中风通络丸对大鼠局灶性脑缺血模型的影响

邓巧君，周 顺，刘丰贤

（1.长沙市中医院，长沙410002；2.湘西州民族中医院，吉首416000；3.湖南师大医学院，长沙 410013）

中风通络丸对大鼠局灶性脑缺血模型的影响

邓巧君1，周 顺2，刘丰贤3

（1.长沙市中医院，长沙410002；2.湘西州民族中医院，吉首416000；3.湖南师大医学院，长沙 410013）

目的：观察中风通络丸抗脑缺血的作用，为其临床用药提供实验依据。方法：各组雄性SD大鼠采用线栓法复制局灶性脑缺血模型，造模后各组大鼠继续给药3d。于造模后24h及末次给药后次日，对各组大鼠进行神经功能评分，麻醉取脑，TTC染色，测量梗死面积并计算梗死率。结果：中风通络丸中、高剂量组能显著降低大鼠脑缺血模型神经功能评分等级，显著减少脑缺血所致的脑梗死面积百分比。结论：中风通络丸能明显改善脑缺血大鼠神经功能症状，降低脑脏器系数及脑梗死面积百分比，具有明显抗脑缺血作用。

中风通络丸；抗脑缺血

中风通络丸为长沙同瑞医药科技开发有限公司产品，由黄芪、葛根、丹参、等组成，具有平肝潜阳、益气和血、通络的功效，主要用于脑中风、偏瘫等。本试验采用线拴法复制大鼠局灶性脑缺血模型，观察中风通络丸对大鼠局灶性脑缺血模型的的保护作用。

1 实验材料

1.1 药品 中风通络丸，由长沙同瑞医药科技开发有限公司提供；华佗再造丸，由广州齐星药业有限公司生产。

1.2 实验动物 SD雄性大鼠60只，SPF级，体重300～350 g，购于长沙天勤生物技术有限公司。

1.3 主要试剂 水合氯醛，天津市科密欧化学试剂有限公司产品；氯化三苯四氮唑（TTC），Amresco公司产品；Na2HPO4·12H2O，广东光华科技股份有限公司产品；Na2HPO4·2H2O，江苏强盛化工有限公司产品；pH=7.4的1.0mol/L磷酸缓冲液（PBS）：用110.84g Na2HPO4·12H2O加14.10g Na2HPO4·2H2O加蒸馏水溶解至2000 mL，即成；2%TTC染色液：20gTTC粉末加以上PBS溶解至1000 mL，即成。

1.4 仪器软件 AUY220型分析天平，长沙精开仪器设备有限公司；Image pro plus图像处理软件（美国Media Cybernetics公司）。

2 实验方法［1，2，3，4，5，6］

2.1 造模与分组 SD大鼠60只，雄性，300～350g，按体重分层随机分为6组，每组10只动物，即：假手术组、模型对照组、华佗再造丸（1.978 g/kg）组、中风通络丸0.742 g生药/kg、1.483g生药/kg、2.966 g生药/kg，各给药组大鼠按15 mL/kg灌胃给予相应剂量药液，1次/日，连续10d，假手术组及模型对照组灌胃给予等体积蒸馏水。于第4d给药后1h，除假手术组外，其余组大鼠均按以下方法制备大鼠脑缺血模型：大鼠腹腔注射10%的水合氯醛300 mg/kg麻醉，从颈部正中行切口，分别分离左侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA），结扎颈总动脉近心端、颈外动脉起始端，经颈总动脉插入0.234 mm直径的鱼线作为线拴（线端高温熔化成光滑圆头，在2.0 cm处用手术线绑一死结定位），插入深度约为2.0 cm，分层缝合肌肉和皮肤。假手术组除不进行颈动脉结扎及插线处理外，其余操作与模型组相同。手术完成后每只大鼠立即腹腔注射青霉素，20万单位/只，1次/日，连续3d。各给药组大鼠造模后再连续给药3d。于手术后24 h及末次给药后次日对各组大鼠进行神经功能评分；末次给药次日，各组大鼠腹腔注射300 mg/kg的10%水合氯醛麻醉，取脑，称重，然后进行TTC染色。

2.2 检测指标

2.2.1 神经行为学评分 于手术后24 h及末次给药后次日对各组大鼠进行神经功能评分，评分标准如下：0分为无神经功能缺损症状；1分为不能伸展前爪，轻度神经功能缺损；2分为转圈运动，中度神经功能缺损；3分为向病灶对侧跌倒，重度神经功能缺损；4分为不能自发行走、意识水平下降。

2.2.2 脑脏器系数 准确称取脑重量，脑脏器系数=脑重量（g）/体重（100g）。

2.2.3 脑部缺血相对梗死面积 末次给药后次日各组大鼠腹腔注射水合氯醛300 mg/kg麻醉，冰上断头取脑，-20℃冷冻约15 min。待其稍变硬时，用刀片将脑切成厚2 mm的冠状切片。浸于2%的TTC染色液中，37℃避光孵育约15 min，翻面继续染15 min。正常脑组织染为深红色，脑梗死区不染色（苍白色）。所用脑组织切片均在距离镜头15 cm处照相，用Image plus图像处理软件计算相对梗死面积，并计算梗死率（%）=（脑切片面积/梗死面积）×100%。

2.3 剂量设计 中风通络丸临床拟用剂量为18g生药/日，按成人平均体重70kg计算，临床每日用量为0.257g生药/kg。按体表面积折算大鼠等效剂量为1.483g生药/kg。本实验以大鼠临床等效剂量的1/2、1、2倍作为大鼠实验中风通络丸的低、中、高剂量，即0.742g生药/kg、1.483g生药/kg、2.966g生药/kg。

2.4 统计方法 采用SPSS16.0进行统计分析，统计学意义的水平设定为P＜ 0.05。计量资料采用均数±标准差。用Leven’s test方法检验正态性和方差齐性。如果符合正态性和方差齐性，用单因素方差分析（Oneway ANOVA）和post Hoc LSD进行统计分析；如果不符合正态性和方差不齐，则用Kruskal-Wallis检验。如果Kruskal-Wallis检验有统计学意义（P＜ 0.05），则用Dunnett’s Test（非参数方法）进行比较分析。评价时考虑统计学差异和生物学意义。

3 结果与讨论

3.1 中风通络丸对脑缺血大鼠神经功能评分的影响如表1所示，与假手术组比较，模型对照组大鼠造模后24 h及给药7 d后神经功能评分显著增加（P＜0.01），提示脑缺血模型复制成功；与模型对照组比较，造模后24h后中风通络丸中、高剂量组大鼠神经功能评分显著减少（P＜0.05），给药7d后中风通络丸低、中、高剂量组大鼠神经功能评分显著减少（P＜0.01）

表1 中风通络丸对脑缺血大鼠神经功能评分的影响（n=10）

3.2 中风通络丸对脑缺血大鼠脑脏器系数的影响 如表2所示，与假手术组比较，模型对照组大鼠脑脏器系数显著升高（P＜0.01），达0.634±0.057；与模型对照组比较，中风通络丸中、高剂量组大鼠脑脏器系数显著降低（P＜0.01）。

表2 中风通络丸对脑缺血大鼠脑脏器系数的影响（n=10）

3.3 中风通络丸对脑缺血大鼠脑梗死面积百分比的影响 如表3所示，与假手术组比较，模型对照组大鼠脑梗死面积百分比达31.86±8.09%，提示脑缺血模型复制成功；与模型对照组比较，中风通络丸中、高剂量组大鼠脑梗死面积百分比显著减少（P＜0.01）（见图1）。

表3 中风通络丸对脑缺血大鼠脑梗死面积百分比的影响（n=10）

图1 中风通络丸对脑缺血大鼠脑组织缺血区域面积的影响

以上结果表明，中风通络丸能明显改善脑缺血大鼠神经功能症状，降低脑脏器系数及脑梗死面积百分比，具有明显抗脑缺血作用。

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Effect of Zhongfeng Tongluo pills on the CerebralIschemia Injury Model of Rat

Deng Qiao-jun1， Zhou Shun2， Liu Feng-xian3
（1. Changsha Hospital of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410002， China； 2.Ethnic Chinese Medicine Hospital of Xiangxi Autonomous Prefecture， Jishou 416000， China；3.Medical College of Hunan Normal University，Changsha 410013， China）

Objective To investigate the anti-cerebral ischemia effects of and provide experimental evidence for clinical use. Methods The ischemic model in each group was established by suture method using male SD rats， then rats were treated with drugs continuously for 3 days. The neurological function was evaluated at the time 24h after modeling and the day after the last ad ministration. The brains were obtained from anesthesia SD rats and stained with TTC. the infarction sizes and infarction rate were measured and calculated. Results Zhongfeng Tongluo Pills with medium or high doses reduced neurological rating scale and the percentage of infarct area caused by cerebral ischemia significantly. Conclusion Zhongfeng Tongluo Pills showed distinct anti-cerebral ischemia effect through improving the neurological symptoms of cerebral ischemia significantly in rats，reducing brain viscera coefficient and the percentage of infarction area.

zhongfeng tongluo pills； anti-cerebral ischemia

R285.5

A

1673-016X（2016）02-0142-04

2015-08-20

刘丰贤 ，E-mail：hplc@foxmail.com