不同生长期猪源大肠埃希菌年度耐药趋势分析

夏利宁，夏绪进，程伟华，帕力达·亚森，蔡建星

（新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐830052）

猪大肠杆菌病是造成规模化猪场经济损失的主要疾病之一。由于大肠埃希菌血清型多且复杂，目前没有理想疫苗来预防大肠杆菌病，对其治疗多采用抗菌药物；加之大肠埃希菌是革兰阴性菌中最易产生耐药性的细菌，导致耐药大肠埃希菌越来越普遍［1］，不但消弱临床疗效，造成大量药物残留和毒副作用，而且耐药细菌有在动物和人之间传播的风险，对人类健康造成潜在威胁，已引起全球关注［2］。目前，国内很多省市如广东［3］、安徽［4］、西南地区［5］、新疆［6-7］等地对不同来源如禽源［3，8-10］、猪 源［4］、牛源［6］、羊源［7］大肠埃希菌的耐药情况进行调查，结果显示不同地区不同来源大肠埃希菌对抗菌药物的耐药情况不同，且多数研究表明大肠埃希菌的耐药率呈现升高的趋势。尽管耐药性研究很多，但鲜见对不同生长期动物源大肠埃希菌耐药趋势研究的相关报道。本试验以2013年新疆某规模化猪场不同生长期猪源大肠埃希菌为研究对象，对其进行临床常用抗菌药物的药敏试验。获取的数据与2010年本实验室在该养殖场对应生长期猪源大肠埃希菌的数据进行比较，分析新疆不同生长期猪源大肠埃希菌年度耐药规律，找出治疗细菌病的有效途径，从而为有效控制细菌耐药提供可能。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源 2013年5月在新疆乌鲁木齐某规模化猪场位于昌吉市、呼图壁县和玛纳斯县的3个分场采集猪粪样，其中哺乳仔猪粪样240份，保育猪粪样237份，妊娠猪粪样150份，从中分离大肠埃希菌；大肠埃希菌标准质控菌（ATCC25922）为杭州天和微生物试剂有限公司提供。

1.1.2 试剂和药品 Mueller-Hinton（MH）培养基、麦康凯培养基、伊红美蓝培养基和普通肉汤培养基为北京奥博星生物技术有限公司产品；β-内酰胺类：头孢噻呋（含量100%）、氨苄西林（含量86.5%）和阿莫西林（含量86.6%）／克拉维酸（含量100%）；氨基糖苷类：庆大霉素（含量99.5%）、安普霉素（含量55.8%）和阿米卡星（含量65.5%）；喹诺酮类：环丙沙星（含量100%）、诺氟沙星（含量99.6%）和恩诺沙星（含量100%）。上述药品均为标准品，购自中国兽医药品监察所。

1.2 方法

1.2.1 药物敏感性试验 按美国临床实验室标准委员会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）推荐的微量肉汤稀释法进行，对分离的大肠埃希菌进行上述9种抗菌药物最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）值测定，结果判定参照CLSI（2010；2012）标准。

1.2.2 统计分析 耐药率差异统计采用SPSS 20软件进行卡方检验。

1.2.3 对比分析 采用SPSS 20软件对本试验耐药结果和2010年［11］本实验室对该养殖场进行监测的耐药结果进行差异性分析。

2 结果

2.1 大肠埃希菌的分离率

本试验中各生长期猪粪源大肠埃希菌的分离率均为100%。

2.2 不同生长期猪源大肠埃希菌药耐药结果及耐药性比较

从表1可知，哺乳仔猪源菌主要对阿莫西林／克拉维酸、庆大霉素、氨苄西林、恩诺沙星和环丙沙星具有较高的耐药率，耐药率分别为90.8%、87.9%、84.6%、82.9%和81.3%，对头孢噻呋（25.8%）和安普霉素（20.0%）耐药率较低；保育猪源菌对恩诺沙星、环丙沙星、阿莫西林-克拉维酸、庆大霉素、诺氟沙星、氨苄西林明显耐药，耐药率分别为95.8%、92.8%、82.7%、80.2%、78.0%和76.8%，对安普霉素、阿米卡星和头孢噻呋敏感性较高，耐药率分别为21.1%、12.7%、5.0%；妊娠猪源菌对阿莫西林／克拉维酸、氨苄西林、恩诺沙星、庆大霉素、环丙沙星、诺氟沙星的耐药率分别为90.7%、75.3%、74.0%、66.0%、53.3%、50.1%；而对阿米卡星、安普霉素、头孢噻呋较敏感，耐药率分别为23.3%、10.7%、8.7%。

采用SPSS 20对不同生长期猪源大肠埃希菌的耐药率进行卡方检验比较发现，哺乳仔猪源菌和保育猪源菌除对诺氟沙星和安普霉素外，对其他药物耐药性均存在显著差异（P＜0.05）；哺乳仔猪源菌和妊娠猪源菌除对阿莫西林／克拉维酸外，对其他药物耐药性均存在显著差异（P＜0.05）；妊娠猪源菌和保育猪源菌除对头孢噻呋和氨苄西林外，对其他药物耐药性均存在显著性差异（P＜0.05）。

表1 不同生长期猪源大肠埃希菌对被检药物的耐药率比较Table 1 Comparison of resistance rate of E.coli from the pigs at different growth stages to detected drugs

2.3 不同生长期猪源大肠埃希菌多药耐药结果

哺乳仔猪源菌多药耐药以7耐（28.3%）、6耐（17.9%）和 5 耐（13.8%）为主，占 60.4%（145／627），5耐及5耐以上达77.5%；保育猪源菌多药耐药以6耐（41.4%）、5耐（20.7%）和7耐（11.4%）为主，占73.4%（174／627），5耐及5耐以上达78.5%；妊娠猪源菌以6耐（21.3%）、4耐（20.67）和3耐（14.0%）为主，占56.0%（84／627），5耐及5耐以上达49.3%。多耐具体数值参见表5中2013年多耐数据。

2.4 2010年和2013年不同生长期猪源大肠埃希菌耐药趋势比较

采用SPSS 20对不同生长期猪源大肠埃希菌耐药趋势进行卡方检验分析，详见表2、表3和表4。

由表2可知，2010年和2013年哺乳仔猪源菌对环丙沙星、阿米卡星和阿莫西林／克拉维酸等3种抗菌药物的耐药率极显著升高（P＜0.01）；而对诺氟沙星、恩诺沙星、头孢噻呋和氨苄西林无显著性变化（P＞0.05）；仅对安普霉素的耐药率极显著降低（P＜0.01）。

由表3可知，2010年和2013年保育猪源菌对环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星的耐药率极显著升高（P＜0.01）；对阿莫西林／克拉维酸和氨苄西林的耐药率无显著性变化（P＞0.05）；而对安普霉素、阿米卡星和头孢噻呋的耐药率极显著降低（P＜0.01）。

由表4可知，2010年和2013年妊娠猪源菌对环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、阿米卡星、阿莫西林／克拉维酸和安普霉素的耐药率极显著升高（P＜0.01）；仅对安普霉素和头孢噻呋的耐药率无显著性变化（P＞0.05）。

2.5 2010年和2013年不同生长期猪源大肠埃希菌多药耐药结果

不同生长期猪源大肠埃希菌多药耐药结果详见表5。由表5可知，2010年和2013年不同生长期猪源大肠埃希菌多药耐药呈上升趋势。哺乳仔猪由5耐（23／83，27.7%）上升为以7耐（65／240，27.1%）为主，保育猪由5耐（25／80，31.3%）上升为以6耐（101／237，42.6%）为 主，妊 娠 猪 由 0 耐（30／83，36.1%）上升为以6耐（32／150，21.3%）为主。

3 讨论

3.1 不同生长期猪源大肠埃希菌对被检抗菌药耐药结果分析及趋势比较

不同生长期猪源大肠埃希菌对被检抗菌药物均有不同程度的耐药，其中哺乳仔猪大肠埃希菌的耐药问题最为严重，尤其对目前应用时间较长的抗菌药物，如阿莫西林／克拉维酸、庆大霉素、氨苄西林、恩诺沙星和环丙沙星的耐药率都超过80.0%，而对头孢噻呋和安普霉素的耐药率仅为20.0%。结果与本实验室2010年对该养殖场的调查结果相比，均表现为哺乳仔猪源菌耐药最严重，其次为保育猪源菌，妊娠猪源菌耐药率最低；比较发现，妊娠猪源菌对被检抗菌药物的耐药率上升最为明显，对6种抗菌药物的耐药率极显著上升（P＜0.01）。哺乳仔猪主要对3种抗菌药物的耐药率极显著上升（P＜0.01），仅对安普霉素的耐药率极显著下降（P＜0.01）。保育猪对3种喹诺酮类药物的耐药率极显著性上升（P＜0.01），对2种氨基糖苷类药物的耐药率显著下降（P＜0.01）。

表2 2010年和2013年哺乳仔猪源大肠埃希菌对被检抗菌药耐药率比较Table 2 Comparison of resistance rate of E.coli from the sucking piglets to detected drugs in 2013and 2010 %

表3 2010年和2013年保育猪源大肠埃希菌对被检抗菌药耐药率比较Table 3 Comparison of resistance rate of E.coli from the nursery pig to detected drugs in 2013and 2010 %

表4 2010年和2013年妊娠猪源大肠埃希菌对被检抗菌药耐药率比较Table 4 Comparison of resistance rate of E.coli from the pregnant pig to detected drugs in 2013and 2010 %

表5 2010年和2013年不同生长期猪源大肠埃希菌多药耐药结果Table 5 The results of multidrug resistance rate of E.coli from the pigs at different growth stages in 2013and 2010 %

分析发现，耐药情况最轻的妊娠猪源菌，其对被检抗菌药物的耐药率上升最为明显；耐药问题最严重的哺乳仔猪除对安普霉素极显著下降和对环丙沙星极显著上升外，对其他抗菌药物的耐药率无显著性变化（仍然保持较高的耐药率）；而保育猪主要表现为对氨基糖苷类药物耐药转变为对喹诺酮类药物耐药。造成这一现象的原因可能是多方面的，通过对该养猪场进行调研发现，其在2010年以后已经改用喹诺酮类药物代替氨基糖苷类药物联合β-内酰胺类药物进行细菌性疾病的防治，这或许是保育猪对喹诺酮类药物耐药率显著升高，而对氨基糖苷类药物耐药率显著降低的主要原因；也可能是哺乳仔猪对环丙沙星耐药率显著上升，而对安普霉素的耐药率显著下降的原因。此外，由于哺乳仔猪抵抗力低，易发病，使用各种抗菌药物的频率较高，因此其对抗菌药物的耐药问题最为严重。妊娠猪由于饲养周期最长，可能接触抗菌药物的时间最久，相应的抗菌药物在其体内残留问题最为突出，因此其耐药率上升最为明显。该现象也给我们以重要提示：对处于保育时期的青年猪改变用药方案可有效降低大肠埃希菌对抗菌药物的耐药性。

3.2 不同生长期猪源大肠埃希菌对被检抗菌药物多药耐药结果及趋势分析

多药耐药结果分析发现哺乳仔猪源菌主要以7耐菌株为主，保育猪源菌以6耐为主，妊娠猪源菌6耐最多。对比2010年耐药结果，哺乳仔猪及保育猪源菌均以5耐居多，而妊娠猪源菌多药耐药以0耐为主。表明2013年该猪场不同生长期猪源菌多药耐药数增加明显。此外发现哺乳仔猪源菌的耐药问题非常严重，7耐菌株接近30.0%；并检出10株哺乳仔猪源菌对被检抗菌药物都耐药的菌株，占4.2%。通过对该场生产实际用药情况调研发现，哺乳仔猪抵抗力低易发病，其抗菌药物使用特点为频率高和种类多，故其对上述被检抗菌药物的耐药性最严重。此外，养殖场为避免哺乳仔猪发病带来的经济损失，将抗菌药物作为添加剂混入饲料和饮水中作为预防性用药，再次加快细菌对抗菌药物耐药性的产生。这可能是造成哺乳仔猪源菌多药耐药问题严重的主要原因。

3.3 不同生长期猪源大肠埃希菌与国内其他地区耐药情况分析

国内大部分地区猪源大肠埃希菌对抗菌药物的耐药情况已十分严重。以喹诺酮类药物为例，耐药情况最为严重的为河南地区（集中在87.0%～96.0%）［12］；其次为广东地区（约87.5%）［13］和西南地区（集中在62.0%～65.8%）［5］；耐药情况最轻的是保定地区（在8.0%～23.0%之间）［14］。本研究与我国其他地区猪源菌耐药情况相比，耐药问题最为严重的是保育猪，其对喹诺酮类药物的耐药率在78.0%～95.8%之间；其次为哺乳仔猪，对喹诺酮类药物的耐药率主要集中在71.3%～82.9%；耐药问题最轻的是妊娠猪，对喹诺酮类药物的耐药率在53.3%～74.0%之间。全国范围内猪源大肠埃希菌对抗菌药耐药问题十分严重的主要原因是在生产中用药不规范、疗程不当、用量不足，长期使用同一类药物或长期在饲料、饮水中加入预防性用药，均可使细菌产生抗药性［15］。

该规模化养殖场2013年不同生长期猪源大肠埃希菌对被检抗菌药物（除安普霉素）的耐药率明显高于2010年；此外，哺乳仔猪源大肠埃希菌对头孢噻呋和阿米卡星的耐药率上升趋势明显，提示该养殖场谨慎使用上述抗菌药物，治疗细菌性疾病时应联合／交替使用敏感的抗菌药物。

［1］Aarestrup F M，Oliver D C，Burch D G.Antimicrobial resistance in swine production［J］.Anim Health Res Rev，2008，9（2）：135-148.

［2］Daves P R.Intensive swine production and pork safety［J］.Foodb Pathog Dis，2011，8（2）：189-201.

［3］张业怀，凌 丁，谢燕妮，等.规模化蛋鸡养殖场大肠埃希菌耐药性调查［J］.广东农业科学，2013（5）：107-109.

［4］阮祥春，曾明华，黄媛媛.安徽省部分地区致病性大肠埃希菌耐药性分析［J］.安徽农业大学学报，2013，4（3）：430-433.

［5］曾 博，王红宁，邹立扣，等.西南地区猪肠外大肠埃希菌毒力基因检测及耐药性研究［J］.中国预防兽医学报，2013，35（4）：127-129.

［6］南海辰，郭庆勇，夏利宁，等.新疆伊犁某牛场大肠埃希菌耐药性调查［J］.中国畜牧兽医，2014，41（8）：232-235.

［7］夏利宁，向 发，罗小鱼，等.新疆某羊场分离的大肠埃希菌对抗生素耐药性调查［J］.新疆农业科学，2014，51（1）：150-156.

［8］李宏伟，汪 洋，张 蕾，等.洛阳地区禽源大肠埃希菌分离鉴定与耐药性分析［J］.动物医学进展，2013，34（6）：196-198.

［9］蒋 月，盛鹏飞，张秀英.辽宁锦州地区家禽大肠埃希菌耐药性研究［J］.动物医学进展，2013，34（11）：85-88.

［10］王利勤，王晶钰，董 睿，等.鸡源致病性大肠埃希菌中氨基糖苷类抗生素耐药基因的检测［J］.动物医学进展，2012，33（7）：49-53.

［11］夏利宁，赵红琼，米克热木·沙衣布扎提，等.新疆某猪场不同生长期的猪源大肠埃希菌对抗生素耐药性调查［J］.中国畜牧兽医，2013，40（3）：216-219.

［12］杜向党，焦显芹，陈玉霞，等.河南地区鸡猪源大肠埃希菌的耐药性监测［J］.江西农业大学学报，2008，30（12）：956-959.

［13］郭潇木，杨 铜，贺丹丹，等.广东地区猪源大肠埃希菌耐药性及其系统发育群的研究［J］.中国畜牧兽医，2014，4（1）：182-186.

［14］赵晓静，高 婕，宋勤叶，等.保定地区规模化猪场大肠埃希菌耐药性调查与分析［J］.疾病预防，2013，10（13）：92-93.

［15］唐一鸣.猪源大肠埃希菌和沙门氏菌耐药表型与基因型的研究［D］.浙江杭州：浙江大学，2010.