肺腺癌组织和血清中半乳糖凝集素-1和-3 的表达及临床意义

李 玲

(山东省临沂市肿瘤医院检验科 276001)



·临床探讨·

肺腺癌组织和血清中半乳糖凝集素-1和-3 的表达及临床意义

李 玲

(山东省临沂市肿瘤医院检验科 276001)

目的 探讨人肺腺癌组织和血清中半乳糖凝集素-1(Gal-1)、Gal-3的表达及临床意义。方法 收集手术切除的65例肺腺癌患者的癌组织和20例正常肺组织及相应血清，采用Real-time 聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其转录水平和血清水平表达变化情况，并结合相关临床病理资料进行分析。结果 肺腺癌组织中Gal-1和Gal-3 mRNA表达阳性明显高于正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA结果显示，Gal-和Gal-3在肺腺癌患者血清表达量分别为(230.7±11.3)ng和(65.3±7.8)ng；Gal-和Gal-3在正常组表达量为(120.4±9.2)ng和(34.0±5.4)ng。血清Gal-1和Gal-3在肺腺癌组织中的表达与TNM分期、淋巴结转移及分化程度密切相关(P<0.05),与患者的性别、年龄无关(P>0.05)。结论 Gal-1与Gal-3可能参与肺腺癌的TNM分期、发展和侵袭转移，其联合检测有助于提高诊断率，提示患者预后。

肺腺癌组织； 半乳糖凝集素-1； 半乳糖凝集素-3； 侵袭

目前，肺癌在我国乃至世界上发病率和病死率已位居恶性肿瘤首位，肺腺癌作为最常见的原发性肺癌之一，几乎占了原发性肺癌发病率的一半[1-2]。由于肺腺癌早期缺乏明显临床症状，在早期已发生血行转移，严重危害人类健康[3]。肿瘤的侵袭和转移往往与细胞之间的黏附密切相关，因此，研究肺腺癌发生与转移的机制具有重要意义。半乳糖凝集素家族(Galectins)是一类广泛存在于细胞核和细胞质的，相对分子质量为30×103的蛋白质，目前研究认为,半乳糖凝集素在细胞之间相互作用，在细胞黏附、增殖、凋亡和血管新生中发挥重要作用[4]。然而，关于半乳糖凝集素家族在肺腺癌中的表达和研究较少。本研究检测肺腺癌组织和血清中半乳糖凝集素-1(Gal-1)和Gal-3的表达，探讨其对肺腺癌的诊断价值和意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 组织标本均取自临沂市肿瘤医院胸外科，经手术及病理证实为肺腺癌的患者65例，男40例，女25例；平均年龄(54.40±8.2)岁；病理分期采用UICC/AJCC TNM分期第7版为标准，Ⅰ期7例，Ⅱ期21例，Ⅲ期29例，Ⅳ期8例；无淋巴转移20例，有淋巴结转移45例。另收集健康人标本20例。所有血清标本以1 000 r/min，离心10 min，取上清液保存于-80 ℃冰箱中。

1.2 试剂与方法 人Gal-1 ELISA Kit和人 Gal-3 ELISA Kit为Elabscience公司产品；TRIZOL RNA提取试剂为美国Invitrogen产品；cDNA反转录试剂盒和qPCR SuperMIX试剂盒均为北京全式金产品；PCR 8 STRIP TUBES，PCR 7500为美国ABI公司产品，MODEL-450酶标仪为BIO-RAD公司。

1.2.1 Real-time PCR 将组织液氮研磨，用TRIZOL法提取细胞总RNA，并进行反转录合成cDNA，以cDNA为模板进行相对定量实时PCR。反应参数为：第1步50 ℃ 2 min；第2步95 ℃ 10 min；第3步95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，45个循环。目的基因引物,Gal-1上游：5′-CAA ACC TGG AGA GTG CCT TC-3′,下游5′-GAT GCA CAC CTC TGC AAC AC-3′；Gal-3上游5′-TGT GCC TTA TAA CCT GCC TTT GCC C-3′,下游5′-TTC TGT TTG CAT TGG GCT TCA CCG-3′；GAPDH 上游5′-CGG ATT TGG TCG TAT TGG GC-3′，下游 5′-CTT CCC GTT CTC AGC CTT G-3′。

1.2.2 酶联免疫吸附试验(ELISA) -80 ℃冻存样品复温，以试剂盒提供的标准品绘制标准曲线，每批检测设立空白、阴性对照孔各一个，每个标本设立3个复孔。严格按照说明书进行操作。MODEL-450酶标比色仪450 nm获得吸光度(A)值。

1.3 统计学处理 采用SPSS17.0软件进行分析处理，两组间采用t检验，血清Gal-1和Gal-3测定值用中位数表示，各组差异采用秩和检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 Gal-1和Gal-3 mRNA 在肺腺癌组织中的表达变化 见图1。Gal-1和Gal-3正常肺组织与肺腺癌组织中均有表达，与正常肺组织相比，Gal-1和Gal-3在肺腺癌组织中均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。

注：N代表正常肺组织，T代表肺腺癌组织。

图1 Gal-1和Gal-3在正常肺组织和肺腺癌组织中mRNA表达水平

注：N代表正常肺组织，T代表肺腺癌组织。

图2 健康人和肺腺癌患者血清中Gal-1和Gal-3表达情况

项目nGal-1(ng/mL)PGal-3(ng/mL)P性别 男40221.9±16.890.21263.7±12.340.207 女25243.6±13.4567.3±13.12年龄(岁) <6034224.4±14.010.30162.9±12.120.212

续表1 肺腺癌患者血清Gal-1和Gal-3表达与临床病理的关系

2.2 Gal-1和Gal-3在肺腺癌血清中的表达 Gal-1和Gal-3在正常血清的阳性表达率为(120.4±9.2)ng和(34.0±5.4)ng，在肺腺癌血清中表达(230.7±11.3 )ng和(65.3±7.8)ng。Gal-1和Gal-3在肺腺癌中明显高表达，与健康人血清相比差异有统计学意义(P<0.05)，见图2。肺腺癌血清Gal-1和Gal-3水平与TNM分期、淋巴结转移和分化程度密切相关(P<0.05)，与患者性别、年龄无明显关系(P>0.05)，见表1。

3 讨 论

Gal为半乳糖结合家族蛋白，能够与含有β-半乳糖苷的糖复合物发生特异性结合，在哺乳动物中，目前已经发现16个该家族成员[5-6]。迄今已有大量研究证实Gal系通过内质网/高基体非依赖性途径进行分泌，Gal在组织和细胞中的分布十分广泛，提示其功能具有多样性。研究发现,Gal参与胚胎发育、细胞黏附、增殖、凋亡、mRNA剪接、免疫应答调控等多种生物学过程[7-8]。同时Gal还在自身免疫性疾病、变态反应、炎性反应、动脉硬化、糖尿病并发症及肿瘤的发生和发展等多种病理过程中有重要作用[9]。

Gal-1和Gal-3作为Galectins家族中2个重要亚型，通过外分泌作用在生理及病理状态下发挥重要的生物学作用，主要参与细胞的生长分化，与肿瘤细胞的黏附、迁移及血管新生密切相关[10]。目前研究显示，Gal-1和Gal-3可在胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤及淋巴瘤等各种恶性肿瘤中高表达，并且参与了肿瘤发生与发展[11-13]。本研究通过联合检测Gal-1和Gal-3在肺腺癌中组织和血清的表达，结果显示，在mRNA表达水平上，与健康人肺组织相比，肺腺癌组织明显高表达Gal-1和Gal-3，二者差异有统计学意义(P<0.05)。血清Gal-1和Gal-3结果显示，健康人血清Gal-1表达为(65.3±7.8)ng，而肺腺癌患者血清表达量为(230.7±11.3)ng，明显高于健康人分泌水平，差异有统计学意义(P<0.05)；健康人血清Gal-3表达量为(34.0±5.4)ng，肺腺癌患者血清Gal-3表达量为(120.4±9.2)ng，明显高于健康人分泌水平，差异有统计学意义(P<0.05)。与此同时，本研究还发现血清中Gal-1和Gal-3水平与肺腺癌TNM分期、淋巴结转移及肿瘤分化有密切关系。

综上所述，Gal-1和Gal-3在肺腺癌组织中和血清中均高表达，二者的高表达与肺腺癌的侵袭能力和肿瘤转移具有相关性。血清Gal-1和Gal-3对于肺腺癌的诊断具有较好的敏感性和特异性。因此，Gal-1和Gal-3有可能成为肺腺癌的重要血清标记之一。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.24.063

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1672-9455(2015)24-3761-03

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