葛根素对成骨细胞中miRNA-204的调控及其与Runx2基因表达的关系

张莹莹 周建斌 赵凤鸣 詹秀琴

南京中医药大学基础医学院生物教研室，江苏 南京 210023

骨质疏松症(osteoporosis，OP)是一种因骨量低下、骨微结构破坏，导致骨脆性增加、易发生骨折为特征的全身性骨病(世界卫生组织，WHO)[1]，是由于成骨细胞(OB)形成的新骨量少于被破骨细胞(OC)吸收的旧骨量，骨代谢从而发生负平衡，导致骨总量丢失所致。Runx2是骨发育过程中激活与启动骨髓基质干细胞(BMSCs)向OB分化并调节OB成熟的重要转录因子，上调多种成骨相关基因的表达，对膜内和软骨内骨化成骨均有控制作用，因此，其表达、活性下降与OP发病密切相关。miRNA是一类机体内源性表达的、长度在18到25个核苷酸的非编码小分子RNA，这些仅占人类基因1%的miRNA分子，却可控制人类三分之一以上基因的表达、修饰、转录和翻译过程。它能够在转录后调节基因表达，从而影响多种生物学过程，包括细胞的增殖[2]、分化[3]、凋亡[4]、发育[5]。miRNA的发现可能成为极有应用价值的分子标志物，为骨质疏松症的治疗提供新的靶标。我们以前的研究发现，葛根素可促进成骨细胞增殖和分化，但其机制是否与细胞内的Runx2和miRNA分子有关，且二者之间是否有关联，是本文要研究的问题。

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1细胞：MC3T3-E1细胞购自中国科学研究院上海细胞库。

1.1.2药物：葛根素标准品：购自中国药品生物制品检定所，20 mg/支，纯度为96.0%，性状：白色粉末，干燥密封保存。

1.1.3试剂：α-MEM培养基(维森特生物技术有限公司，货号：310010008)；含EDTA的25%胰蛋白酶(GIBCO,USA)；胎牛血清(GIBCO,USA)；miRNA逆转试剂盒(Takara 036A)；Trizol(Invitrogen,USA)；Realtime PCR SYBR premix 2×(Takara RR420A,Japan)；目的基因一抗(rabbit Runx2)(Cell Signaling Technology)；……