紫景天总黄酮的分离制备及鉴定研究

王晓峰，王　伟*，张　艳，牛志多，刘　新，苗　强，刘　聪，袁　琳，孔晨飞

(1.吉林大学中日联谊医院 口腔科,吉林 长春130033；2.吉林大学中日联谊医院科学研究中心；3.吉林省中医药科学院)



紫景天总黄酮的分离制备及鉴定研究

王晓峰1，王伟1*，张艳1，牛志多3，刘新1，苗强1，刘聪1，袁琳1，孔晨飞2*

(1.吉林大学中日联谊医院 口腔科,吉林 长春130033；2.吉林大学中日联谊医院科学研究中心；3.吉林省中医药科学院)

牙周炎是口腔科常见病多发病，是导致牙齿丧失的主要原因之一。目前主要治疗方法是以局部治疗为主，药物治疗主要是牙周袋用药。目前牙周袋用药基本是抗生素制剂，易产生耐药性及菌丛失调等副作用[1]。

紫景天为景天科多年生草本植物，在东北地区的长白山具有广泛分布。其主要化学成分为多种黄酮类化合物和活性多糖等。全草入药，具有收敛止血、清热解毒及调节免疫功能等功效。此外，紫景天还能减轻或消除再生障碍性贫血引起的蛋白质代谢障碍、消肿生肌、抗炎镇痛及促进溃疡愈合[2-4]。我们前期研究发现其鲜汁制成的制剂对口腔黏膜病有治疗作用。因此我们采用现代的方法，榨取紫景天新鲜茎叶的汁液，然后进行有效成分的提取和分离，为紫景天的开发利用提供理论依据。

1　材料和方法

1.1材料与试剂紫景天全草，由吉林省中医药科学院制剂室提供。韩国英麟高效液相色谱系统：SP930D色谱泵、UV730D紫外检测器，7725i手动进样器，色谱3000工作站。槲皮素对照品、山柰素对照品，购于中国药品生物制品检定所。其他试剂均为色谱纯或分析纯。

1.2总黄酮的提取

1.2.1紫景天鲜茎叶捣碎轧炸取汁，取轧炸汁用石油醚脱脂后，用正丁醇一倍以上，提取2次以上，合并正丁醇液，回收正丁醇浓缩蒸干、干燥。

1.2.2紫景天干燥药材，加水煎煮，煎煮液用石油醚脱脂后，用正丁醇一倍以上，提取2次以上，合并正丁醇液，回收正丁醇浓缩蒸干、干燥。

1.2.3紫景天干燥药材，用乙醇(60%-80%)一倍以上，回流提取2次以上，乙醇液回收乙醇浓缩至无醇味，水液用石油醚脱脂后，用正丁醇一倍以上，提取2次以上，合并正丁醇液，回收正丁醇浓缩蒸干、干燥后得总黄酮。

1.3总黄酮提取物中槲皮素和山柰素的测定

采用高效液相色谱法，具体实验步骤如下：

槲皮素对照品溶液：精密称取槲皮素对照品4.84 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，浓度为0.484 mg/ml。作为槲皮素对照品母液。

山柰素对照品溶液：精密称取山柰素对照品8.22 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，浓度为0.822 mg/ml。作为山柰素对照品母液。

混合对照品溶液：精密量取槲皮素对照品母液0.2 ml、山柰素对照品母液0.15 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为槲皮素、山柰素混合对照品溶液。浓度：槲皮素为9.68 μg/ml、山柰素为12.33 μg/ml。

供试品溶液的制备：取样品0.1 g，精密称定，置100 ml量瓶中，加入甲醇90 ml，超声处理30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，离心，精密量取离心液10 ml，精密加入盐酸5 ml，置90℃水浴中加热水解1 h，取出，迅速冷却，转移至50 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。精密量取上述样品1.0 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，进样测定。

标准曲线的制备：精密吸取槲皮素、山柰素混合对照品溶液2、4、8、12、16 μl，分别注入液相色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标，以对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线。

2　结果

2.1参考药典方法，采用高效液相色谱法，供试品中的槲皮素、山柰素能够得到很好的分离，标准曲线结果见图1。

2.2样品测定结果见表1。

表1　样品含量测定结果

结果：槲皮素和山柰素的总量超过了50%。

图1　槲皮素、山柰素标准曲线

2.3本品不同时间的累积释放率见表2和释放曲线图(图2)。释放速率经拟合，符合一级动力学方程。

图2　药物释放曲线

时间累积释放度11.1433.575.5486.0229.59b2.1899m1.081941524公式y=b*m^x

3　讨论

在牙周炎的治疗中，主要为控制或消除炎症并促进组织再生。针对牙周炎病变过程中牙周组织的破坏和牙槽骨的吸收，阻断炎症因子的作用，研究开发高效低毒的牙周炎治疗药物为临床治疗牙周炎所亟需。

在最近的报道中，祖国医学在牙周炎防治中的作用倍受广大研究人员重视，中医药的发掘利用取得了长足进步。一些中草药的提取物或单体被证实具有抗炎和直接或间接的抑制破骨细胞分化和功能的作用[5]。中药具有毒副作用少、价格便宜、标本兼治的优势，广受关注。但中药有效成分的作用机理往往不够明晰，不能得到国际上的普遍认可，从而限制了其在临床上的应用。

在我们的研究工作中，采用长白山野生药材紫景天作为原料，对其进行了有效成分的提取、分离及鉴定研究，将为中药提取物在牙周炎临床治疗上的应用提供理论依据。

[1]Cuesta AI,Jewtuchowicz VM,Brusca MI,et al.Antibiotic susceptibility of Staphylococcus aureus isolates in oral mucosa and pockets of patients with gingivitis-periodontitis[J].Acta Odontol Latinoam，2011，24:35.

[2]Lin YC,Luo HY,Jin QX.Study on effect of total flavanones of Sedum sarmentosum on apoptosis of hepatic stellate cells and its mechanism[J].Zhongguo Zhong Yao Za Zhi，2015， 40:3273.

[3]Lee SL,Chin TY,Lai CL,et al.Sedum mexicanum Britt.Induces Apoptosis of Primary Rat Activated Hepatic Stellate Cells[J].Evid Based Complement Alternat Med,2015:194373.

[4]Zhong D,Zhong Z,Wu L,et al.Thermal Characteristics of Hyperaccumulator and Fate of Heavy Metals during Thermal Treatment of Sedum plumbizincicola[J].Int J Phytoremediation,2015,17:766.

[5]Huang BP,Lin CH,Chen YC,et al.Anti-inflammatory effects of Perilla frutescens leaf extract on lipopolysaccharide-stimulated RAW264.7 cells[J].Mol Med Rep,2014,10:1077.

吉林省科技厅白求恩基金专项(20160101080JC);吉林省直卫生专项项目(CZZR2014010)

1007-4287(2016)08-1274-02

2016-02-16)