加压提取对皂苷类成分体外抗氧化及抑菌活性的影响

廖乐乐吴丽霞李 敏唐干益

1.深圳市流花医院药剂科，广东 深圳 518002；2.深圳市龙华新区观澜人民医院药剂科，广东 深圳 518000

加压提取对皂苷类成分体外抗氧化及抑菌活性的影响

廖乐乐1吴丽霞2李 敏1唐干益1

1.深圳市流花医院药剂科，广东 深圳 518002；2.深圳市龙华新区观澜人民医院药剂科，广东 深圳 518000

目的：探讨采用加压提取技术提取中药中皂苷类成分对于其苷类成分体外抗氧化及抑菌活性的影响程度。方法：选取三七、黄芪、柴胡、甘草四味中药作为研究对象，分别采取加压提取技术和加热回流提取技术来提取药材中的皂苷类成分，比较两种提取方式对药材皂苷类成分体外抗氧化及抑菌活性的影响。结果：加压提取工艺与加热回流提取工艺相比，四种中草药提取物对DPPH自由基的清除率略有提高，但差异无统计学意义 （P＞0.05）；加压提取法对四种中草药皂苷类抑菌活性的影响明显小于加热回流提取法，差异具有统计学意义 （P＜0.05）。结论：加压提取工艺对中草药皂苷类成分中的抗氧化活性和抑菌活性并无明显影响且耗时短，值得推广应用。

加压提取；加热回流提取；皂苷类；抗氧化；抑菌活性

皂苷类成分，实质上就是知母、柴胡、白头翁以及地榆等一系列中药材中非常重要的组成部分。现代药理学研究中明确提出，皂苷类成分具备的药理作用较为广泛，包括抗肿瘤、抗病毒、消炎、增强免疫力、抗衰老以及降血脂等，主要在于皂苷类成分能够对自由基活性产生抑制作用，具备较强的抑菌作用与抗氧化作用。本文主要探讨了加压提取对皂苷类成分体外抗氧化及抑菌活性的影响，以期为中草药皂苷类成分提取工作提供参考依据。现将研究资料予以总结归纳，兹述如下。

1 资料与方法

1.1 仪器与材料 以中药材市场选购的三七、黄芪、柴胡、甘草四味中药作为研究对象。

实验器材：RE-52型旋转蒸发仪（上海之信仪器有限公司生产）；ZXRD-A5110型干燥箱（上海智城分析仪器制造有限公司生产）；SpectroArt200型紫外分光光度仪（美国威泰克生物科技股份有限公司生产）；ZXSP-A0430型生化培养箱（上海智城分析仪器制造有限公司生产）；ASE200型溶剂加速提取仪（美国Dionex公司生产）；Tissuelyser-48型样品研磨机 （上海净信实业发展有限公司生产）；Model500高效液相色谱仪（杭州海普科技有限公司生产）。

试验药剂：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和四联球菌（均由本市人民医院药剂实验室提供）；DPPH［1，1 -二苯基-2-三氨基苯肼］；超纯水；乙醇 （色谱纯）。

1.2 实验方法

1.2.1 加压提取工艺提取方法 取三七干燥并粉碎成粗粉，取40g，同400ml蒸馏水先后置入加压提取装置，密封加压提取器，将其温度设定为110℃、压力值＜0.3MPa，加压浸提0.5h，取出135ml浓缩液，水提醇沉浓度至60%后静置，取上清液，挥干处理。其它三种中草药的皂苷类成分提取方式同上述方式一致。

1.2.2 加热回流提取工艺提取方法 取三七干燥并粉碎成粗粉，取40g，以回流法提取3次，每次加入200ml蒸馏水，首次2h，后两次均为1h。合并滤液，水提醇沉浓度至60%后静置，取上清液后挥干处理。其它三种中草药的皂苷类成分提取方式同上述方式一致。

1.3 观察指标 ①抗氧化活性：取备用提取物，加甲醇稀释，摇匀待测。分别配制为2.5minDPPH+1.5ml甲醇溶液（测定溶液吸光度：A0）、2.5mlDPPH+1.5ml待测样品甲醇溶液（测定溶液吸光度：A1）及2.5ml甲醇+1.5ml待测样品甲醇溶液 （测定溶液吸光度：A2）。室温下静置0.5h，于517nm波长处测定吸光度，取3次平均值。清除率计算公式：Y=［1-（A1-A2）/A0］×100%；②抑菌活性：制备菌悬液和培养基，在培养基上等距离打孔并注入药液，置入37℃恒温培养箱内18～24h后取出，测定抑菌圈直径，并以此作为其抑菌效果的判定依据。

1.4 统计学方法 采取统计学软件SPSS22.0对上述两种皂苷类成分提取方法的各项记录数据予以分类和汇总处理，计量资料以 （±s）表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 抗氧化活性 加压提取工艺与加热回流提取工艺相比，四种中草药提取物对DPPH自由基的清除率略有提高，但差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 四种中草药提取物对DPPH自由基的清除率比较 ±s）

表1 四种中草药提取物对DPPH自由基的清除率比较 ±s）

91.4±9.9 39.8±5.5 91.8±10.2 30.0±4.3加热回流提取 91.2±10.4 42.2±5.2 91.2±9.8 36.6±5.2 t 1.54 0.55 0.07 1.69 P提取方法 三七 黄芪 柴胡 甘草加压提取0.20 0.61 0.95 0.17

2.2 抑菌活性 加压提取法对四种中草药皂苷类抑菌活性的影响明显小于加热回流提取法，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两种提取方法对四种中草药皂苷类抑菌活性的影响 （mm，±s）

表2 两种提取方法对四种中草药皂苷类抑菌活性的影响 （mm，±s）

注：与加热回流提取方式相比较，*P＜0.05，#P＜0.01。

提取方法 中草药抑菌圈直径大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 枯草杆菌 四联球菌三七 16.5±3.2* 15.1±4.2* 16.2±3.5* 15.2±3.3加压提取*黄芪 4.9±1.2* 5.8±1.3# 4.8±0.4# 6.7±1.3*柴胡 13.8±2.2* 13.2±2.4* 12.2±2.4* 13.0±2.2*甘草 8.8±1.2* 7.1±1.8* 7.2±1.5* 8.0±1.2加热回流提取* 12.0±2.2 10.0±2.1 9.2±2.3 9.5±2.9三七 18.1±4.1 16.0±5.1 17.2±4.3 17.1±3.5黄芪 8.8±2.3 8.9±2.2 8.7±1.3 7.6±2.5柴胡 14.3±2.3 13.2±1.5 12.0±1.8 14.1±3.1甘草

3 讨论

皂苷类成分常见于中草药，因该种成分具有较强的抗氧化作用和抑菌活性［1］，故而含有皂苷类成分的中草药也秉存特殊的药理作用，诸如桔梗中的皂苷类成分可排脓消痈，三萜皂苷类成分有抗衰老功效［2］。随着医疗技术的发展及皂苷类成分于医学临床应用范围的扩大，如何确保中草药皂苷类成分体外抗氧化及抑菌活性在不受影响的前提下得以提取则成为了当前医药研究领域亟待解决的课题之一。基于此研究背景［3］，本文选取了常见的四味中草药用于实验，并以提取物对DPPH自由基的清除率和抑菌试验结果作为两种提取方式对皂苷类成分体外抗氧化及抑菌活性的影响的判定依据。

结果显示，采取加压提取工艺提取的四味中草药提取物对DPPH自由基的清除率同加热回流提取工艺相比，差异无统计学意义（P＞0.05），与一般研究结果一致。可见，加压提取工艺与加热回流提取工艺一样，对四味中草药皂苷类成分抗氧化活性［4］。分析其原理，可能在于加压浸提温度设置值高于溶剂沸点时，后者溶解能力会因此而增强，进而增加中草药中抗氧化活性成分的含量［5-6］。

比较两种提取工艺对四味中草药皂苷类成分抑菌活性的影响程度，其中，黄芪皂苷类成分对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌的抑制作用受提取方式影响，加压提取法较之于加热回流提取法抑菌活性有所下降［7］，整体而言，比较有统计学意义，说明有影响。究其原因，缘于加压提取工艺虽然是在超过溶剂沸点的条件下进行，但是并没有对中草药中皂苷类成分中具有抑菌作用的结果造成破坏［8］。

由上可知，加压提取工艺同加热回流提取工艺具有同样的应用效果，对中草药中皂苷类成分体外抗氧化及活性并不会造成显著影响，说明两者均具有应用价值。但是回顾性分析两种工艺开展的各项因素，联系上文可知，加压提取工艺提取方法完成时间较短，且操作步骤简便易行，而加热回流工艺提取方法耗费时间较长，至少需5h，且操作步骤较之于前者更为繁琐。综上所述，比较两种提取方式对皂苷类成分体外抗氧化及抑菌活性的影响程度及操作性出发，加压提取工艺具有其独有优势，是一种可推广的提取技术。

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R284.2

A

1007-8517（2015）23-0020-02

2015.08.31）

深圳市宝安区2012年科技计划社会公益项目：加压提取三七皂苷的工艺开发及其抗氧化性活性研究 （编号：2012277）。