端2 cm处轻划一道样线，将贵妃鸡蛋黄色素组分用丙酮溶解后，使用微量进样针在样线的某处点样，要求点样斑点直径小于2 mm。与此同时，将叶黄素、β-胡萝卜素和α-胡萝卜素3种标准品用适量丙酮溶解后，按同种方法进行点样。点样完毕，待溶剂挥发后将薄层板放入层析缸，展开样品，进行薄层色谱对比。

2)贵妃鸡蛋纯化色素的高效液相色谱分析［15-18］

采用反相高效液相色谱法。色谱柱:Dvelosil C30柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);紫外检测器;流动相A为乙腈∶甲醇(70∶30，体积比)，流动相B为MTBE;流速为0.8 mL/min;检测波长为460 nm;进样量为20 μL;梯度洗脱50 min，从100%流动相A到100%流动相B［5］。

2 结果与分析

2.1 贵妃鸡蛋纯化色素的光谱鉴定

由图1可见，对贵妃鸡蛋纯化后的色素在360～710nm波长进行扫描，光谱吸收峰呈现典型类胡萝卜素的“三指状”峰［19］，可初步判断该色素物质为类胡萝卜素，450 nm为最大吸收波长。

图1 贵妃鸡蛋纯化色素的光谱鉴定

2.2 贵妃鸡蛋纯化色素的化学鉴定

贵妃鸡蛋纯化色素组分中加入10 mL的氯仿、2 mL的浓硫酸，静置10 min后，溶液的颜色呈现为蓝绿色。贵妃鸡蛋纯化色素组分溶于10 mL的氯仿、2 mL的三氯化锑氯仿溶液，静置反应10 min后，溶液颜色呈现为蓝色。这2个反应皆为多烯烃类胡萝卜素物质的特征性颜色反应［20］，表明贵妃鸡蛋纯化色素组分中含有多烃类胡萝卜素。

2.3 贵妃鸡蛋纯化色素的色谱分析

2.3.1 贵妃鸡蛋纯化色素的薄层色谱分析［21］

贵妃鸡蛋纯化色素与α-胡萝卜素、叶黄素、β-胡萝卜素薄层色谱图见图2。由图2可以看出，贵妃鸡蛋纯化色素由石油醚∶丙酮∶苯(7∶2∶1，体积比)展层剂点样展开后，可分离出3个明显的色带，且这3个色带与叶黄素、玉米黄素及β-胡萝卜素薄层色谱分别具有对应关系。叶黄素、玉米黄素及β-胡萝卜素3个组分均属于多烯烃类胡萝卜素，这与本文的结论一致。因此，通过薄层色谱法对比分析，确定了贵妃鸡蛋纯化色素中含有叶黄素、玉米黄素及β-胡萝卜素3种类胡萝卜素组分，Rf值依次分别为0.62，0.72，0.78。

图2 贵妃鸡蛋纯化色素与α-胡萝卜素、叶黄素、β-胡萝卜素薄层色谱图

2.3.2 贵妃鸡蛋纯化色素的高效液相色谱分析

贵妃鸡蛋纯化色素的高效液相色谱见图3、4。比较图3、4可见:贵妃鸡蛋色素纯化物的组分1与叶黄素的保留时间一致;组分2与玉米黄素的保留时间一致;组分3与β-胡萝卜素的保留时间一致。因此，贵妃鸡蛋高效液相色谱的测定进一步证实了贵妃鸡蛋中含有叶黄素、玉米黄素及β-胡萝卜素3种类胡萝卜素。

图3 叶黄素、玉米黄素、β-胡萝卜素标准品的高效液相色谱图1

图4 叶黄素、玉米黄素、β-胡萝卜素标准品的高效液相色谱图2

3 结束语

本文以冻干蛋黄粉为原料，通过有机试剂提取、洗脱，薄层色谱纯化获取贵妃鸡蛋纯化色素，并通过光谱分析、化学反应、色谱分析等方法，对贵妃鸡蛋纯化色素组分进行鉴定。结果表明:贵妃鸡蛋色素纯化物经紫外可见分光光度计测定后，UV-VIS图谱呈现出“三指状”峰，且具备类胡萝卜素的特征性化学反应，证明贵妃鸡蛋色素中含有多烯烃类胡萝卜素;采用薄层色谱分析，初步鉴定出贵妃鸡蛋纯化色素中含有叶黄素、玉米黄素及β-胡萝卜素3种类胡萝卜素。此结论经过高效液相色谱分析进一步得到证实。

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