金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶Ply187的CHAP结构域的表达及抗菌活性分析

吴蒙陆海荣，2黄青山，2

（1. 复旦大学 遗传工程国家重点实验室，上海 200438；2. 上海高科联合生物技术研发有限公司， 上海 201206）

金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶Ply187的CHAP结构域的表达及抗菌活性分析

吴蒙1陆海荣1，2黄青山1，2

（1. 复旦大学 遗传工程国家重点实验室，上海 200438；2. 上海高科联合生物技术研发有限公司， 上海 201206）

噬 菌体裂解酶是一种高效的抗菌蛋白，系统地分析噬菌体裂解酶催化域的活性，有助于设计高效杂合裂解酶。合成噬菌体裂解酶P ly187的CHAP催化结构域（CHAPPly187）基因，并构建表达载体pET28a-CHAPPly187转化至大肠埃希菌BL21（DE3），经IPTG诱导表达和两步纯化，获得高纯度的CHAPPly187，再与溶葡萄球菌酶催化域（CATLysn）进行活性比较。比浊法检测显示CHAPPly187和CATLysn对金黄色葡萄球菌都具有较强的抗菌活性；CHAPPly187具有更宽的抗菌谱，最适作用pH范围更大，对离子强度的耐受能力更好，易受EDTA的影响。低浓度的二价金属离子Ca2+、Mg2+、Mn2+对两种催化域都有明显的促进作用，低浓度的Zn2+、Cu2+、Fe2+对它们有很强的抑制作用。

噬菌体裂解酶；溶葡萄球菌酶；催化结构域；CHAP；抗菌活性

随着各种抗生素大量使用，细菌耐药性问题日益严重，导致临床治疗困难以及患者病死率增高，严重威胁人类健康［1，2］。为了控制耐药性细菌引起的感染，迫切需要研发与传统抗生素作用模式不同的新型抗菌药物。噬菌体裂解酶是噬菌体感染宿主晚期表达的一类肽聚糖水解酶。当它体外应用时，能快速水解革兰氏阳性菌的细胞壁，对多重耐药的革兰氏阳性致病菌同样有效，而且不易诱导细菌产生新的抗性［3，4］。……