威灵仙不同炮制品抗炎镇痛作用的研究

刘仕琦，李 菲，李俊莲，罗秀夏

（山西中医学院，山西太原030024）

威灵仙不同炮制品抗炎镇痛作用的研究

刘仕琦，李 菲，李俊莲，罗秀夏

（山西中医学院，山西太原030024）

●“实验”虽然是现代科学研究常用的方法，然在我国却自古有之。古代学者王冲说“等类众多，行事比肩，略举较著，以定实验也”，颜之推说“昔在江南，不信有千人帐，及来河北，不信有二万斛船，皆实验也”，大凡此义均与现代科学意义上的experiment相通。照此，传统中医药学并非只是经验之学，而更充满实验的思想和方法。实验中医药学，将现代实验科学的方法和传统中医药学的实验方法融合起来，开拓现代实验生物学、医学和药物科学的新领域。

目的：研究威灵仙生品及不同炮制品的抗炎镇痛作用。方法：选用醋酸扭体实验、二甲苯诱导小鼠耳肿胀实验和蛋清致大鼠足肿胀实验，观察威灵仙生品及不同炮制品的抗炎作用。结果：醋炙威灵仙能明显减少冰醋酸所致的小鼠扭体次数（P＜0.01）；生品威灵仙、醋炙威灵仙、酒炙威灵仙均能明显抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀（P＜0.01）；醋炙威灵仙在造模后2 h能明显抑制蛋清所致大鼠足肿胀（P＜0.05）。结论：威灵仙生品及酒炙、醋炙品均具有一定的抗炎、镇痛作用，其中醋炙品作用效果最好。

威灵仙；醋炙；酒炙；抗炎；镇痛

威灵仙为毛茛科植物威灵仙Clematis chinensis osbeck、棉团铁线莲Clematis hexa petala Pall.或东北铁线莲Clematis manshurica Rupr.的干燥根和根茎［1］。威灵仙味辛、咸，性温。其根及茎入药，具有祛风除湿、通络止痛、消痰涎、散癖积的功效，主治痛风顽痹，风湿痹痛，肢体麻木，腰膝冷痛，筋脉拘挛，诸骨鲠咽等症。2010版《中国药典》收载的威灵仙炮制规格仅生品一种，其他常见的饮片规格有酒炙威灵仙、蒸制威灵仙。研究表明威灵仙具有抗炎镇痛作用［2］。诸多临床研究报道表明，威灵仙与醋或酒共煎后具有很好的治疗骨鲠等疾病的作用［3-5］。传统炮制理论也认为，醋炙可增强药物活血止痛作用，酒炙可增强药物活血化瘀作用。因此，本研究比较了威灵仙生品、醋炙品、酒炙品煎剂的抗炎镇痛作用，为进一步证实其临床疗效，扩大威灵仙炮制品规格奠定基础。

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 雄性KM小鼠，体质量（18～22）g；雄性SD大鼠，体质量（180～220）g，购于山西医科大学实验动物中心，许可证号SCXK（晋）2011-0007。自由取食饮水，适应性饲养1 w（饲料为普通鼠全价颗粒饲料，购自山西医科大学实验动物中心）后进行相关实验。

1.1.2 试药与仪器 威灵仙（购于荣华大药房，安国市弘发中药材饮片），经山西中医学院孟祥龙老师鉴定为东北铁线莲Clematis manshurica Rupr.的干燥根和根茎。米醋（山西老陈醋集团有限公司，总酸≥9.00 g/100 mL），黄酒［山西老陈醋集团有限公司，酒精度（20℃）：10%浓度］，冰乙酸（CH3COOH，天津市耀华化学试剂有限责任公司，批号20080517），二甲苯（C8H10，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20080228），氯化钠（NaCl，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20110126），吲哚美辛（临汾奇林药业有限公司，国药准字H14020549）。SHJM-1型数显恒温电热套（菏泽市石油化工学校仪器设备厂），HH-6数显恒温水浴锅（国华电器有限公司），JA4003电子精密天平（上海良平仪器仪表有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 威灵仙的炮制品及煎煮液制备 酒炙威灵仙：取威灵仙饮片100 g，加入30 mL黄酒拌匀，焖润，待酒被吸尽后，置炒制容器内，文火加热，炒干至颜色加深，取出晾凉，筛去碎屑，待用。醋炙威灵仙：取威灵仙饮片100 g，加入20 mL米醋拌匀，焖润，待米醋被吸尽后，置炒制容器内，文火加热，炒干至颜色加深，取出晾凉，筛去碎屑，待用。煎煮液：分别称取威灵仙生品与上述炮制品各50 g，各以10倍量、8倍量、6倍量的水煎煮3次，每次60 min，合并煎出液，浓缩，制成相对原药材0.5 g/mL的浓缩液。

1.2.2 抑制醋酸致小鼠扭体反应实验 雄性KM小鼠，随机分成5组，每组10只，分别是模型组（每天灌胃0.9%氯化钠溶液0.5mL/只）、阳性对照组（吲哚美辛1.2 g/kg）、生威灵仙组（3.3 g/kg）、酒炙威灵仙组（3.3 g/kg）、醋炙威灵仙组（3.3 g/kg）。阳性对照组在测试当天灌胃给药，其余各组均连续灌胃给药3 d，末次给药0.5 h后，每只小鼠腹腔注射新配制的0.6%醋酸溶液0.2 mL。观察并记录注射醋酸溶液后各组首次出现扭体反应的时间（潜伏期）与15 min内各小鼠扭体反应（腹部凹陷、伸展后肢、臀部抬高）次数，计算镇痛抑制率。其中y为镇痛抑制率，a为模型组扭体次数，b为给药组扭体次数。

1.2.3 抑制二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀实验 雄性KM小鼠，随机分成5组，每组10只。分组及各组的给药量、方法与给药时间同1.2.2。各组小鼠末次给药1 h后，于小鼠右耳前后两面涂抹20 μL二甲苯致炎。1 h后脱臼处死小鼠，用直径8 mm的不锈钢圆冲沿耳缘相同部位冲下左右两耳同一部位耳廓，分别置于分析天平上称其质量，计算鼠耳肿胀度及抑制率。其中y为肿胀度，a为左耳质量，b为右耳质量。，其中y为肿胀抑制率，a为模型组平均肿胀度，b为给药组平均肿胀度。

1.2.4 对蛋清所致大鼠足肿胀的影响 雄性SD大鼠，随机分为5组，每组8只，分别是模型组（每天灌胃0.9%氯化钠溶液1 mL/只）、阳性对照组（吲哚美辛1.2 g/kg）、生威灵仙组（2 g/kg）、酒炙威灵仙组（2 g/kg）、醋炙威灵仙组（2 g/kg）。各组均灌胃给药，连续给药5 d，最后1次给药前，分别测量大鼠足周长。阳性对照组和模型组给药15 min，实验组给药0.5 h后，其余分别给各组大鼠右后趾踝关节注射10%新鲜蛋清0.1 mL/只。分别于致炎1 h、1.5 h、2 h后测量大鼠足周长，计算各组平均肿胀度。其中y为肿胀度，a为左足周长，b为右足周长。其中y为肿胀抑制率，a为模型组平均肿胀度，b为给药组平均肿胀度。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 抑制醋酸致小鼠扭体反应实验结果

与模型组比较，醋炙威灵仙组、酒炙威灵仙组可明显降低小鼠扭体次数（P＜0.01，P＜0.05）；与阳性对照组和生威灵仙组相比，醋炙威灵仙组可显著降低小鼠扭体次数（P＜0.05）；与酒炙威灵仙组相比，醋炙威灵仙组可明显降低小鼠扭体次数（P＜0.01），提高抑制率。结果见表1。

表1 对醋酸致小鼠扭体反应的影响 （±s）

表1 对醋酸致小鼠扭体反应的影响 （±s）

注:与模型组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01；与阳性对照组比较，3）P＜0.05；与生威灵仙组比较，4）P＜0.05；与酒炙威灵仙组比较，5）P＜0.01

组别 n 扭体潜伏期（s） 扭体次数 抑制率（%）模型组 10 125±35 46±17 -阳性对照组 10 184±67 29±81）37.05生威灵仙组 10 104±26 35±10 23.85酒炙威灵仙组 10 126±44 26±71）42.93醋炙威灵仙组 10 131±48 16±52）3）4）5）65.30

2.2 抑制二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀实验结果

与模型组比较，阳性对照组、生威灵仙组、醋炙威灵仙组、酒炙威灵仙组均可明显降低小鼠耳廓肿胀度，提高抑制率（P＜0.01）。结果见表2。

表2 对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀反应的影响 （±s）

表2 对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀反应的影响 （±s）

注:与模型组比较，1）P＜0.01

组别 n 肿胀度（%） 抑制率（%）模型组 10 8.25±3.08 -阳性对照组 10 3.84±1.401）53.45生威灵仙组 10 3.07±1.141）62.79酒炙威灵仙组 10 3.58±1.401）56.61醋炙威灵仙组 10 2.99±1.041）63.76

2.3 对蛋清所致大鼠足肿胀的影响

与模型组比较，致炎1 h、1.5 h及2 h后，各受试药物组均有一定的抑制作用，其中醋炙威灵仙组在造模后2 h抑制作用显著。结果见表3。

表3 对蛋清致足跖肿胀作用的影响 （±s）

表3 对蛋清致足跖肿胀作用的影响 （±s）

注：与模型组相应时间段比较，1）P＜0.05；与阳性对照组相应时间段比较，2）P＜0.05，3）P＜0.01

组别 n 肿胀度（%） 抑制率（%）1 h 1.5 h 2.0 h 1 h 1.5 h 2 h模型组 8 10.08±2.77 8.40±1.67 7.00±2.61 / / /阳性对照组 8 6.00±1.831）5.50±1.381）4.38±2.33 40.48 34.52 37.43生威灵仙组 8 7.29±2.81 7.00±1.58 6.42±3.31 27.68 16.67 8.29酒炙威灵仙组 8 8.75±1.303）7.63±2.072）5.25±2.49 13.19 9.17 25.00醋炙威灵仙组 8 8.20±1.482）7.14±2.54 4.00±1.891）18.65 15.00 42.86

3 讨论

威灵仙不同炮制规格在以上三个模型上均显示出一定的作用，但作用强度不同。醋酸扭体实验中，生品威灵仙无抗炎镇痛作用，醋制威灵仙作用最为明显，优于酒炙威灵仙和吲哚美辛；小鼠耳廓肿胀实验中，醋炙威灵仙仍然具有最佳的抗炎镇痛作用，其次为生品，酒炙品在该模型实验中作用不明显。蛋清致大鼠足肿胀实验中，醋炙威灵仙造模2 h后体现出一定的抗炎镇痛作用。

从以上结果可以看出，不同炮制规格中，醋炙品抗炎镇痛作用最为明显，且在不同致炎模型中均能体现明显的优势作用。蛋清致大鼠足肿胀实验中，虽然抗炎镇痛作用不及阳性对照药，但随着时间的延长，其抗炎镇痛作用明显增强。提示威灵仙抗炎镇痛作用可能发挥的比较迟缓，有必要延长时间点，进行深入研究。

综上所述，威灵仙不同炮制规格中，醋炙品可发挥稳定的抗炎作用，这与临床使用过程中多用醋煎的研究结果相符。提示醋炙可以作为一个新的饮片规格，扩大临床应用范围。具体的炮制工艺及抗炎镇痛机理，还有待进一步探讨。

［1］中国人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：234.

［2］章蕴毅，张宏伟，李佩芬，等威灵仙的解痉抗炎镇痛作用［J］.中成药，2001，23（11）：808-811.

［3］许伟.威灵仙米醋治疗鱼刺梗喉21例［J］.中国民间疗法，2001，9（11）：54.

［4］马惠敏.威灵仙治铁物梗喉［J］.湖北中医杂志，2000，22（7）：5.

［5］姚金才.威灵仙治疗骨刺卡喉20例［J］.实用中医药杂志，2003，19（8）：438.

（编辑：翟春涛）

Research on the anti-inflammation and analgesic effect of different processed products of Clematis.

Liu Shiqi，Li Fei，Li Junlian，Luo Xiuxia
（Shanxi college of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To evaluate the anti-inflammation and analgesic effect of different processed products of Clematis. Methods：The analgesic and the anti-inflammation effects of different processed products of Clematis were studied by writhing response，exploring in the xylene-induced ear swelling model in mice，and egg white-induced paw edema in rats. Results：Clematis by stir-heating with rice vinegar can significantly prolonge the latency and reduce the writhe number at the turning of trunk model in Kun-Ming mice（P＜0.01）.Clematis，Clematis by stir-heating with rice vinegar and wine have good anti-inflammatory effect on inhibiting xylene-induced ear swelling（P＜0.01）.Clematis by stir-heating with rice vinegar can also reduce rats foot-plate swelling in 2 hour（P＜0.05）.Conclusion：The results demonstrate that different processed products of Clematis can release the pain，suppress the inflammation.The effect of Clematis by stir-heating with rice vinegar is the best.

Clematis；stir-heating by vinegar；stir-heating by wine；anti-inflammation；suppress pain

R285.5

A

1671-0258（2016）04-0016-03

山西省高校131人才工程项目；山西省国际合作项目（2014081049-6）

刘仕琦，本科在读，E-mail：1429860563@qq.com

李俊莲，教授，博士，E-mail：lijunlian0909@126．com