印度谷螟18SrDNA的克隆及定量PCR方法的建立

唐培安 吴海晶 薛 昊 孔德英 宋 伟

印度谷螟18SrDNA的克隆及定量PCR方法的建立

唐培安1吴海晶1薛 昊1孔德英2宋 伟1

（南京财经大学食品科学与工程学院；江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心1，南京 210023）
（重庆出入境检验检疫局2，重庆 400020）

利用分子生物学方法从印度谷螟幼虫体内克隆获得了18S rDNA的基因全长序列（1 888 bp，GenBank登录号为KJ836335）。利用邻位连接法（neighbor-joining）分别构建了基于18S rDNA基因全长、保守序列II以及多变区的系统发育树，比较了与其他已知昆虫18SrDNA基因的同源性和遗传距离。与其他序列的系统发育树相比，其全长序列的系统发育树更能反映鳞翅目昆虫的亲缘关系，印度谷螟与大蜡螟的亲缘关系最近。此外，建立了以18SrDNA为内参基因的实时荧光定量PCR方法。

印度谷螟 18SrDNA 系统发育树 实时荧光定量PCR

核糖体RNA（ribosomal RNA，rRNA）是生物体中核糖核酸（RNA）的一类，为核糖体的主要组成部分，其功能为提供tRNA与mRNA密码子对应的环境，从而完成蛋白质的合成［1］。核糖体由1个大亚基和1个小亚基构成，在真核生物核糖体的小亚基中含有1个沉降系数为18S的RNA，该RNA由染色体基因编码，称为18SrDNA 基因，长度约为1 800 bp［2］。在生物的进化过程中非常保守，是研究生物高级分类群系统演化的难得工具之一［3］。另外，18SrDNA基因在生物体内的表达水平相对稳定，可作为内参基因广泛应用于基因表达研究中，是应用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR）技术进行基因的相对定量检测时常用的内参基因之一［4-7］。

印度谷螟Plodia interpunctella （Hübener）隶属于鳞翅目（Lepidoptera）螟蛾科（Pyralidae），是一种世界性储粮害虫，我国华北及东北地区受其危害尤其严重。……