牡丹籽皮中总黄酮提取工艺探究

◎ 程雪芬，顾菲菲，吴媛霞，晋晓峰，方 晴

（国家铜铅锌及制品质量监督检验中心，安徽 铜陵 244000）

黄酮类物质是自然界中一类重要的抗氧化物质，属于天然次级代谢产物[1]。黄酮类物质的提取方法有水提法、有机溶剂萃取法、微波提取法、超声波法、超临界流体萃取法等[2-6]。纯化方法主要有柱层析法（硅胶、聚酰胺、葡聚糖凝胶）、纸层析法、薄层层析法、铅盐沉淀、大孔树脂吸附分离法等[7-12]，其中大孔树脂法在工业上应用最为广泛。

1 实验材料

牡丹仔皮，购于安徽铜陵；大孔吸附树脂（HZ835、AB-8、HZ-818、DA-201），分别购于国内不同化工厂；芸香叶苷，国药集团化学试剂有限公司；氢氧化钠，无锡市展望化工试剂有限公司；亚硝酸纳，无锡市展望化工试剂有限公司；硝酸铝，国药集团化学试剂有限公司；乙醇，烟台市双双化工有限公司。

2 方法与结果

2.1 大孔树脂的预处理

用95%乙醇溶液浸泡4种不同类型树脂24 h，待充分溶胀，装柱，再用乙醇洗至洗出液加入适量的蒸馏水（v/v，1∶5），至无白色浑浊现象，用蒸馏水洗至无乙醇味，滤取备用。

2.2 大孔树脂中含水量的测定

分别称取一定质量经上述预处理的大孔树脂，65 ℃烘干至恒重，计算含水量。经测量，HZ835的含水量为72.35%，AB-8的含水量为69.89%，HZ818的含水量为75.24%，DA201的含水量为61.14%。

2.3 大孔树脂对牡丹籽皮总黄酮吸附量的测定

分别称取一定质量2.1中预处理的大孔树脂（分别相当于0.5 g干树脂），加入60 mL黄酮浓度为0.184 mg/mL的牡丹籽皮提取液，置摇床上，室温下连续震荡24 h。充分吸附后，过滤，测定滤液中总黄酮的含量。计算得吸附量Q，HZ835为14.64 mg/g，AB-8为15.44 mg/g，HZ818为 14.39 mg/g；DA201为 14.86 mg/g， 故 选 用AB-8大孔树脂来提取牡丹籽皮总黄酮。

2.4 牡丹籽皮总黄酮提取工艺参数的探究

2.4.1 吸附流速的影响

在室温下，将初始浓度为1.13 mg/mL的提取液分别以0.01、0.04、0.08、0.10 mL/s的流速通过装有10 mL AB-8大孔树脂的层析柱（Φ1×50 cm），流速用秒表控制。之后浓度分别为0.8482、0.8963、0.9667、0.9772 μg/mL。得出大孔树脂的吸附量随着流速的增加而递减，但减幅较小。流速过大，溶质提早泄漏，耗能增多。流速过慢延长生长周期，生产成本增加。综合考虑，确定最佳上样流速为0.04 mL/s。

2.4.2 洗脱剂的影响

黄酮类化合物分子中具有多个羟基，易溶于有机溶剂中，选择乙醇作为洗脱剂。按上述所确定的吸附条件进行动态吸附后，装有大孔树脂的层析柱先用水洗脱至洗脱液近无色后，再分别用浓度为30%、50%、70%和95%的乙醇溶液进行梯度洗脱，以乙醇浓度为横坐标，洗脱液中黄酮的含量占树脂吸附的总黄酮含量的百分比为纵坐标作图，如图1所示。

图1 乙醇浓度对树脂洗脱性能的影响图

由图1得出，在乙醇溶液浓度为50%时，27.69%以上的总黄酮被洗脱出，故认为50%乙醇为最佳洗脱浓度。

3 结语

通过比较4种大孔树脂对牡丹籽皮总黄酮的吸附与解吸特性，选择出一种最适合提取牡丹仔皮总黄酮的树脂，并对其提取工艺参数进行探究。结果表明：从树脂静态平衡吸附量、静态吸附动力学过程等方面探究4种大孔吸附树脂对牡丹籽皮总黄酮的吸附性能，选定AB-8大孔树脂作为分离纯化牡丹籽皮总黄酮的介质；再通过AB-8大孔树脂对牡丹籽皮总黄酮的动态吸附过程的探究表明，提取牡丹籽皮总黄酮的最佳工艺条件为：取一定量预处理好的AB-8大孔树脂，使牡丹籽皮提取液缓慢通过树脂床，用1 000 mL的水柱去柱中残留的溶液，再用浓度为50%乙醇溶液以0.04 mL/s的流速流过树脂柱，收集洗脱液，减压浓缩至干，即为牡丹籽皮总黄酮。

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