国产注射用阿莫西林钠中主要杂质分析

高波

哈药集团制药总厂 150000

国产注射用阿莫西林钠中主要杂质分析

高波

哈药集团制药总厂 150000

目的：本文主要对国产注射使用的阿莫西林钠里面所含有的杂质进行研究。方法：使用高效液相色谱法，将WatersNova－pakC18(250mm×4.6mm，5μm)作为主要色谱柱，并且该设备所检测的波长大概在254nm左右，采取梯度洗脱的手段对105批样品中所含有的物质进行检查。结果：在国产注射所使用的阿莫西林钠里面检查出多种杂质，主要含有阿莫西林青霉氧酸、相应的阿莫西林三聚体等在杂质。而单个杂质所含有的数量都不大于3%，总共存在的杂质数量都不大于6%。结论：在本次实验中所得到的结果对进行加以指导该品种生产有着重要的意义。

阿莫西林钠；杂质；分析

在临床医学界注射使用的阿莫西林钠是利用无菌阿莫西林钠的有关原料在处于无菌的状态下制成的无菌粉针剂，当前在我国市场中已经实现大量的生产，能够起到预防感染的作用。所以对该药物里面含有的杂质进行分析有着重要的意义。对此，本次实验主要依据我国相关药典所记载的方式，将色谱条件加以完善，并随机在我国厂家中将105批该药物进行详细的研究，采取相应的阿莫西林系统所产生的对照品以及国外杂质对照品进行准确的定位，对获得的杂质谱进行总结，将该药物里面所含有的杂质种类以及含量找出来。

1、仪器与试药

色谱仪；包括 P680泵；ASI－100自动进样器；PDA－100二极管阵列检测器；色谱工作站。阿莫西林杂质对照品:6－氨基青霉烷酸(;阿莫西林系统适用性对照品；二酮哌嗪阿莫西林、阿莫西林青霉氧酸、阿莫西林青霉噻唑酸、3－(4－羟基苯基)吡嗪－2－醇、(2R)－2－［(2，2－二甲基异丙醇)氨基］－2－(4－羟基苯基)乙酸(批号:0232.08)、(2R)－2－氨基－2－(4－羟基苯基)乙酸;乙腈为色谱纯;磷酸二氢钾为分析纯。

2、溶液的制备

2.1 供试品溶液

（1）相关人员选择适量的105批样品，采取精密的手段进行测量，在使用的前期阶段需要使用流动相A进行溶解并稀释城相应等量的溶液即可。

（2）对照溶液精密量取供试品溶液1mL，置100mL量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，即得。

（3）对照品混合溶液。取各阿莫西林杂质对照品各约5mg，置5mL量瓶中，用流动相A定容，摇匀，即得。

（4）酸破坏供试品溶液。取样品40mg，加0.1mol·L-1盐酸溶液0.5mL，放置20min后，加水制成2mg·mL-1的溶液，即得。

（5）碱破坏供试品溶液。取样品40mg，加0.1mol·L-1氢氧化钠溶液0.5mL，放置20min后，加水制成2mg·mL-1的溶液，即得。

（6）氧化破坏供试。品溶液取样品40mg，加0.05%过氧化氢溶液0.5mL，放置30min后，加水制成2mg·mL-1的溶液，即得。

（7）光照破坏供试品溶液取样品，置254nm光照24h后，加水制成2mg·mL-1的溶液，即得。

（8）高温破坏供试品溶液取样品，80℃下加热1h，加水制成2mg·mL-1的溶液，即可得。

3、方法与结果

3.1 线性关系及检出限、定量限的考察

称取购得的7个杂质对照品适量，配制成100，50，10，5，0.5μg·mL-1的溶液，依次注入液相色谱仪，以进样浓度(X，μg·mL－1)为横坐标，相应的杂质峰面积(Y)为纵坐标，进行线性分析。6－氨基青霉烷酸、二酮哌嗪阿莫西林、阿莫西林青霉氧酸、阿莫西林青霉噻唑酸峰1、阿莫西林青霉噻唑酸峰2、3－(4－羟基苯基)吡嗪－2－醇、(2R)－2－［(2，2－二甲基异丙醇)氨基］－2－(4－羟基苯基)乙酸、(2R)－2－氨基－2－(4－羟基苯基)乙酸回归方程分别为:

线性范围均为100～0.50μg·mL－1，检出限(S/N=3)分别为0.06，0.08，0.03，0.14，0.10，0.01，0.05，0.05μg·mL-1;定量限(S/N=10)分别为0.20，0.28，0.10，0.45，0.34，0.03，0.16，0.17 μg·mL-1。

3.2 精密度

取各杂质对照品，加流动相A制成50μg·mL-1的溶液，注入液相色谱仪，重复6次，结果6－氨基青霉烷酸、二酮哌嗪阿莫西林、阿莫西林青霉氧酸、阿莫西林青霉噻唑酸、3－(4－羟基苯基)吡嗪－2－醇、(2R)－2－［(2，2－二甲基异丙醇)氨基］－2－(4－羟基苯基)乙酸、(2R)－2－氨基－2－(4－羟基苯基)乙酸峰面积的RSD分别为0.23%，0.31%，0.32%，0.24%，0.15%，0.39%。取供试品溶液注入液相色谱仪，重复6次，结果阿莫西林二聚体(相对于主峰的保留时间为 4.1)和阿莫西林三聚体(相对于主峰的保留时间为4.6)峰面积的RSD分别为0.18%，0.10%。可见方法精密度良好。

3.3 测定结果

取105批样品适量，精密称定，临用前用流动相A溶解并定量稀释成每1mL中含2mg的溶液，立即进样，共检出19个杂质，归纳其杂质谱并统计分析各杂质的含量变化。6－氨基青霉烷酸、二酮哌嗪阿莫西林、阿莫西林青霉氧酸、阿莫西林青霉噻唑酸、3－(4－羟基苯基)吡嗪－2－醇、(2R)－2－［(2，2－二甲基异丙醇)氨基］－2－(4－羟基苯基)乙酸、(2R)－2－氨基－2－(4－羟基苯基)乙酸这 7个杂质的量用杂质对照品按外标法以峰面积计算，其他杂质均采用主成分自身对照法计算，结果见图1，其中，柱状图表示105批各杂质的平均含量;偏差线表示105批次中该杂质的2倍标准偏差(2SD)。

图1 供试品溶液的典型HPLC色谱图及杂质含量

4、讨论

通常情况下，正式的杂事对照品通常要花费大量的成本，并且在实际操作中也不容易得到。因此，普遍可以使用适当的色谱柱当作实验的对象，并且在色谱条件允许的情况下进行试验。这里值得注意的是，这种实验所得到的结果无法获得显著的效果，然而尽可能和真实的实验结果相吻合。相关人员依据对实验所获得的有关数据进行分析得知，注射使用的阿莫西林钠中包含诸多的物质，如阿莫西林、阿莫西林二聚体等，而且这些物质可以在人的身体里面存在一定的时间，而这些时间的存在可以当作定位杂质的重要参照物。

对于该药物自身的属性而言，具备不耐热的特点，倘若在实验室中发生高温的现象，那么就会知识该药物产生不稳定的情况，对实验所得到的结果带来诸多的影响。在我国相关的药典中没有对该药物的控制进行明确规定，这样就在一定程度上致使各个地方的厂家在对药物进行运输亦或是存储的过程中，没有对环境温度引起高度的重视，进而促使该药物在运输亦或是存储时发生质变的情况，就会倒在杂质中所含有的种类以及相应的含量也同样发生转变，这样就致使该药物不能发挥出最大的价值，严重的可能还会带来一定的危险性。在本文中主要对温度因素引起了高度重视，所得到的实验结果具有一定的公正性，对各种因素所产生的影响加以分析，特别是全面分析温度因素以后，对该药物里面所含有的杂质进行了探索。当相关人员将可能出现的因素考虑以后，采取随机的方式抽取了105批药物，并将这些药物当作主要的研究对象。

而在本次抽样工作开展的过程中，主要包含数十个省，都是经过0-18个月的储存时间。经过相关实验可以得知：由于生产厂家以及地区抽取的样品不同，所产生杂质的种类以及相关的含量也是不同的，出现这种情况的原因可能因为诸多因素，比如生产工艺、存储方式等。

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[2]王国新.阿莫西林钠注射剂致血尿1例[J].药物流行病学杂志.2005(01)

[3]杨滨,吴培平,丁波.注射用阿莫西林钠稳定性考察[J].黑龙江医药.2004(05)

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1672-5018（2016）11-319-02