红花黄色素对脑出血大鼠相关因子的影响及其保护机制研究

李金库，王 闯(牡丹江医学院红旗医院 神经外科，黑龙江 牡丹江 570)



红花黄色素对脑出血大鼠相关因子的影响及其保护机制研究

李金库1，王 闯2
(牡丹江医学院红旗医院 神经外科，黑龙江 牡丹江 157011)

目的：观察红花黄色素对脑出血大鼠脑相关因子含量的影响，研究其保护作用机制。方法：将75只Wistar大鼠随机分为假手术组、对照组、治疗组，每组25只。在4h、16h、1d、3d、5d时分别检测脑组织周围肿瘤坏死因子(TNF-α)含量及血清C反应蛋白(CRP)含量变化。结果：治疗组在红花黄色素的作用下通过5个时间点检测显示，大鼠脑组织周围TNF-α含量表达和血清CRP含量以及脑水肿的程度较对照组低，差异具有统计学意义(P<0.01)。结论：红花黄色素能够降低脑出血大鼠脑组织中TNF-α含量和血清CRP含量，并有减轻脑水肿的作用。

红花黄色素；脑出血；TNF-α；CRP；脑水肿

脑出血(intracerebral hemorrhage，ICH)是神经外科常见病和多发病，其死亡率和致残率高、预后较差的特征通常困扰着临床医生。其本质为脑实质内部的出血，多为中、老年人高发[1],但是导致脑水肿的发病机制仍未知，有学者认为与炎性因子的产生有关，如肿瘤坏死因子TNF-α。尽管脑外科通常以手术为主取出血肿或者止血等，但造成损伤较大，不适合高龄病患，因此，保守治疗迄今为止仍是热点研究课题。

红花黄色素为菊科植物红花的主要功能成分，归属于查尔酮类，是羟基红花黄色素A经过分离提纯手段得到的药物。其具有扩张冠状动脉、改善心肌缺血、抗脑缺血、保护神经细胞等作用，另外也有抑制血小板聚集、抗氧自由基、抗肿瘤、提高机体免疫功能等多种药理作用[2]。C反应蛋白(CRP)在脑出血患者的血液和脑脊液中均有不同程度升高，与病程的缓急和轻重正相关，是临床评估脑出血程度的指标之一[3]。

1 材料与方法

1.1 主要器材与试剂

鼠脑立体定位仪(江湾C型)；7200型紫外分光光度计(上海仪器有限公司)；放射免疫分析仪(西安楚天仪器厂)；5YU-5656酶标仪(西安楚天仪器厂)；冷冻离心机(Sigma，3K30)；玻璃匀浆器；50μL微量注射器(哈尔滨海霞仪器集团)；放免TNF-α试剂盒(TNF-α，批号123-TY2)、C反应蛋白测定试剂盒(西安天盟试剂有限公司，批号XXC-7788)。

1.2 动物

Wistar大鼠75只,体重(215±3.5)g,雌雄不限,由黑龙江中医药大学提供,随机分为假手术组、对照组、治疗组，每组25只。参照牛国忠和王景周[4]的造模方法: ①10%水合氯醛(400mg/kg)腹腔麻醉；②俯卧位固定于立体定位仪上,在头至后颈部正中线切开皮肤长度1.5cm,用钝性分离方法暴露前囟,选择在尾状核注入；③距鼠尾末端约2cm处剪断,取尾血50μL,先注入10μL,停针2min后缓慢注入剩余40μL,2min后退针1.5cm停留7min后缓慢将针完全退出。假手术组按照上述方法手术但不造模；治疗组在对照组处理的基础上每日腹腔注射红花黄色素1次,剂量为25mg/10g。

1.3 检测方法

在4h、16h、1d、3d、5d的时间点，分别对假手术组、对照组、治疗组小鼠各5只尾静脉取血后，应用ELISA法检测血清中CRP含量；之后乙醚麻醉大鼠,断头处死,迅速取脑部出血部位组织进行研磨、离心等处理后，应用放射免疫法 (RIA)按试剂盒内的说明操作测定TNF-α含量；同时测脑含水量(%)=(湿重—干重)/湿重×100%。

1.4 数据处理

2 结果

从表1中可知，对照组TNF-α表达较假手术组显著增高，而治疗组低于对照组(P<0.01)，有显著差异性。说明红花黄色素可以抑制TNF-α表达从而对脑出血损伤产生保护性作用。从表2可以看出，对照组CRP含量较假手术组显著增高，在治疗组中含量低于对照组(P<0.01)，有显著差异性，说明红花黄色素通过某种途径可以保护出血的脑组织。表3中数据显示对照组鼠脑含水量较假手术组显著性增加(P<0.01)，而经过给予红花黄色素治疗后脑含水量明显降低(P<0.01)，进一步说明该药物有减轻脑水肿，保护脑组织的作用。

表1 各组大鼠脑出血部位脑组织TNF-α含量变化

注：与对照组相比较，*P<0.01；与假手术组相比较，**P<0.01。

表2 各组大鼠血清中CRP含量变化

注：与对照组相比较，*P<0.01；与假手术组相比较，**P<0.01。

表3 各组大鼠脑含水量比较

注：与对照组相比较，*P<0.01；与假手术组相比较，**P<0.01。

3 讨论

当脑出血发生后，局部血肿压迫可导致脑组织周围炎症反应发生，病灶中出现较多中性粒细胞浸润，同时可以释放多种细胞因子，造成组织损伤例如TNF-α等[5]。本研究结果显示，红花黄色素可抑制TNF-α表达，有减轻脑水肿、保护脑组织的作用。由此可见，我们有望通过大量实验研发出一种新型治疗脑出血的良药，为广大患者排除疾病。

[1] MD P V P,MD L E,J.Claude Hemphill III MD M.Intracerebral Hemorrhage[J].Neurocritical Care,2004,1(1):5-18.

[2] TAKAHASHI Y,MIYASSAKA N,TASAKA SH,et al.Constitution of two coloting matters in the flower petals of carthamus tinctorius L[J].Tetrahedron Lett,2012,23(49):5163.

[3] HERGENROEDER D G W,REDELL J B,MOORE A N,et al.Biomarkers in the clinical diagnosis and management of traumatic brain injury[J].Molecular Diagnosis & Therapy,2008,12(6):345-358.

[4] 王景周,周中和,李玮,等.大鼠脑出血血肿周边组织细胞凋亡的动态变化规律研究[J].中国临床神经科学,2003,11(2):124-127.

[5] M X,MR D B.Intracerebral injection of autologous whole blood in rats: time course of inflammation and cell death[J].Neuroscience Letters,2000,283(3):230-232.

(责任编辑：魏 晓)

2015-03-15

李金库(1983-)，男，牡丹江医学院红旗医院住院医生，硕士，研究方向颅脑相关疾病实验研究。

R285.5

A

1673-2197(2015)15-0031-02

10.11954/ytctyy.201515012