HPLC法测定芪丹颗粒剂中黄芪甲苷的含量

关 欣，徐雅娟通信作者：徐雅娟，女，博士研究生导师，电话－3578953，电子信箱－045758849＠qq.com，解生旭，刘 悦，司云珊，刘云雪，张丁文（.长春中医药大学，长春307；.吉林省中医药科学院，长春300）

HPLC法测定芪丹颗粒剂中黄芪甲苷的含量

关 欣1，徐雅娟2*通信作者：徐雅娟，女，博士研究生导师，电话－13578915311，电子信箱－1045758849＠qq.com，解生旭2，刘 悦2，司云珊2，刘云雪1，张丁文1
（1.长春中医药大学，长春130117；2.吉林省中医药科学院，长春130021）

目的 建立芪丹颗粒剂中黄芪甲苷的HPLC含量测定方法。方法 通过HPLC法对芪丹颗粒剂中黄芪甲苷进行含量测定及方法学考察。结果 经测定黄芪甲苷在芪丹颗粒剂中的含量为0.165 mg/g。标准品黄芪甲苷在0.28～3.36μg范围内呈良好的线性关系，精密度RSD＝0.43％（n＝5）；稳定性良好，RSD＝0.31％；重现性RSD值为RSD＝1.44％（n＝5）。平均回收率为97.94％，RSD值为1.44％（n＝5）。结论 该方法简单，精密，专属性好，可为芪丹颗粒剂质量标准研究奠定基础。

HPLC；芪丹颗粒剂；黄芪甲苷；含量测定

芪丹颗粒剂主要由黄芪、党参、黄精、丹参、郁金和赤芍6味药组成。黄芪药性温和，味甘苦，归肺、胃经，是常用的补气中药，并具有排脓、补气固表、利尿排毒、敛疮生肌等功效［1］；党参其性味甘平、无毒，具有补中益气、活血化瘀、健脾生津之功效及抗肿瘤、耐疲劳、增强机体免疫力等多种作用［2-3］，在临床上主要用于治疗冠心病及缺血性脑血管病等心脑血管类疾病；黄精性平，味甘，具有补气养阴，健脾，润肺，益肾的功效［4-7］；丹参性微寒，味苦，入心、肝经，有活血通络、祛瘀止痛、凉血消痈、清心除烦之功，并具有活血化瘀等多方面的药理活性，临床上常被用于治疗冠心病及缺血性脑血管病等［8］；郁金［9-11］有活血行气止痛、清心解郁、利胆退黄、凉血止血之功效，常用于治疗经闭痛经、胸腹胀痛、黄胆尿赤等；赤芍性微寒，味苦，归肝经，有散瘀止痛，清热凉血之功效，常用于治疗热入营血，温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁胁痛，经闭痛经，癥瘕腹痛，跌扑损伤，痈肿疮疡［12］等。本文采用HPLC法测定芪丹颗粒剂中黄芪甲苷的含量，为芪丹颗粒剂质量标准研究奠定基础。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：岛津 LC-2010检测器，ELSD 2000ES蒸发光散射检测器，CLSS-VP色谱工作站。黄芪甲苷对照品（购于中国药品生物制品检定所，批号：781-9003，含量测定用）；甲醇（色谱纯，北京化工厂）；乙腈（色谱纯，北京化工厂）；水为双蒸水；其他试剂为分析纯。

2 黄芪甲苷含量测定

2.1 测定方法 供试品制备：取本品20 g，精密称定，加甲醇150mL，加热回流2 h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水50 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次50 mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤3次，每次50 mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。对照品制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液10，20μL，供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，用外标两点法对数方程计算，即得。

2.2 方法学考察

2.2.1 提取方法考察 1）取本品20 g，精密称定，加入甲醇150mL，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2）取本品20 g，精密称定，加甲醇150 mL，加热回流2 h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水50 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次50 mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤3次，每次50mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水10mL使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5 cm，柱高为12 cm），以水100 mL洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30 mL洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。3）取本品 20 g，精密称定，加甲醇150mL，加热回流2 h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水50 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次50 mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤3次，每次50mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。4）取本品20 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40 mL，冷浸过夜，再加甲醇110 mL，加热回流4 h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水50mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次50mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤3次，每次50mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水10mL使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5 cm，柱高为12 cm），以水100mL洗脱，弃去水液，再用40％乙醇50mL洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。5）取本品20 g，精密称定，加入甲醇150mL，超声处理30min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水50 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次50mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤3次，每次50mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。6）取本品20 g，精密称定，加甲醇150mL，加热回流2 h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水50mL使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5 cm，柱高为12 cm），以水100 mL洗脱，弃去水液，再用40％乙醇50mL洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。结果见表1。

表1 提取方法考察表

结果表明：上述6个方法提取的黄芪甲苷按峰面积比较，方法3提出的黄芪甲苷较其他5个方法都高，因此确定提取方法3作为供试品制备方法。

2.2.2 色谱条件的选择［13］

2.2.2.1 色谱柱考察 1）Gracesmart RPC18柱（4.6mm×250 mm，5μm）；2）SHIMADZU VP-OSD柱（4.6mm×250mm，5μm）；3）Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）。结果表明：3个色谱柱分离效果都好，无干扰，但Agilent ZORBAX SB-C18柱黄芪甲苷出峰较早，保留时间在14 min，考虑节省实验时间及试剂，故选用Agilent ZORBAX SB-C18柱为芪丹颗粒剂中黄芪甲苷含量测定色谱柱。

2.2.2.2 流动相考察 参照《中国药典》黄芪甲苷的色谱条件为乙腈-水（32∶68）。结果表明，流动相色谱峰分离效果良好，无干扰，故选用此流动相作为黄芪中黄芪甲苷含量测定流动相。经上述考察，选定色谱条件为：高效液相色谱仪：岛津2010。色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）。流动相：以乙腈-水（32∶68）为流动相。流速：1.0 mL/min。检测器：2000E蒸发光检测器。蒸发管温度：100℃。气体流速：2.8mL/min。

2.2.3 线性关系考察 线性关系的考察和标准曲线：取黄芪甲苷对照品制成0.5 mg/mL的标准溶液，分别精密吸取2，6，12，18，24μL，注入高效液相色谱仪，测定色谱峰峰面积，作浓度-积分面积的线性关系曲线，进样量在1.0～12.0μg范围内呈线性关系，回归方程 Y＝5.535 1＋1.753 3 X，r2＝0.999 1。

2.2.4 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL，重复进样5次，测定色谱峰峰面积，计算，黄芪甲苷峰面积平均值为5 534 189，RSD为1.61％。

2.2.5 稳定性试验 精密吸取供试品溶液20μL，每隔2 h进一次针，测定色谱峰峰面积，计算，结果黄芪甲苷峰面积平均值为6 259 999.2，RSD为3.40％。

2.2.6 重现性试验 取同一样品，均分5分，精密称定，分别按本品质量标准含量测定项下操作，测定，计算，结果黄芪甲苷含量/（mg/g）X＝0.17，RSD＝4.35％。

2.2.7 回收率试验 取已知黄芪甲苷含量的样品（含量为0.17mg/g）10 g，共5分，精密称定，分别精密加入黄芪甲苷约2.0mg，按本品质量标准检测测定项下操作测定，计算回收率，结果黄芪甲苷 X＝97.94％，RSD＝1.44％。

2.3 样品含量测定数据及含量限度 按本品质量标准含量测定项下的操作方法，测定一批样品，每批测定2次，取其均值，结果根据一批样品测定结果，本品含量限度暂定每袋不少于1.3 mg。

3 小结

本文应用高效液相色谱技术对芪丹颗粒剂中黄芪甲苷的含量进行了测定，同时对其进行方法学的考察，初步建立了芪丹颗粒剂中黄芪甲苷含量测定的方法和含量限度，以确保大工业生产得到合格、稳定的制剂。

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Content determ ination of astragaloside in qidan granules by HPLC

GUAN Xin1，XU Yajuan2*< class="footnote_content" id="jz_0_31">通信作者：徐雅娟，女，博士研究生导师，电话－13578915311，电子信箱－1045758849＠qq.com

Objective To establish themethod of content determination of astragaloside in qidan granules by HPLC.Methods Content determination andmethodological study were conducted in astragaloside in qidan granules by HPLCmethod.Results Itwas determined that the content of astragaloside in qidan granuleswas 0.165 mg/g；the content of was 0.305 mg/g.Standard astragaloside within the range of 0.28～3.36μg presented good linear relationship，its precision RSD＝0.43％（n＝5）；its stabilitywas good，RSD＝0.31％；its reproducibility RSD valuewas RSD＝1.44％（n＝5）；its average recovery ratewas 97.94％and its RSD valuewas1.44％（n＝5）.Conclusion Themethod was simple and accuratewith good specificity，and laid foundation for the quality standard research of qidan granules.

HPLC；Qidan granules；astragaloside；content determination

book=245,ebook=31

R248.2

A

2095－6258（2015）02－0245－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2015.02.009

2014－05－19）

科技部重大创制药物专项（2009ZX09103-447）。

关 欣（1988－），男，硕士研究生，主要从事药物活性物质成分与结构研究。

徐雅娟，女，博士研究生导师，电话－13578915311，电子信箱－1045758849＠qq.com，XIE Shengxu2，LIU Yue2，SIYunshan2，LIU Yunxue1，ZHANG Dingwen1
（1.Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China；
2.Jilin Academy of Traditional Chinese Medicine Sciences，Changchun 130021，China）