人HP1α/pEGFP-N1真核表达载体的构建及其表达和定位*

吴婷，杨茂，何涛，杨文理,2

（西南医科大学基础医学院:1肿瘤医学研究所；2生物化学教研室,四川泸州646000）

人HP1α/pEGFP-N1真核表达载体的构建及其表达和定位*

吴婷1，杨茂1，何涛1，杨文理1,2

（西南医科大学基础医学院:1肿瘤医学研究所；2生物化学教研室,四川泸州646000）

目的：用增强型绿色荧光蛋白作为标记物，观察人类异染色质相关蛋白HP1α在HeLa细胞中的表达及定位。方法：用RT-PCR方法扩增获得HP1α基因编码序列，将其定向克隆至含增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescence protein, EGFP）的真核表达载体pEGFP-N1中，构建HP1α/pEGFP-N1荧光蛋白融合基因表达载体。并由脂质体介导将其转染HeLa细胞，荧光显微镜观察其表达情况及亚细胞定位。结果：双酶切与测序结果表明目的基因序列完全正确；荧光观察结果证实HP1α主要存在于细胞核内。结论：成功构建了目的基因HP1α的真核表达载体，并在HeLa细胞中获得有效表达和定位。

异染色质相关蛋白；绿色荧光蛋白；基因表达定位；HeLa细胞

HP1α（heterochromatin protein 1 homolog alpha）是异染色质相关蛋白1家族成员之一，在进化上高度保守[1-2]。人类HP1α的编码基因位于染色体12q13.13的染色盒同源物5（chromobox homolog,CBX5）[1-2]。有资料显示，HP1α与人类多种肿瘤密切相关，如乳腺癌[2-4]，甲状腺癌[5]，前列腺癌[6-7],肾癌[8]。HP1α参与肿瘤发生、发展、浸润和转移，在这些过程中起着重要的作用，使得HP1α可能作为肿瘤的预测靶点和治疗预后观测指标。但是，HP1α对宫颈癌细胞HeLa生物学行为的影响目前尚不清楚，深入研究HP1α在宫颈癌发生发展中的作用及其机制具有重要作用。因此，我们构建了可表达EGFP（增强型绿色荧光蛋白）标签的HP1α基因真核表达载体HP1α/ pEGFP-N1，并将其转染宫颈癌细胞，对HP1α在细胞内的表达和定位进行了初步的研究。……