高效液相色谱法测定药品有关物质时的操作要点

刘 虹 陈 燕 赵海鹏

（潍坊市食品药品检验检测中心，山东 潍坊 261205）

高效液相色谱法测定药品有关物质时的操作要点

刘 虹 陈 燕 赵海鹏

（潍坊市食品药品检验检测中心，山东 潍坊 261205）

高效液相色谱法，通常能够非常准确的实现药品中有关物质的测定。其实验较为精密，结果较为准确，所以该方法被广泛的应用于药品的有关物质测定。本文主要对该方法使用时的操作要点来进行讨论。

高效液相色谱法；药品有关物质；操作要点

有关物质是指在药物的制备和贮存过程中引入的有机杂质，它直接影响了药物的纯度，使得药物的疗效降低，还会产生其他不良反应，因此，检测有关物质、控制纯度是确保用药安全、有效，保证药物质量的一个重要方面。由于有关物质的含量较少，所以选择专属性强、灵敏度高、重现性好的检测方法至关重要。目前常用的方法是高效液相色谱法，本文主要讨论高效液相色谱法测定药品有关物质时的操作要点。

1 溶液的配置

主成分自身对照法通常情况下配置1份对照及供试溶液即可。杂质对照品的外标法最好配置2份溶液，特别是边缘产品，要多次进样。

2 系统适用性试验

该实验是药品中有关物质测定中的重要步骤，只有符合相关要求的系统适用性，才能够使得测定的结果科学而准确。系统适用性通常有4个相关的参数，其中拖尾因子、分离度、是较为重要的2个参数，在这里将进行详细的描述。

2.1 拖尾因子：通过反相HPLC法来进行药品中的有关物质测定的时候，通常都会使用峰面积，而忽视拖尾因子，但是如果拖尾因子较大，实际上是不仅导致峰面积不准确，而且还会影响杂质峰的检出，所以应对其加以关注并进行控制。

2.2 分离度：该项是药品中有关物质测定时的重要指标，除药品标准中有特殊要求外，一般情况下的主成分峰和附近杂质峰分离度应该＞1.5，否则峰面积的积分会不准确。

3 溶剂峰

溶剂峰是指高效液相色谱检测出的溶解样品所用的溶剂的峰。通常情况下供试品溶液和对照溶液都会出现这样的峰。判断是否溶剂峰，可以在基线平稳的情况下，单独进溶剂，在溶剂出峰的位置，供试品溶液是不作为杂质峰计算的。

4 色谱图记录时间

色谱图记录的时间分为两种情况，一种是按照各品种项下标准的规定时间。另一种则是没有做相应的时间规定，在此情况下就要根据主成分的保留时间来确定，其中溶剂与供试品溶液的时间记录是相同的，应该是主成分色谱峰保留时间的2倍。

5 检测灵敏度

高效液相色谱分两种数据处理系统。第一种便是积分仪，积分仪是一种较为传统的方式，因为记录仪的最大量程是一个固定值，所以要调节峰高达到满量程的范围，才可以实现灵敏度的监测。另外一种则是现在常用的色谱工作站，因为记录仪的量程是可变化的，所以调节量程和灵敏度的关系不大。其只不过是对图谱进行了放大，可以按照标准规定的要求调节，通过放大的图谱能够更为清晰的辨别供试液中的杂质峰。

6 积分参数

对于积分参数，通常情况下是按照标准的规定舍去很小的峰。（如＜0.05的峰）。如果是没有相关的要求，那么比相应的对照溶液的主峰面积小得多的峰，通常是可以忽略不计的，其最小积分参数的确定，可以通过两种方法来进行。第一种是利用紫外线、可见光检测仪来进行，以0.0005AU作为基线要求，三倍的信噪比作为浓度的检测限，那么对＜0.0015AU峰高的则不用进行积分，否则的话是要进行积分的。但是此种方法往往会产生一定的偏差，并不是十分的准确，所以可以采用下面的一种方法。第二种方法便是稀释对照溶液，通过相应溶液的配置来进行色谱系统监测限的确定，其检测限确定所使用的信噪比为3∶1，通过检测限的峰面积来确定积分的限值。

7 计 算

有关杂质限量要求通常有两种情况，一种是自身对照，一种是已知杂质的外标法计算。自身对照的表达通常有两种，就是“杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积”，和“杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的n倍（n%），”这两种都是用峰面积直接比较即可。外标法的杂质限量一般是要进行计算，根据其峰面积和浓度计算出杂质为标示量的n%，从而跟限度进行比较。

8 结 语

现代医学对于药物的安全性要求越来越高，而药品中有关物质的测定，能保证人们用药的安全有效。高效液相色谱法是药品中有关物质测定的一种常用而准确的方法，但是准确的前提是，人们在进行测定实验时能够严格按照相关操作要点来进行。在上文中进行了多个测试操作要点的分析讨论，希望可以在相关的实验上起到一定的指导作用。

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