蒸发光散射测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量探究

黄长煌

蒸发光散射测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量探究

黄长煌

目的 探究蒸发光散射（ELSD）测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙含量的可行性。方法 色谱柱：Agilent Hypersil BDS-C18（4.0 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水-二乙胺（65：35：0.03），ELSD检测器对浙贝母中贝母素甲、贝母素乙含量进行测定。结果来自金华磐安三批次样品贝母素甲平均百分含量为（0.124±0.07）%、贝母素乙平均百分含量为（0.061±0.004）%。结论 ELSD测定浙贝母中贝母素甲和贝母素乙，方法准确可靠，测定较为快捷。

蒸发光散射；贝母素甲；贝母素乙；生物碱

浙贝母为百合科贝母属植物浙贝母的干燥鳞茎［1-2］，其主要有效成分为生物碱，其中以贝母素甲和贝母素乙为其主要活性成分［3-4］。由于浙贝母中生物碱为甾体生物碱，紫外吸收较弱，故其含量测定多以的薄层色谱扫描、柱前衍生化HPLC、气相等方法进行测定，但方法较复杂，耗时较长，不利于本品的快速鉴定［5-6］。本文由此出发，考察ELSD方法测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的可行性。

1　仪器与试药

岛津LC-20A型高效液相色谱仪；Alltech ELSD 3300蒸发光散射检测器；对照品贝母素甲、贝母素乙购自中国食品药品检验研究所；甲醇、乙腈为色谱醇；浙贝母饮片购自金华磐安。

2　方法

2.1色谱条件

结合文献［7］及早期预实验，选择色谱柱：Agilent Hypersil BDS-C18（4.0 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水-二乙胺（65：35：0.03），再以以信噪比（S/N）为参考，对ELSD载气流速及漂移管温度进行优选，最终确定漂移管温度为60℃，载气流速为2.0 L/min时信噪比最佳。此条件下，贝母素甲、贝母素乙理论塔板数均大于2 000，且两成分分离度大于1.5。

2.2溶液的制备

2.2.1供试品溶液的制备 浙贝母样品粉碎后，过四号筛，精密称取粉末2 g，加4 ml试液浸润1 h，精密加入4：1混合的三氯甲烷-甲醇溶液，称重后80℃ 水浴回流2 h，放冷置室温后，称重，补足失重，滤过，取10 ml续滤液，蒸发皿中挥干液体后，加甲醇溶解残渣，并转移至2 ml容量瓶中，甲醇加至刻度，摇匀后离心，取上清液即为供试品。

2.2.2对照品溶液的制备 采用十万分位天平称取贝母素甲10.23 mg、贝母素乙10.49 mg于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解至澄清后，稀释至刻度，摇匀即得混批对照品溶液。

2.3方法学考察

取对照品溶液，按照药典方法学考察部分，分别进行精密度、稳定性考察，结果显示：精密度：贝母素甲RSD=1.6%，贝母素乙RSD=1.8%；稳定性：对照品在24 h内，贝母素甲RSD=1.3%，贝母素乙RSD=1.2%；选择浙贝母样品6份，精密称定后，根据供试品“2.2.1”项操作制备溶液，结合药典方法学考察步骤，进行重复性、回收率考察，重复性（n=6）结果显示：贝母素甲含量为0.124%，RSD=1.4%，贝母素乙含量为0.056%，RSD=1.7%，回收率：贝母素甲平均回收率为100.46%，RSD 1.43%，贝母素乙平均回收率为101.02%，RSD 1.72%，结果显示本法准确可靠，能用于两成分含量测定。

2.4线性关系考察

对照品溶液按照不同浓度稀释得到系列标准溶液，进样10 µl，建立标准曲线，得到贝母素甲浓度在0.020 5 mg/ml～0.511 5 mg/ml，贝母素乙浓度在0.021 0 mg/ml～0.524 5 mg/ml范围内与峰面积存在良好的线性关系。

2.5样品中贝母素甲、贝母素乙含量测定

取浙贝母样品，按照“2.2.1”项操作制备溶液，过0.2 µm滤膜后精密吸取10 µl注入液相色谱中，在“2.1项”色谱条件下进行样品测定，并结合标准曲线计算浓度。

3　结果

来自金华磐安三批次样品贝母素甲平均百分含量为（0.124± 0.07）%、贝母素乙平均百分含量为（0.061±0.004）%，见表1。

表1　浙贝母中贝母素甲、贝母素乙百分含量（%）

4　讨论

贝母素甲、贝母素乙均为浙贝母主要有效成分，但由于两者本身不具有生色基团，以至常规的紫外检测方式不能很好的测定两者含量，蒸发光散射检测器是通过将进样溶液雾化后，蒸发掉溶剂，然后利用不挥发性溶质颗粒的光散射作用进行测定的方法［8］，适用性较广。本组研究结果显示，在ELSD条件下，贝母素甲、贝母素乙分离度良好，且检测精密度、准确性、重复性均较高。

综上所述，采用ELSD方式测定浙贝母中贝母素甲、贝母素乙方法准确、可靠，可以考虑作为浙贝母的质量控制方法。

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Determination of the Contents of Peimine A and Peimine B in Fritillaria Thunbergii by ELSD

HUANG Changhuang Department of Pharmacy，Minqing Prevention Psychiatric Hospital，Fuzhou Fujian 350800，China

Objective To explore a feasibility method for determination of peimine A and peimine B. Methods HPLC were carried out with conditions：column：agilent hypersil BDS-C18（4.0 mm×250 mm，5μm），mobile phase：acetonitrile-water-diethylamine（65：35：0.03），ELSD to determinate of peimine，peiminine. Results The average percentages of peimine A from three batches of Jinhua were （0.124 ± 0.07）% and peiminine B were（0.061 ± 0.004）%. Conclusion ELSD for determination of peimine，peiminine is a accurate and reliable and rapid method.

ELSD，Peimine A，Peimine B，Alkaloids

R284

A

1674-9316（2016）18-0139-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2016.18.092

福建省闽清精神病防治院药剂科，福建 福州 350800