CD133与VEGF蛋白在卵巢癌中的表达及意义

CD133与VEGF蛋白在卵巢癌中的表达及意义

孙志强 任洪波 段爱红 申自玮 马 英 郭 燕

目的运用免疫组化法检测CD133和VEGF蛋白在卵巢癌中的表达，并分析它们与临床病理参数的相关性及生物学意义。方法采用免疫组化法检测60例上皮性卵巢癌组织中CDl33及VEGF的表达情况。结果（1）随卵巢癌分化程度降低，CD133及VEGF的阳性表达率增高，三组间比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。（2）Spearman相关性分析显示CD133表达与VEGF的表达呈正相关（r＝0．663，P＜0．05）。结论CDl33及VEGF的表达与上皮性卵巢癌的恶性程度有相关性，且两因子间呈正相关。

卵巢癌；VEGF；CDl33；免疫组织化学

卵巢癌是女性的常见恶性肿瘤之一，起病隐匿，多数患者至晚期确诊，近年来随着肿瘤细胞减灭术满意度不断提高及术后辅助治疗的不断提高、完善，五年生存率有所提高，但仍徘徊在30%～50%。本课题通过免疫组织化学法检测上皮性卵巢癌组织中CDl33与VEGF（vascular endothefial growth factor，血管内皮生长因子）蛋白的表达，探讨两者在上皮性卵巢癌发生、发展中的生物作用及应用价值，进一步探索两者与卵巢癌的关系，为卵巢癌的早期诊断、治疗及预后提供理论指导。

1 材料与方法

1.1 研究对象

收集2007年1月～2012年12月在河北省邯郸市中心医院妇科就诊的上皮性卵巢癌患者共60例。60例患者行卵巢癌全面分期手术或肿瘤细胞减灭术，且患者术后均经病理确诊，其临床病历资料具有完整性。患者年龄30～72岁，浆液性腺癌22例，黏液性腺癌21例，宫内膜样癌17例。按组织学分级G1、G2、G3分别为19例、21例、20例。本研究的60例患者在术前均未进行放疗、化疗及生物治疗。

1.2 方法

标本常规用10%福尔马林液固定，石蜡法包埋，切片厚度4 μm，然后用免疫组化法染色。抗人CDl33多克隆抗体购自上海基因有限公司（工作浓度1：350稀释，浓缩型），抗人VEGF单克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司（工作浓度1：150稀释，浓缩型）。

1.3 判断标准

胞膜和胞浆内有棕黄色颗粒为CDl33蛋白阳性判断标准。于400×高倍镜下每张切片随机选取10个视野，每个视野中计数100个癌细胞中的阳性个数，并计算平均阳性细胞的百分比。阳性细胞＞10%定为阳性，阳性细胞＜10%或者癌细胞全不着色定为阴性。

VEGF染色后阳性表现为境界清晰的棕黄色或棕褐色颗粒，以细胞浆内存在为主。以胞核、胞浆均无着色或单纯核膜着色，无胞浆着色定为阴性；核膜、胞浆同时着色则定为阳性。计分标准：在400×光镜下随机选取10个高倍视野，计算平均阳性细胞百分率，结合染色强度来进行评分。最终得分为两者乘积：0分阴性“－”，1～6分为阳性“＋”。

1.4 统计学方法

运用SPSS 17.0统计学软件对相应数据进行处理，计数资料用χ2检验，Spearman检验用于相关性分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 CD133、VEGF在上皮性卵巢癌组织中表达与临床病理的关系

胞膜和胞浆内出现棕黄色颗粒是CDl33蛋白染色阳性表现，CD133在上皮性卵巢癌的表达情况见图1，在高分化（G1）、中分化（G2）、低分化（G3）组织中分别为31.6%，57.1%，85.0%，三者相比差异具有有统计学意义（P＜0.05），见表1。

细胞浆内出现棕黄色或棕褐色颗粒为VEGF染色阳性表现，VEGF在上皮性卵巢癌的表达情况见图2，在高分化（G1）、中分化（G2）、低分化（G3）组织中分别为47.4%、66.7%、90.0%，三者相比差异具有有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.2 上皮性卵巢癌组织中CD133与VEGF表达的相关性

上皮性卵巢癌组织中CD133和VEGF共表达25例，VEGF表达阳性而CD133阴性表达者16例，CD133阳性表达而VEGF阴性表达者10例；计数资料的相关分析结果显示，在卵巢上皮性癌中CD133与VEGF的表达具有相关性（r＝0.663， P＝0.04）。

图1 CD133在卵巢癌中的表达（400×）；图2 VEGF在卵巢癌中的表达（400×）

3 讨论

CDl33是由865个氨基酸组成的分子量为120 kDa的跨膜糖蛋白，在内皮祖细胞，间质干细胞［1］等细胞中均有特异表达［2］。研究表明，CD133在细胞膜的形成及生理作用中发挥重要作用。后来的研究发现正常的非淋巴造血组织中也能检测到CDl33蛋白的表达［3］。CDl33蛋白目前主要用于肿瘤干细胞的研究［4］。这类阳性细胞仅占肿瘤细胞的极少数，却具有自我增殖、自我更新、自我分化的能力。CDl33阳性细胞在大量动物实验也被证实具有强烈的致瘤性，而CDl33阴性肿瘤细胞大多不具有致瘤性。CDl33阳性细胞表达与多种肿瘤干细胞（Cancer Stem Cells，CSC）具有相关性，因此我们认为CDl33阳性细胞具有肿瘤的恶性表型和浸润能力［5］，具有肿瘤干细胞的生物学特性。

众所周知，任何肿瘤组织的生长、侵润及转移，均需要具备适合肿瘤干细胞生长的微环境，肿瘤微环境中最重要的因素之一是新生血管，缺乏新生血管甚至可直接抑制肿瘤干细胞更新。肿瘤的血管生成是极其复杂的过程，目前发现，VEGF是高度特异性促血管生长因子之一，通过影响肿瘤血管生成途径促进肿瘤的进展［6］。肿瘤血管目前被认为是肿瘤发生的重要表现并作为肿瘤生态系统中重要因素参与并影响肿瘤的生物学行为［7］。

研究认为，肿瘤干细胞与肿瘤血管微环境之间作用是双向的，它们之间的作用互相促进，互为因果［8］。神经胶质瘤干细胞生长的培养基中，CD133＋肿瘤干细胞的VEGF水平高于CD133－；同时CD133＋神经胶质瘤干细胞移植到裸鼠后形成的肿瘤具有高表达VEGF的表现，而CD133－干细胞同样移植到裸鼠后则几乎不能形成肿瘤［9］。本研究结果显示CD133蛋白表达与VEGF表达在上皮性卵巢癌组织中具有密切相关性，CD133阳性蛋白在上皮性卵巢癌细胞表达高于VEGF，这充分提示了CD133＋上皮性卵巢癌细胞可能通过高表达VEGF而刺激转移病灶，促使新生血管形成，因此为适合继发病灶生长创造了一个肿瘤微环境。随着肿瘤组织恶性程度的增高，两者水平也随着升高，也说明该类患者进展更加迅速，更易复发和转移。

综上，CD133与VEGF在上皮性卵巢癌组织中的表达具有相关性，通过高表达VEGF，CD133＋上皮性卵巢癌干细胞可能促进上皮性卵巢癌侵袭转移，从而使卵巢癌患者的术后生存受到影响。总之，联合检测CD133与VEGF可用于临床预测上皮性卵巢癌患者术后复发及转移风险，可作为判断上皮性卵巢癌恶性程度、侵袭及预后的重要指标，但仍需进一步研究加以证实CD133与VEGF的相互作用及其机制。

表1 不同分化程度卵巢癌组织中CD133和VEGF表达情况

参考文献

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［7］Gao Y． Angiogenesis：what can it offer for future medicine?［J］．Exp Cell Res，2010，316（8）：1304-1308．

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Expression and Significance of CD133 and VEGF Protein in Ovarian Cancer

SUN Zhiqiang REN Hongbo DUAN Aihong SHEN Ziwei MA Ying GUO Yan Central Hospital of Handan City，Department of Neurosurgery，Handan 056001，China

ObjectiveUsing immunohistochemical methods to detect CD133 and VEGF protein expression in ovarian cancer，and analyzing their correlation with the clinical pathological parameters and biological significance．MethodsUsing immunohistochemical method to detect CDl33 in 60 cases of epithelial ovarian cancer tissue and the expression of VEGF．Results（1）With the decreasing of ovarian cancer differentiation degree， the positive expression rate of CD133 and VEGF was obviously increased， compared between the three groups，the difference was statistically significant（P＜0．05）． （2）The Spearman correlation analysis showed positive correlation between the expression of VEGF and expression of CD133（r＝0．663，P＜0．05）．ConclusionCDl33 and VEGF expression correlated with the malignant degree and epithelial ovarian cancer，and the two factors were positively correlated．

Ovarian cancer，VEGF，CDl33，Immunohistochemistry

R737．31

B

1674-9316（2015）27-0171-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2015．27．127

056001 河北省邯郸市中心医院神经外三科