鸡骨草茎多糖含量测定

梁青青，黄月圆，李锡明，黄锁义，钟兆银

(1.右江民族医学院 临床学院，广西 百色 533000；2.右江民族医学院 基础医学院，广西 百色533000；3.右江民族医学院 药学院，广西 百色 533000;4.右江流域特色民族药研究广西高校重点实验室，广西 百色 533000)



鸡骨草茎多糖含量测定

梁青青1，黄月圆2，李锡明1，黄锁义3,4*，钟兆银3，4

(1.右江民族医学院 临床学院，广西 百色 533000；2.右江民族医学院 基础医学院，广西 百色533000；3.右江民族医学院 药学院，广西 百色 533000;4.右江流域特色民族药研究广西高校重点实验室，广西 百色 533000)

目的: 提取鸡骨草茎中的多糖，并对其含量进行测定。方法: 利用水提醇沉淀法提取多糖，用葡萄糖标准品绘制标准曲线，利用苯酚-硫酸法测定鸡骨草茎的多糖含量。结果：回归方程为：y=0.1175x-0.026 7，相关系数r=0.999 7，鸡骨草茎多糖含量为1.534%，平均回收率为98.16%，RSD=0.4623%(n=5)。结论: 苯酚-硫酸法具有简单、快速、准确可靠等优点；提取鸡骨草茎的多糖并对其含量进行测定，为鸡骨草的进一步开发利用提供了依据。

鸡骨草茎；多糖提取；含量测定；苯酚-硫酸法

植物多糖是植物体内广泛存在的生物活性物质，除具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、抗病毒、降血脂等生物活性外，还具有清除自由基、抗氧化、抗衰老、抗疲劳作用[1-2], 近年来对植物多糖的研究已经成为一个热点，对于多糖抗氧化活性的研究大多以粗多糖为主[3]。

鸡骨草(Abruscantoniensis)，常用异名有黄头草、大黄草，为豆科植物广东相思子的全草。味甘、味苦、性凉，具有清热利湿、散瘀止痛的功效，主要生长于山地或旷野灌木林边。其植株含有相思豆碱、皂苷、黄酮苷、胆碱、甾醇、氨基酸、糖类化合物等化学成分。鸡骨草广泛分布于南方各省区，在春夏潮湿季节常用鸡骨草煲汤作为药膳食疗[4]。并且广泛用于黄疽,胁肋不舒,胃肮胀痛,急、慢性肝炎[5]，广西是鸡骨草的主要产区[6]。本文用水提醇沉淀法提取鸡骨草茎中的多糖，并采用苯酚-硫酸法测定鸡骨草茎的多糖含量，为我们广西鸡骨草资源的进一步开发提供理论依据。

1　实验材料与试剂

1.1原料

鸡骨草茎购自广西百色市右江区，烘干粉碎备用。

1.2试剂

95%乙醇(AR)，无水乙醇(AR)，乙醚(AR)，苯酚(AR)，浓硫酸(AR)，葡萄糖标准品(成都科龙化工试剂厂，批号20041102)。

1.3仪器设备

FA1004电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；台式连续投料粉碎机(温岭市林大机械有限公司)；722N型紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；HH-S4数显恒温水浴箱(上海上登实验设备有限公司)。

2　结果分析

2.1鸡骨草茎多糖提取

精确称取鸡骨草茎粉末15 g，分成3份，放入200 mL的烧杯中，分别加入水100 mL，将其放在65 ℃的恒温水浴锅3 h，抽滤用500 mL的烧杯收集滤液，用相同的方法重复提取3次，合并3次滤液，用恒温水浴锅加热至98 ℃浓缩至32 mL，冷却至室温，加95%已醇90 mL，背光静置24 h后，抽滤，分出沉淀物依次用无水乙醇和乙醚洗两次，得到鸡骨草茎多糖固体0.186 g。

2.25%苯酚溶液的配制

量取12.5 mL苯酚，置于250 mL的容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀，得5.0%的苯酚溶液。

2.3葡萄糖对照品溶液的配制

精密称取干燥葡萄糖标准品0.040 g，置于100 mL的容量瓶中，定容，摇匀，得0.4 mg/mL的葡萄糖对照液。

2.4 标准曲线的制备

分别量取葡萄糖对照液2、4、6、8、10 mL，并加入到100 mL的5个容量品中,定容,摇匀,得到0.016 mg/mL,0.032 mg/mL,0.048 mg/mL，0.064 mg/mL，0.080 mg/mL的不同浓度的对照品溶液，精确量取1.0 mL置于50 mL的容量瓶中，再分别加入5%的苯酚溶液1.5 mL，再加入7.5 mL浓硫酸，摇匀室温静置30 min。用722N型可见分光光度计，在484 nm处测量吸光度，以对照品浓度C为纵坐标，吸光度A为横坐标做标准曲线。建立回归方程(表1)。

表1　紫外线可见分光光度计测定葡萄糖对照液吸光度

根据表1得回归方程：C=0.117 5A-0.026 7，

r=0.999 7。

2.5鸡骨草茎多糖含量测定

精确称取0.010 g的鸡骨草茎多糖置于100 mL的烧杯中，加入1 mol/L H2SO42 mL加热水解2 h，冷却至室温，将其转移至100 mL的容量瓶中，定容，摇匀，得到供试样品溶液，按照绘制标准曲线的方法，称取5.0mL的样品溶液分别置于5个50 mL的烧杯中，先后加入1.5 mL的苯酚溶液，再加入7.5 mL的浓硫酸溶液，混合均匀后放置20 min，用722N型可见分光光度计在484 nm处测量吸光度值，由回归方程可以计算鸡骨草茎多糖的含量，其测量结果如表2：

表2　紫外线可见分光光度计平行测定鸡骨草茎

由回归方程及表2计算得出鸡骨草茎多糖含量为：1.534%。

2.6回收率的测定

精确称取0.010 g的鸡骨草茎多糖置于100 mL的烧杯中，加入1 mol/L H2SO42 mL加热水解2 h，冷却至室温，将其转移至100 mL的容量瓶中，定容，摇匀。按照“2.4”方法，往不同浓度的对照品系列溶液中，分别加入0.1 mL上述溶液进行糖含量的测定，得到平均回收率98.16%，RSD=0.4623%(n=5)

3　结果和讨论

3.1随着对多糖生物活性的深入研究，多糖的生物活性机理，功效因子会更加明显，它的应用领域也将会更加扩宽[7]。

3.2多糖是强极性分子，据其溶于水而不溶于有机溶剂的特点，采用水提醇沉法提取，防止引起糖苷键的断裂[8]。

3.3本实验采用水提醇沉淀法及苯酚-硫酸法对鸡骨草茎多糖含量进行提取和测定，使用722N型可见分光光度计在484 nm处测量吸光度值。该实验结果显示鸡骨草茎多糖的含量为1.534%，平均回收率为98.16%,RSD=0.4623%(n=5)。

3.4苯酚-硫酸法显色稳定，精密准确，重现性好，且灵敏度显著提高，这有利于低密度供试品溶度的分析，扩大了可分析的样品范围[9]，该方法可用于鸡骨草茎多糖含量的测定。

[1]谢好贵,陈美珍,张玉强.多糖抗肿瘤构效关系及其机制研究进展[J].食品科学,2011,32(11):329-333.

[2]何余堂,潘孝明.植物多糖的结构与活性研究进展[J].食品科学,2010,31(17):493-496.

[3]谭冰,严焕宁,黄锁义,等.广西壮药鸡骨草多糖的提取及对羟自由基清除作用的研究[J].检验医学教育,2011,18(4):36-39.

[4]李荣,黄秋妹,李子行. 浅谈鸡骨草的药理作用[J].首都医药，2013(10):20.

[5]国家药典委员会.中国药典：一部[S].北京:化学工业出版社,2005:135.

[6]黄荣韶,玉永雄,胡艳，等. 鸡骨草总黄酮含量测定及其含量动态变化研究[J].中国中药杂志，2006,31(17)：1428-1430.

[7]李小凤，韦庆宁，史柳芝，等.泽泻多糖的提取及含量测定[J].山东化工，2012,41(7)：26-28.

[8]杨艳，徐应淑.川、黔地区金钗石斛多糖的含量测定[J].中国药房，2010，21(27)：2552-2553.

[9]阴婉婷，李彤，马辰，等.改良的苯酚-硫酸法测定蛹虫草多糖含量[J].安徽农业科学, 2015,43(4):117-118,173.

Determination of the Content of Polysaccharide Extract of Stems ofAbruscantoniensis

Liang Qingqing1，Huang Yueyuan2，Li Ximing1，Huang Suoyi3,4*，Zhong Zhaoyin3,4

(1.College of Clinical Medicine, Youjiang Medicine University for Nationalities, Baise 533000,China; 2.College of Basic Medicine, Youjiang Medicine University for Nationalities, Baise 533000,China; 3.College of Pharmacy, Youjiang Medicine University for Nationalities, Baise 533000,China; 4.Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory of the Characteristics of Ethnic Medicine of the Youjiang Valley, Baise 533000, China)

Objective: To extract polysaccharides from stems ofAbruscantoniensisand determine its content. Methods: Using water extraction and alcohol precipitation method to extract polysaccharide, drawing standard curve with glucose sugar standard products, and using phenol-sulfuric acid method to determine polysaccharide content of stems ofAbruscantoniensis. Results: regression equation:y=0.117 5x-0.026 7, correlation coefficientr=0.999 7, polysaccharide content of stems ofAbruscantoniensisis 1.534%, average recovery is 98.16%, RSD=0.4623% (n=5) .Conclusion: Phenol-sulfuric acid method is simple, fast, accurate, reliable; polysaccharides from stems ofAbruscantoniensiswere extracted and determined, and the study provided scientific basis for further development and utilization of stems ofAbruscantoniensis.

stems ofAbruscantoniensis; extraction of polysaccharide; determination of content; phenol-sulfuric acid method

10.3969/j.issn.1006-9690.2016.04.011

2016-01-08

国家中医药管理局“十二五”中医药重点学科中药化学学科建设项目(国中医药人教发[2012]32号)；广西自然科学基金资助项目(2013GXNSFAA019240);广西重点学科药物化学学科建设项目(桂教科研[2013]16号)；2016年自治区级大学生创新创业训练计划项目(201610599043)。

梁青青(1993—)女，本科在读，主要研究方向：天然产物化学、药物化学、食品卫生。E-mail:787077792@qq.com

黄锁义(1964—)，男，教授，硕士生导师，主要从事天然药物化学、中药化学、药物分析及食品卫生等研究工作。

E-mail:huangsuoyi@163.com

R284.1

A

1006-9690(2016)04-0040-03