利用产脂肪酶B的毕赤酵母工程菌生物拆分制备西司他丁关键手性中间体的体系优化

郑 磊，何军邀，2，黄 金，王 普

（1.浙江工业大学 药学院，浙江 杭州 310032；2.浙江医药高等专科学校，浙江 宁波 315100）

利用产脂肪酶B的毕赤酵母工程菌生物拆分制备西司他丁关键手性中间体的体系优化

郑 磊1，何军邀1，2，黄 金1，王 普1

（1.浙江工业大学 药学院，浙江 杭州 310032；2.浙江医药高等专科学校，浙江 宁波 315100）

S-（+）-2，2-二甲基环丙烷甲酸（S-（+）-DMCPA）是合成西司他丁的关键手性中间体。构建的毕赤酵母工程菌生产的脂肪酶可高选择性催化外消旋2，2-二甲基环丙烷甲酸乙酯（DMCPE）不对称水解制备S-（+）-DMCPA。对该工程菌产胞外脂肪酶的产酶条件及生物拆分反应条件进行优化，以提高其催化效率。优化获得重组毕赤酵母最佳产酶条件：采用BMMY培养基，培养基初始pH 8.0，500mL摇瓶装50mL培养基，每隔4 h向培养基中补加终体积分数为1%的甲醇。培养192 h后，发酵液中脂肪酶比酶活为4.41 U/L，较优化前提高了90.9%。利用含脂肪酶的发酵上清液进行DMCPE的生物拆分反应，底物浓度为15mmol/L，30℃反应36 h，S-（+）-DMCPA的产率可达43.8%，e.e.值为99.8%。

西司他丁；毕赤酵母；脂肪酶；S-（+）-2，2-二甲基环丙烷甲酸；生物拆分

西司他丁是第一个应用于临床的肾脱氢二肽酶抑制剂，S-（+）-2，2-二甲基环丙烷甲酸（S-（+）-DMCPA）是合成西司他丁的关键手性中间体［1-2］。目前，西司他丁手性中间体主要通过化学法合成，但存在污染大、合成条件苛刻等缺点［3-4］。由于生物催化法具有反应条件温和、立体选择性高和环境污染小等优点，将其应用于药物手性中间体的合成已逐渐成为研究热点［1］。Wang等［5］从土壤中筛选得到可不对称水解2，2-二甲基环丙烷甲腈制备S-（+）-2，2-二甲基环丙烷甲酸的菌株Rhodococcus sp.AJ270，产率达44%，e.e.值为88%。……