真菌性角膜溃疡的临床实验诊断

王著玲455000河南安阳市眼科医院

真菌性角膜溃疡的临床实验诊断

王著玲
455000河南安阳市眼科医院

目的：提高临床上对于真菌性角膜溃疡的认识，做好鉴别诊断。方法：进行角膜刮片做10％KOH湿片直接镜检，再做沙氏琼脂平板培养后，根据菌落的生长特点，培养后湿片镜检，“回形针”法小培养特征，药敏纸片琼脂扩散法结果及抑菌环大小等进行分析。结果：镰刀菌最多46％，曲霉菌22％，青霉菌13％，链互隔菌10％，还有不常见的头孢子菌、无孢菌，不同菌种其药敏试验结果不相同。结论：真菌性角膜溃疡的早期确诊、正确用药对治疗至关重要。

真菌性角膜溃疡；湿片镜检；药敏试验

真菌性角膜溃疡是一种由致病真菌引起的致盲率极高的感染性角膜病变。近几年发病率逐渐增加，有的国家，真菌性角膜溃疡占感染性角膜病的近50％[1]。到目前还没有一种广谱抗真菌药物能有效治疗所有真菌性角膜病变，有效的治疗依赖于真菌菌种的准确鉴别[2-3]。对60例真菌性角膜溃疡患者进行实验室检查，现报告如下。

资料与方法

2012年10月-2014年10月收治真菌性角膜溃疡患者60例（60眼），均经10％ KOH湿片直接镜检及培养后确诊，其中男45例，女15例，年龄18～65岁。其中植物性外伤46例，沙石异物及化学烧伤6例，佩戴隐形眼镜2例，无明确原因及外伤史6例，41例患者均有使用抗生素及激素等的病史。对所有患者进行角膜刮片做10％KOH湿片直接镜检，再用角膜溃疡刮取物行沙氏琼脂平板28℃培养2～7d后有明显的菌落，显微镜下湿片镜检确认真菌菌丝及孢子，根据菌落的生长特点，培养后湿片镜检，“回形针”法小培养特征，药敏纸片琼脂扩散法结果及抑菌环大小等进行分析。

结果

60例真菌性角膜溃疡的患者中镰刀菌28例（46％），曲霉菌13例（22％），青霉菌8例（13％），链互隔菌6例（10％），还有不常见的头孢子菌、无孢菌等，湿片直接镜检均找到菌丝。镰刀菌生长迅速，初呈白色丝状，菌落呈放射状生长，逐渐长满整个平板呈棉絮状，因菌株不同，背面可呈现黄色、玫瑰红色或紫色，湿片镜检可见到大量镰刀状多分隔的大分生孢子。药敏试验：对那他霉素、龙胆紫、制霉菌素敏感，对二性霉素、碘伏、新洁尔灭中度敏感，对磺胺、氟康唑、酮康唑、三唑粉、达克宁、克霉唑耐药。曲霉菌生长快，初呈白色丝状，2d后于蓬松的菌落表面渐呈黑色（黑曲霉）或黄色（黄曲霉）细小颗粒状，镜检实为菊花状分生孢子头，平板背面常不着色。湿片直接镜检可见有隔菌丝和珠状孢子，曲霉菌特有的菊花状分生孢子头常清晰可见。药敏试验：黑曲霉对那他霉素、酮康唑、龙胆紫、三唑粉、制霉菌素敏感、两性霉素、新洁尔灭敏感，对磺胺、氟康唑、碘伏、达克宁耐药，黄曲霉对酮康唑、龙胆紫、那他霉素、三唑粉、制霉菌素、达克宁敏感，对氟康唑、克霉唑、碘伏、新洁尔灭、二性霉素耐药。青霉菌生长迅速，初呈白色丝状，约2d后菌落表面渐成青绿色、蓝绿色或葡萄酒色、铁锈色粉末状，平板背面常呈黄色或与正面相同的颜色。湿片镜检可见有隔菌丝及大量散落的珠状孢子和青霉菌特有的扫帚状、树枝状、画笔状结构。药敏试验：对酮康唑、那他霉素、龙胆紫、二性霉素、制霉菌素、三唑粉敏感，对磺胺、氟康唑、克霉唑、碘伏、新洁尔灭、达克宁耐药。链互隔菌生长很快，初呈淡黄色，然后转变为黄褐色，菌落表面呈光滑、平整的绒状，边缘不整齐，背面常呈现正面颜色，培养后期常呈现棕黑色地毯状菌落，作湿片镜检可见到砖墙形大分生孢子及孢子间连接。药敏试验：对制霉菌素、二性霉素、龙胆紫敏感，对酮康唑、三唑粉、氟康唑、达克宁中度敏感，对碘伏耐药。头孢子菌生长快，菌落表面常呈现烟灰色或灰褐色绒毛状，边缘不整齐，背面常呈现正面颜色，湿片镜检可见有隔菌丝和较大卵圆形鸡蛋样分生孢子。药敏试验：对龙胆紫、酮康唑、那他霉素、制霉菌素、达克宁、三唑粉、新洁尔灭敏感，对氟康唑、二性霉素、碘伏耐药。无孢菌生长很快，白色气生菌丝呈棉花样或绒毛样生长，常在3～5d后充满整个平板空间，作湿片镜检可见有隔菌丝交织在一起，无孢子、菌丝中间常呈现许多圆形膨大。对二性霉素敏感，对氟康唑、酮康唑、三唑粉耐药。

讨论

我国是一个农业大国，农业人口占较大比例，植物性外伤较多见，真菌性角膜溃疡患者逐年增多，已成为导致角膜盲的常见原因[4]。相对于细菌感染的病例，真菌感染更难治疗，由于临床表现较复杂，起病及病程较缓慢，早期刺激症状较轻，未能引起重视，容易引起前房积脓、角膜穿孔、眼内炎等，一般抗菌药物治疗无效时才用抗真菌药物，给临床治疗带来很大困难，给患者造成身体和心理上的极大痛苦。因此，真菌感染需要尽早诊断治疗，临床资料显示若抗真菌治疗较晚，致病菌扩散范围较大，深度较广，溃疡灶不断扩大时，真菌生长繁殖速度很快，药物治疗效果不明显，而且即使较大的溃疡灶得到了抑制，患者的视力也不一定能提高。目前，真菌性角膜溃疡的药物治疗不令人满意，不同的真菌菌属，其形态结构、生长繁殖、变异及抵抗力、致病及在组织内生长浸润方式，对抗真菌药物的敏感性等均有所不同。临床上我们常常收到很多在私人诊所治疗无效的角膜溃疡患者，由于未能及时确诊而使用了大量抗生素甚至合并激素治疗造成病情进一步加重，最后被迫进行角膜移植甚至摘除眼球，给患者的身心和经济都带来沉重负担。因此，尽早鉴定真菌的菌属对临床的治疗和用药具有重要的指导意义，应该引起临床医生的重视。

[1]SahaS,BanerjeeD,KhetanA,etal.EpidemiologicalprofileoffungalKeratitisinurban populationofWestBengal,India.OmanJ Ophthalmol,2009,（2）：114-118.

[2]FerrerC,AlioJl.Evaluationofmoleculardiagnosisinfungalkeratitis.Tenyearsofexperience.JOphthalmicInfammInfect,2011,（1）：15-22.

[3]张进,韩敏杰,骆骏.真菌性角膜炎的实验室诊断[J].长江大学学报（自然科学版）医学卷,2010,7（1）：270-273.

[4]罗知卫,李建南,李曦.真菌性角膜炎流行病学分析[J].世界中西医结合杂志,2010,（5）：778-779.

Clinicallaboratorydiagnosisoffungalcornealulcer

WangZhuling
OphthalmologicHospitalofAnyangCity,HenanProvince455000

Objective：Toimprovetheclinicalunderstandingoffungalcornealulcer,doagoodjobindifferentialdiagnosis.Methods：Do10％KOHwetfilmdirectmicroscopicexaminationwithcornealscrapings,andthendotheSabouraudagarplate culture,wetsheetmicroscopyafterincubationaccordingtothegrowthcharacteristicsofthecolonies,“Paperclip”methodof smallculturecharacteristics,theresultsofsusceptibilitydiskdiffusionmethodandbacteriostaticringsizewereanalyzed.Results：Fusariumoccupies46％ofthetotal,22％Aspergillus,Penicillium13％,alternariafunguschain10％,therewereuncommon bacteriagenussuchascephalosporium,non-sporulatingmycelia,thedrugsensitivetestresultofdifferentstrainsarenotthesame.Conclusion：Earlydiagnosisoffungalcornealulcerandpropermedicationareessentialforthetreatment.

Fungalcornealulcer；Wetsheetmicroscopy；Drugsensitivitytest

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.13.71