差示扫描量热法分析光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914 TXT基序对抗冻活性的影响

杜荣俸 刘忠渊 毛新芳

（新疆大学生命科学与技术学院 新疆生物资源基因工程重点实验室，乌鲁木齐 830046）

差示扫描量热法分析光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914 TXT基序对抗冻活性的影响

杜荣俸 刘忠渊 毛新芳

（新疆大学生命科学与技术学院 新疆生物资源基因工程重点实验室，乌鲁木齐 830046）

研究光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914及其突变体的原核表达及活性，推测TXT基序的突变对昆虫抗冻蛋白抗冻活性的影响。通过定点突变新疆荒漠昆虫光滑鳖甲抗冻蛋白apafp914基因TXT基序的规则位点个数，并亚克隆至pET32a原核表达载体，转化大肠杆菌，Ni-NTA纯化得到融合蛋白TrxA-ApAFP914及3种突变体蛋白；利用SwisS-Model服务器预测分析了ApAFP914蛋白的三维结构；通过差示扫描量热法测定TrxA-ApAFP914及其突变体的热滞活性。结果显示，4种融合蛋白分子量均在30 kD左右；且突变蛋白TrxA-A19T具有最高的热滞活性，而突变体TrxA-T33F和TrxA-T33&45F的热滞活性显著低于未突变的TrxA-914。研究结果表明昆虫抗冻蛋白的TXT基序越规则其具有的热滞活性越高。

光滑鳖甲抗冻蛋白；TXT基序；差示扫描量热法（DSC）

抗冻蛋白（antifreeze protein，AFPs）是耐寒（freeze-avoidance）生物为适应冷环境而产生的小分子蛋白质，能非依数性的降低溶液冰点但不改变熔点，两者产生的差值即为热滞活性（Thermal hysteresis activity，THA），可以用来评价抗冻蛋白抗冻活性的强弱［1］。按照来源的不同可以分为鱼类抗冻蛋白、昆虫抗冻的蛋白、植物抗冻蛋白以及菌类抗冻蛋白。其中昆虫抗冻蛋白主要在甲虫（Tenebrio molitor）、云杉卷叶蛾（Choristoneura fumigerana）、美洲长椿（Oncopeltus fasciatus）和毛虫（Dendroides canadensis）等耐冻昆虫体内 表达，其热滞活性可达鱼类抗冻蛋白的10-100倍［2］。……