指状青霉cyt b5和cyt b5r基因克隆及与cyp51A的共表达

秦婷婷 耿辉 王胜强 牛玉慧 伍志 刘德立

（华中师范大学生命科学学院 湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室，武汉 430079）

指状青霉cyt b5和cyt b5r基因克隆及与cyp51A的共表达

秦婷婷 耿辉 王胜强 牛玉慧 伍志 刘德立

（华中师范大学生命科学学院 湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室，武汉 430079）

为探究指状青霉细胞色素b5（Cyt b5）与细胞色素b5还原酶（Cyt b5r）在细胞色素P450 CYP51A电子传递方面的功用，研究了指状青霉CYP51A与Cyt b5-Cyt b5r共表达机制；并检测了其对于cyp51A基因表达水平的影响。通过转录组分析筛选并PCR克隆获得了cyt b5与 cyt b5r基因，分别命名为HS-Pdcyt b5和HS-Pdcyt b5r。以多基因串联克隆载体pPICZαA为骨架构建了指状青霉共表达质粒ppbrA（pPIC-Pdcyp51A-cyt b5-cyt b5r）；电转化法将重组质粒ppbrA导入毕赤酵母X-33中。qRT-PCR分析结果显示，CYP51A与Cyt b5-Cyt b5r共表达后，其基因表达水平升高54%-97%，并维持较长时间（48-72 h）。表明Cyt b5-Cyt b5r系统可将电子高效转移给CYP51A，从而增强cyp51A基因的转录表达。从指状青霉中克隆表达HS-PdCyt b5和HS-PdCyt b5r蛋白，并通过共表达的方式研究cyp51A基因的功能尚为首次报道。

指状青霉CYP51A；共表达；细胞色素b5；细胞色素b5还原酶；毕赤酵母X-33

细胞色素P450 CYP51又名甾醇14-α-去甲基化酶（Sterol 14α-demethylase），是唯一广泛存在于动物、植物、真菌、细菌中的细胞色素P450家族成员，也是抗真菌剂、除草剂以及降胆固醇药物的重要靶标酶。Sanborn 和 Williams［1］首次从伞树科蚕幼虫中检测到细胞色素b5（Cyt b5）。Cyt b5是一种位于内质网上的膜结合蛋白，氧化还原电势约为20 mV，能够接受来自NADH-细胞色素b5还原酶或者NADPH-细胞色素P450还原酶的一个电子。还原型的Cyt b5为脂类的生物合成提供还原当量并且为氧化酶类如细胞色素P4 50传递第二个电子［2］。……