广枣提取物对大鼠酒精性肝病的保护作用*

刘　霞，李　伟，邓春芳，范小娜

(赣南医学院，江西　赣州　341000)



广枣提取物对大鼠酒精性肝病的保护作用*

刘霞，李伟，邓春芳，范小娜

(赣南医学院，江西赣州341000)

目的:探讨广枣提取物对酒精性肝病大鼠的作用。方法：将大鼠随机分为模型组、广枣提取物低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性对照组(益肝灵)和正常对照组。采用梯度浓度酒精、分次少量灌胃的方法建立大鼠慢性酒精性肝病模型，同时给予广枣提取物保护。8周末处死大鼠，测定有关指标。结果：经广枣提取物干预的大鼠血清ALT、AST、TG、CHO水平和肝组织中MDA含量明显低于模型组(P< 0.05或P< 0.01)，同时肝组织中SOD、GSH-Px活性明显升高，与模型组相比差异显著(P<0.05或P< 0.01)。结论：广枣提取物对酒精性肝病具有一定的保护作用。

广枣提取物；酒精性肝病；大鼠

酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)是由于长期大量饮酒导致的中毒性肝损伤，包括轻症酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化5种类型[1]，其中以酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝硬化是其最常见的三种肝损伤，它们往往同时并存并相互转化。随着人民生活水平的提高，ALD的发病率呈逐年上升趋势，已成为仅次于病毒性肝病的第二大肝病病种[2]。目前对于ALD尚缺乏有效的治疗手段，药物治疗总体效果差，毒副作用大，而且费用高。本研究以酒精性肝病大鼠模型为考察对象，探讨广枣提取物对酒精性肝病的治疗作用，为临床治疗酒精性肝病药物的研发提供实验依据。

1　材料与方法

1.1动物SPF级雄性 wistar 大鼠60只(由江西中医药大学动物中心提供，动物合格证号2011-130)，体重180～200 g。

1.2主要试剂广枣药材(毫州市中药饮片厂，批号130426)；益肝灵片(湖南省株洲市制药三厂，批号：20020808)；丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯 (TG)、胆固醇(CHO) 试剂盒 (北京利德曼生化技术有限公司)；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、丙二醛(MDA ) 试剂盒(南京建成生物工程研究所)；无水乙醇(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)。

1.3广枣提取物的超声提取[3]将广枣50 ℃恒温烘干后粉碎过40目筛，按液料比35∶1(v∶m)加入62%乙醇溶液浸泡15 min后，在70 ℃下超声55 min，抽滤。待样品冷却到室温后再重复处理1次。合并滤液，用旋转蒸发仪回收溶剂，浓缩后产物真空冷冻干燥即得。

1.4动物分组与处理60只大鼠正常喂养1周后，随机分为模型组(A组)、低剂量组(B组)、中剂量组(C组)、高剂量组(D组)、阳性对照组(E组)和正常组(F组)，每组10只。实验组大鼠随意饮用5%酒精3天， 第4天换成10%， 后每隔1周增加2%， 直至18%， 然后在每周增加1%直至 22%。从饮用22%酒精开始，以54%酒精1.2 mL每日分3次灌胃，连续8周。A组单纯酒精灌胃，B、C、D组酒精灌胃同时，从饮用54%酒精的第一天起，每天分别以0.3、0.6、1.2 g·kg-1体重剂量予广枣提取物灌胃，每天1次，共8周。E组将益肝灵研磨之后溶于蒸馏水中按100 mg·kg-1的标准给予灌胃，灌胃方法及时间同实验组。F组饮用自来水，灌胃时采用生理盐水，灌胃方法及时间同上。

1.5样品采集与处理各组大鼠实验结束后，称重。10%麻醉剂3 mL·kg-1进行腹腔注射麻醉，取血液离心待用；取出肝脏，称重后，迅速切下二部分，其中一部分肝组织以4% 甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片；另一部分肝组织用于制成10%肝匀浆。

1.6检测指标及方法血清CHO(胆固醇)、TG(甘油三酯)、ALT(丙氨酸转氨酶)、AST(天冬氨酸转氨酶)使用全自动生化分析仪进行检测。肝匀浆SOD(超氧化物歧化酶)采用黄嘌呤氧化酶法测定；GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)采用还原法测定；MDA(丙二醛)采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定。

1.7统计分析采用统计软件SPSS 11.5进行数据处理，不同组间参数比较采用非配对t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2　结　果

2.1一般状况正常对照组大鼠皮毛有光泽，活动、饮食正常，体重持续增长，无死亡现象；模型组大鼠酒精灌胃10 w后有不同程度的精神萎靡，行动不稳，进食量降低，鼠毛凌乱，体质质量下降等表现；各干预组较乙醇模型组有不同程度的改善。7只大鼠死亡，正常对照组未见异常，无死亡。

2.2CAE对ALD大鼠血清指标的影响与正常组比较，乙醇模型组血清中ALT、AST 水平增高，差异极显著(P<0.01 )；与乙醇模型组比，各CAE干预组ALT、AST水平有不同程度降低，其中低剂量组差异有统计学意义(P<0.05)，中、高剂量组及阳性对照组差异极显著(P<0.01)；高剂量组ALT、AST与正常组大鼠比较无显著性差异(表1)。

表1　各组大鼠血清ALT、AST检测情况

注:与正常组比较,○P<0.05,*P<0.01;与乙醇模型组比较,■P<0.05,△P<0.01。

2.3CAE对ALD大鼠血清脂质水平的影响与正常对照组比较，乙醇模型组大鼠血清TG、CHO水平升高，差异极显著(P<0.01)。给药10周后，与模型组比较，阳性对照组及各CAE组TG、CHO水平有不同程度降低，其中CAE低剂量组CHO水平差异有统计学意义(P<0.05)，其它各组TG、CHO水平差异有高度统计学意义(P<0.01)(表2)。

表2　各组大鼠血清TG、CHO 检测情况

注:与正常组比较,○P<0.05,*P<0.01;与乙醇模型组比较,■P<0.05,△P<0.01。

2.4CAE对ALD大鼠肝组织SOD、GSH-Px和MDA的影响由表3可见，与正常组比较, 乙醇模型组SOD、GSH-Px水平降低、MDA水平升高，差异极显著(P<0.01)。各CAE干预组SOD水平均有提高，与模型组比较，差异极显著(P<0.01)；各CAE干预组GSH-Px水平均有提高，与模型组比较，低剂量组差异显著(P<0.05)，中、高剂量组差异极显著(P<0.01)；各CAE干预组MDA水平均有下降，与模型组比较，差异极显著(P<0.01,表3)。

表 3　各组大鼠SOD、GSH-Px、MDA检测情况

注: 与正常组比较,○P<0.05,*P<0.01;与乙醇模型组比较,■P<0.05,△P<0.01。

3　讨　论

近年来我国酒精性肝病的发病率逐年升高，其发生机制较复杂，各种因素相互作用导致疾病发生发展[4]。关于酒精性肝病发病机制的学说有很多，目前普遍认同的可能发病机制是：乙醇及其代谢产物的直接毒性作用、氧化应激反应及脂质过氧化、Kupfer细胞的激活与内毒素、细胞因子及炎性介质、嗜肝病毒、性别与遗传多态性、病毒的叠加作用等[5-7]。总之，目前尚未完全阐明一个具体的机制[8]。

研究报道，广枣中的总黄酮被多数学者认为是其有效成分，具有多种生理活性作用。广枣总黄酮在体外有很强的清除和抑制自由基作用[9]。对ADR作用后大鼠心肝组织，广枣总黄酮具有降低MDA水平，提高抗氧化酶(GSH-Px、SOD)活性，说明广枣总黄酮具有清除自由基、抑制过氧化作用[10]。本研究结果显示，对酒精性肝损伤大鼠，CAE能降低血清ALT、AST水平，减少肝内TG、CHO沉积，提示CAE具有减轻酒精性肝损伤的作用；通过检测SOD、GSH-Px和MDA活性发现，应用CAE后肝组织中SOD含量和GSH-Px水平较模型组均升高，MDA含量明显下降，说明广枣提取物起到了保护肝细胞免受自由基损伤的作用。本研究为广枣的合理开发利用提供了一定依据。

[1]中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组．酒精性肝病诊疗指南[J]．中华肝脏病杂志，2006，14：164-166．

[2]殷晓轩，尹常健．酒精性肝病中医用药规律探讨[J]．中国实验方剂学杂志，2011，17(12)：285．

[3]刘霞，李伟，范小娜，等．响应面法优化广枣总黄酮的超声提取工艺研究[J]．湖北农业科学，2015，54(9)：2210-2213．

[4]Schwartz J M，Reinus J F．Prevalence and natural history of alcoholic liver disease[J]．Clin Liver Dis，2012，16(4)：659-66．

[5]杨燕，鲁晓岚．酒精性肝病发病机制研究的最新进展[J]．胃肠病学和肝病学杂志，2014，23(9)：990-993．

[6]Wu D，Cederbaum A．Alcohol oxidative stress and free radical damage[J]．Alcohol Res Health，2003，27：277-284．

[7]时静华，潘桂兰，陈晓东．酒精氧化应激和自由基损伤[J]．包头医学院学报，2007(3)：336．

[8]孙丽娜，周俊英．内质网应激在酒精性肝病细胞凋亡中的作用[J]．世界华人消化杂志，2010，18(1)：70．

[9]李宝山， 巴根那，张昕原，等．广枣总黄酮对自由基的清除和抑制作用[J]．内蒙古蒙医学院学报，1998，10(1)：1．

[10]巴根那，邰文全，王志民，等．广枣总黄酮对阿霉素引起大白鼠心肝过氧化损伤的保护作用[J]．内蒙古民族大学学报，2002，17(3)：267-269．

Protective Effect of Choerospondias Axillaries Extracts on Alcoholic Liver Diseases in Rats

LIUXia,LIWei,DENGChun-fang,FANXiao-na

(GannanMedicalUniversity,GanzhouJiangxi341000)

Objective: To study the therapeutic effects of Choerospondias Axillaries extracts(CAE)on rats with alcoholic liver diseases. Methods: The rats were randomly divided in to 6 groups: model group, low-dose group, middle-dose group, high-dose group, positive control group and normal group. The model of rats with alcoholic liver disease was established by intragastric injection with small quantity of gradually increasing concentrations of alcohol into the rats for several times a day, and some of them were treated with CAE. The rats were sacrificed after 8 weeks and some enzyme levels were examined. Results: The levels of serum ALT, AST, TG, CHO and hepatic tissue content of MDA in CAE treated groups were significantly decreased (P<0.05 or 0.01), while the levels of SOD and GSH-Px were significantly increased in comparison with those in the model group (P<0.05 or 0.01). Conclusion: CAE possessed certain protective effect on alcoholic liver diseases.

Choerospondias Axillaries Extracts (CAE); Alcoholic liver disease; Rats

江西省教育厅科技项目(GJJ13681)；赣南医学院科研课题(YB201210)；江西省卫生厅中医药科研课题(2013A097)

范小娜，女，教授，硕士生导师，研究方向为天然药物化学。E-mail:gylx529@126.com

R285.5

A

1001-5779(2016)03-0355-03

10.3969/j.issn.1001-5779.2016.03.006

2015-10-22)(责任编辑：刘仰斌)