试析高效液相色谱法测定壮肾安神片中淫羊藿苷苷含量

杨丽红

哈药集团三精制药四厂有限公司 150000

试析高效液相色谱法测定壮肾安神片中淫羊藿苷苷含量

杨丽红

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目的：采用高效液相色谱的方式检测壮肾安神片中淫羊藿苷的含量。方法：选择ShimadzuC18色谱柱为主要的设备，其具体的规格为（250mm×4.6mm，5μm），选择水作为流动相，比例为30:70，每分钟的流速为1.0mL，将检测波长确定为270nm。结果：通过检测结果的显示，当淫羊藿苷的进样量控制在 8.56mg至 136.96mg之间时，可以得到最为理想的峰面积线性关系，其中r=0.9999，并且平均回收率可以达到98.60%以上，检测RSD的结果为2.57%，其中n为6。结论：在检测壮肾安神片中淫羊藿苷的含量过程中可以采用高效液相色谱法进行检测，这种方法不但具有简便的特点，还能保证结果的准确性，自身的灵敏性也较高，并且可以用作对壮肾安神片的质量控制。

高效液相色谱法；壮肾安神片；淫羊藿苷；含量测定

壮肾安神片的主要作用是滋阴补肾以及生精填髓，在其主要的构成成分中，主要是由九味药物组成的，其中有牛鞭、山药、地黄、牛睾丸、龙骨等，在临床治疗中具有十分显著的功效。其在临床治疗中主要治疗的病症是心悸耳鸣、肾精不足等，但是这一品种在药典中并没有具体的标准，只有薄层定性鉴别，并且也没有包含对其中所含有的有效成分的检测。在所组成的药物中，淫羊藿苷是主要的成分之一，属于小檗科植物，其种类也可以分为很多种，取干燥的地上部分能够用作补肾阳、祛风湿以及强筋骨之用，因此本文重点对淫羊藿苷在壮肾安神片中的含量进行检测，采用高效液相色谱的方式能够对其质量得到有效的控制。

1、仪器与试药

高效液相色谱仪（日本岛津）。淫羊藿苷对照品（批号为110737—200312，中国药品生物制品检定所）；壮肾安神片（自制，批号分别为20061025，20061106，20061121，规格为基片重0.3g／片）；水为超纯水，乙腈为色谱纯。

2、方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：ShimadzuCl8柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（30：70）；检测波长：270nm；流速：1.0mL／min；柱温：室温。

2.2 溶液制备

在对溶液进行制备的过程中，先在温度为105℃的环境下精密的称取一定含量的淫羊藿苷对照品，将其处在干燥的环境中，并且保证淫羊藿苷对照品为恒重，在其中加入适量的甲醇配制成对照品溶液，其规格为4.0μg／mL，再取壮肾安神片40片，将外部的糖衣清除，经过仔细的研磨之后形成粉末状，取出 6.0g并且经过精密的称量，将其放入容积为50mL的具塞锥形瓶中，在其中加入20mL的稀乙醇，将其密封严实并且加以准确的称量，测定出具体的质量，然后将其放入超声仪器设备中1h，进行超声处理，1h过后取出并且加以冷却，再对其质量进行精密的称量，使用稀乙醇将失去的质量补回，将溶液摇晃均匀以后进行离心处理，通过微孔滤膜进行过滤，再续取滤液当作供试品溶液，将不含有淫羊藿苷的阴性样品按照上述相同的方法进行处理，最终得到阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

首先应该进行专属性实验，分别取适当的对照品溶液以及供试品溶液还有阴性对照品溶液若干，按照相应的方法进样并且加以进一步的鉴定，结果显示在阴性对照品溶液的色谱中，淫羊藿苷在保留时间上并不存在干扰峰。具体的检测结果见图1。

图1 高效液相色谱图

紧接着对线性关系进行考察，在考察的过程中，要先对淫羊藿苷的对照品进行精密的称量 8.56mg，然后将其放入容积为100mL的量瓶中，使用甲醇对其进行稀释直到达到相应的刻度，均匀的进行摇晃。再精密量取10mL，置100mL量瓶中，用甲醇使溶解并稀释至刻度，然后分别精密吸取0.5，1.0，2.0，4.0，8.0mL对照品溶液，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。再分别精密吸取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以淫羊藿苷的峰面积为纵坐标、进样质量浓度为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程y=21850X一32587，r=0.9999（n=5）。结果表明，淫羊藿苷进样量在8.56至136.96mg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取供试品溶液20，连续进样6次。结果的RSD为0.95%（n=6）。

稳定性试验：取同一样品，依法制备供试品溶液，分别于0，2，4，8h时进样20μL。结果的RSD为0.76%（n=4），表明8h内供试品溶液的淫羊藿苷稳定。

重复性试验：精密称取同一批样品5份，依法制备供试品溶液，在拟订的色谱条件下测定。结果淫羊藿苷的平均含量为1.25g／片，RSD为0.86%（n=5）。

加样回收试验：精密称取 6份已知含量的样品（批号为20061025，含量为4.5218μg／g，平均片重为0.3g）各3.0g，精密加入淫羊藿苷对照品稀乙醇溶液（4.25μg／mL）3.0mL，按样品含量测定项下方法操作，记录色谱图，计算加样回收率。结果见表1。

表1 淫羊藿苷加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取3批样品各40片，去糖衣层，研细，各取6.0g，精密称定，依法制成供试品溶液，均进样20μL，分别测定吸收峰面积，以外标法计算淫羊藿苷含量。结果淫羊藿苷含量分别为1.2871，1.2689，1.2736g／片，平均1.2765g／片。

3、结语

淫羊藿苷为箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿巫，朝鲜淫羊藿等干燥茎叶提取物。本品呈淡黄色针状结晶粉末，分子量为676.65。淫羊藿苷能增加心脑血管血流量、促进造血功能、免疫功能及骨代谢，还具有补肾壮阳、抗衰老等功效。淫羊藿苷能增加心脑血管血流量、促进造血功能、免疫功能及骨代谢，具有补肾壮阳、抗衰老、抗肿瘤等功效。现代药理研究表明，淫羊藿有效成分及其提取物具有广泛的生理活性，并发现许多新的药理作用及新用途。

在对提取条件进行筛选的过程中，分别用超声的方式对50%的甲醇，含量为95%的乙醇以及稀乙醇进行了处理，在1h以后取出，对相应的成分进行测定，结果证明相互之间存在的差异并不明显，但是从溶液的毒性进行考虑，最终选择了在超声提取中使用稀乙醇。在本文的实验中，主要选择了高效液相色谱的方式对壮肾安神片中的有效成分进行分离，并且采用阴性对照的方式进行证明，证明当处于色谱峰的位置时，并不会对成分造成干扰的影响，并且这种方法具有十分灵敏的特点，能够简单的进行操作，在分离效果上也十分优秀，能够在壮肾安神片质量控制的过程中作为主要的控制方法。

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