不同加工方法对杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影响

吴兵，龙飞，卫莹芳，许萍，周元雳

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不同加工方法对杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影响

吴兵，龙飞，卫莹芳，许萍，周元雳

目的：考察不同加工方法对杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影响，为优化杜仲产地加工方法提供科学依据。方法：在产地将三批新鲜药材分别进行“直接晒干”、“发汗—晒干”、“ 微煮—发汗—晒干”、“微煮—切制—发汗—晒干”实验。并采用高效液相色谱测定不同加工方法杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量变化。结果：不同加工方法样品松脂醇二葡萄糖苷含量的高低：“微煮—发汗—晒干”＞“发汗—晒干”＞“微煮—切制—发汗—晒干”＞“直接晒干”。结论：“发汗”在杜仲在产地加工中是必要的；微煮后再“发汗”的杜仲质量较佳。

杜仲；产地加工；发新汗；微煮；松脂醇二葡萄糖苷；高效液相色谱

杜仲是杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥树皮，具有补肝肾，强筋骨，安胎的功效[1]。历版药典均规定采收后的杜仲皮应“刮去粗皮，堆置发汗至内皮呈紫褐色，晒干”。在目前栽培杜仲的10余省[2]中，不少产地采用直接晒干的加工方法。同时，传统产地加工中，杜仲在“发汗”前尚有“微煮”步骤。另据报道，一种新方法[3]已被运用于同为皮类药材的厚朴加工中，该方法直接将厚朴鲜皮进行蒸煮、切制、发汗、干燥加工。这种方法是否可以运用于杜仲药材加工中？针对以上问题，本文针对产地不同加工方法杜仲中有效成分松脂醇二葡萄糖苷进行比较研究，为确定杜仲适宜的产地加工方法提供科学依据。

1 仪器与材料

Agilent 1200高效液相色谱仪 (SPDM20AT检测器，LC-Solution 工作站)；德国Sartorius公司BP121S电子分析天平(万分之一)；德国Sartorius公司BP211D电子分析天平(十万分之一)；松脂醇二葡萄糖苷(PDG)对照品（购自成都贝斯特试剂有限公司 批号：S-047-110830，供含量测定用）；色谱甲醇（德国默克公司）；水为重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。

杜仲样品采集于四川省都江堰市虹口乡，三批胸径分别为8cm、10cm、18cm，经成都中医药大学药学院中药鉴定教研室副教授龙飞鉴定为杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥树皮。

2 方法与结果

2.1 产地加工

将三批样品各分取2份，刮去粗皮，按照下述方法加工处理后备用。

2.1.1 直接晒干样品 将鲜杜仲皮摊开，直接晒干。

2.1.2 不同发汗样品 发汗—晒干 将鲜杜仲皮内面相对，覆上棕垫，进行“发汗”至内皮呈紫褐色，晒干。

微煮—发汗—晒干 将鲜杜仲皮于沸水中微煮5min，晾干，余同“发汗—晒干”法。

微煮—切制—发汗—晒干 将鲜杜仲皮于沸水中微煮5min，晾干，将皮切制成长约3cm，宽约2cm的小方块，装入密封袋，放入木箱中“发汗”至内皮呈紫褐色，晒干。

2.2 水分含量测定

按《中国药典》2015版一部附录Ⅸ H第一法测定经不同加工方法的三批样品水分含量, 各样品平行测定2 次。结果见表1。

表1 杜仲不同加工样品水分含量(n=2)

结果所示，各样品的水分含量在7.62～11.18%之间，均符合《中国药典》2010版一部杜仲项下规定的杜仲的水分不得超过13.0%。

2.3 PDG含量测定

《中国药典》2005年版和2010年版均采用索氏提取法制备供试品，该法操作较繁琐费时。本文以药典杜仲项下含测方法为基础，结合相关文献[4～6]，并通过方法学研究，对提取方法进行改进。

2.3.1 色谱条件 色谱柱为Amethyst C18柱(250mm ×4.6mm，5μm)，以甲醇-水（25：75）为流动相，流速1.0ml/min，柱温25℃，检测波长277nm，进样10μl。色谱图见图1。

图1 对照品（A）和供试品（B）HPLC图

2.3.2 对照品溶液的制备 取PDG对照品适量约5mg，精密称定，加甲醇制成含PDG 0.5mg/mL的溶液，摇匀，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备 取不同加工方法的三批样品（各样品分取两份）约3g，剪成碎片，揉成絮状，各取约2g,精密称定，加入三氯甲烷适量20ml，超声提取30分钟，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，再加甲醇20ml超声45分钟，过滤，甲醇洗涤3次，将滤液于50℃水浴条件下挥甲醇至适量，转移至10ml量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，即得供试品溶液[4]。

2.3.4 线性关系的考察 分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10μl，按“2.3.1”色谱条件，注入液相色谱仪，测定峰面积。以Y为峰面积，X为进样量（μg），得到PDG的线性回归方程为：Y=454.1X-391.46，相关系数r= 0.999 0。结果表明，PDG在1～5μg范围内与峰面积值呈良好的线性关系。

2.3.5 含量测定 按上述色谱条件，精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算样品中PDG的量。结果见表2。

表2 杜仲不同加工样品PDG质量分数(n=2)

结果表明，样品中PDG含量在0.16%～0.22%，均符合《中国药典》杜仲含量测定项下“本品含松脂醇二葡萄糖苷(C32H42O16)不得少于0.10%”的规定；样品中PDG的高低分别为：“微煮—发汗—晒干” ＞“发汗—晒干”＞“微煮—切制—发汗—晒干”＞“直接晒干”。

3 讨论

3.1 实验结果表明，直接晒干的样品中PDG含量较低，而发汗后样品中PDG含量增加，说明杜仲产地加工中进行“发汗”是必要的；经微煮后发汗样品PDG含量较未微煮发汗样品增加，可能此步骤抑制了分解PDG的某些酶类。

3.2 本文参考厚朴药材的新加工方法[3]，将鲜杜仲皮进行 “微煮—切制—发汗—晒干”加工实验，结果表明，PDG含量较“微煮—发汗—晒干”及“发汗—晒干”低，显示在切制后再“发汗”有一定损失。

3.3 索氏提取法制备杜仲供试品较费时且繁琐，本研究结合文献[5]采用超声法代替传统的索氏提取法提取杜仲中的PDG，简单、方便、可行。此外，还有人提出以乙腈－磷酸水溶液(15：85)为流动相，可使PDG出峰时间相对缩短，锋行窄而对称且分离度高[6]。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2015 年版一部[S].北京：中国医药科技出版社,2015.

[2] 何方,王承南,张康健,等.杜仲产区的划分[J].经济林研究,2010,28(2)：87.

[3] 冯斌,陈文文,张大永.厚朴及其加工工艺：中国,200810055725.5 [P].2008-12-31.

[4] 姜新义,杨中林,李萍.杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量测定的样品处理方法优化[J].药学进展,2009,33(1)：30.

[5] 李晔,刘峰,李彤晖,等.杜仲药材含量测定方法的研究[J]．西北药学杂志,2010,25(5)：348.

[6] 王月茹,谢伟,王西芳,等.HPLC测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量[J].现代中医药,2009,29(6)：78.

（责任编辑：胡慧玲）

Study on the influence of different processing methods on pinoresinol diglucoside (PDG) content in Duzhong

/ WU Bing, LONG Fei, WEI Ying-fang, XU Ping, ZHOU Yuan-li(School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:To investigate the influence of different processing methods on pinoresinol diglucoside (PDG) content in Duzhong, and provide evidence for the optimization of Duzhong processing method.Method:Three batches raw material medicine were processed by four methods including "Direct drying", "Fahan-Drying”, "Slightly decocted in boiling water-Fahan-Drying", " Slightly decocted in boiling water-Cutting- Fahan-Drying ", respectively. The pinoresinol diglucoside content was detected by HPLC.Result:The content of PDG in processed Duzhong was in the order of "Slightly decocted in boiling water-Fahan-Drying" ＞ "Fahan-Drying " ＞ " Slightly decocted in boiling water-cutting- Fahan-Drying "＞"Direct drying".Conclusion:”Fahan” is necessary in Duzhong Processing. Duzhong has better quality after being processed by "Fahan" and"Slightly decocted in boiling water".

Duzhong; processing method; Fahan; slightly decocted in boiling water; pinoresinol diglucoside; HPLC

R282.4

A

1674-926X(2016)05-004-03

成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室 四川省中药资源系统研究与开发利用重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137

吴兵（1966-），男，主要从事中药品种、质量与资源研究 Email：466945108@qq.com

龙飞（1977-），男，博士，主要从事的研究方向：中药品种、质量与资源研究

Email：514195017@qq.com

2015-11-11