养肝益水颗粒对自发性高血压大鼠肾脏保护作用的影响

张叶祥，周宜轩，胡业彬，何 佳

养肝益水颗粒对自发性高血压大鼠肾脏保护作用的影响

张叶祥，周宜轩，胡业彬，何 佳

目的 观察养肝益水颗粒对自发性高血压大鼠(SHR)血压、尿微量白蛋白(尿MA)、肾脏组织中内皮素、一氧化氮、血管性假性血友病因子水平的影响。方法 将SHR大鼠随机分为中药组(养肝益水颗粒)、西药组(卡托普利组)、模型组，每组8只。另外选取Wistar-Kyoto大鼠8只作为正常对照组。灌胃6周后检测其血压、尿MA、肾脏组织中内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)、血管性假性血友病因子(vWF)的表达。结果 中药组能够降低SHR大鼠血压进行性增高的趋势；治疗后尿MA低于模型组(P<0.01)；中药组肾脏组织中ET-1、vWF的表达较模型组显著下降，有统计学意义(P<0.01)；而NO水平较模型组显著升高(P<0.01)。结论 中药养肝益水颗粒可以减弱SHR大鼠血压增高趋势，持久降低血压，减少SHR大鼠尿MA的水平，降低肾组织中ET-1、vWF的表达，升高NO的水平，从而起到保护高血压肾损害的作用。

自发性高血压大鼠；养肝益水颗粒；血压；尿微量白蛋白；内皮素；一氧化氮；血管性假性血友病因子

高血压(essential hypertension，EH)是临床常见病、多发病，影响重要脏器的功能，尤其高血压肾损害渐进发展直至发生尿毒症，近年来其发生率逐年增高，为医学界研究的重要课题[1-2]。而高血压早期肾损害起病隐匿，一旦出现临床症状，损害就会进行性加重，直至出现终末期肾病。因而，早诊断、早干预具有重要意义。高血压直接导致病人血管内皮功能紊乱，血管内皮细胞损伤；血管内皮损伤是“高血压-内皮-心血管事件”链的始动因子和载体。因此，除降压之外的另一个治疗新靶点是对高血压病人血管内皮功能的干预，寻找具有内皮细胞保护作用的药物成为治疗的趋势[3]。本实验观察养肝益水颗粒(我院院内制剂)对高血压病人血管内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)、血浆血管性假性血友病因子(vWF)的干预，进一步评估其对高血压病人早期肾损害的保护作用。

1 材料与方法

1.1 一般材料 选取SHR大鼠24只，12周龄，体重(182±18.5)g，雌雄各半。选取12周龄、雌雄各半的Wistar-Kyoto(WKY)大鼠8只，体重(195±18.9) g，购自中国医学科学院实验动物研究所。养肝益水颗粒(由黄芪、菟丝子、益母草、芡实、怀牛膝、丹参等组成)，由安徽省中医院制剂中心提供；卡托普利由上海三维制药有限公司生产；生理盐水由安徽丰原药业生产；尿MA试剂盒购自上海太阳生物公司；ET-1试剂盒购自北京华英生物技术研究所；NO、vWF试剂盒购自南京建成生物有限公司；BP-6动物血压测量仪购自成都泰盟科技有限公司。

1.2 方法 将24只SHR大鼠随机分为中药组(养肝益水颗粒)、西药组(卡托普利组)、模型组，每组8只；WKY大鼠8只作为正常对照组。中药组(养肝益水颗粒)以相当于成人每天口服剂量的5倍量即15.5 g/(kg·d)生药的混悬液灌胃；西药组(卡托普利组)以相当于成人剂量的两倍即以10.2 mg/(kg·d)混悬液灌胃；模型组、正常对照组均每日灌服生理盐水1次；灌服量均为2 mL，共6周。饲养温度16℃～24℃，采用12 h光照。实验期间给予标准大鼠饲料，购自中国医学科学院实验动物研究所。

1.3 检测方法 每天灌胃前，先用红外线照射鼠尾动脉15 min，定时测量大鼠的收缩压(SBP)，连续测量3天，取平均值。给药后1周、2周、4周、6周时分别以同样方法测量鼠尾动脉收缩压。于给药前后搜集大鼠24 h尿，留取2 mL，保存温度-20℃，待统一检测。ET-1、NO、vWF水平：麻醉后从大鼠颈部动脉抽取2 mL抗凝血，迅速以2 000 r/min离心10 min，取上清于子弹头中备测。

2 结 果

2.1 生存状况 24只12周龄SHR大鼠以及8只12周龄WKY大鼠。随机分为中药组(养肝益水颗粒)、西药组(卡托普利组)、模型组各8只，正常对照组8只。灌胃中药组、西药组各死亡1只，可能误吸死亡。实际获得30只大鼠实验数据。治疗后各中药组、西药组SHR大鼠毛色及精神状况均较治疗前佳，活动较多；模型组精神状况欠佳，活动量少；WKY大鼠精神状态较好，无明显变化。

2.2 各组大鼠血压比较 治疗前SHR大鼠血压显著高于WKY大鼠(P<0.01)，模型组大鼠的血压呈进行性增高的趋势，而中药组、西药组均能降低血压进行性增高的趋势。12周龄SHR大鼠的血压仍然处于自发性升高的阶段。西药组降压效果最好，但与中药组在降压的幅度上无统计学意义(P>0.05)。中药组在治疗前后血压显著下降(P<0.05)，在第6周时与模型组比较有统计学意义(P<0.01)。详见表1。

表1 各组大鼠血压比较(±s) mmHg

2.3 各组大鼠尿MA比较 治疗前后各组SHR大鼠尿MA均高于正常组(P<0.01)；且模型组与正常对照组比较有统计学意义(P<0.01)；中、西药组与模型组比较有统计学意义(P<0.01)，但中药组与西药组比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见表2。

表2 各组大鼠尿MA的比较(±s) mg/L

2.4 各组大鼠血管内皮NO、ET-1、vWF因子水平的比较 治疗后中药组、西药组血管内皮ET-1、vWF水平显著低于模型组(P<0.01)，但组间比较无统计学意义(P>0.05)，两组与正常对照组相近(P>0.05)；NO水平显著高于模型组(P<0.01)，组间无统计学意义(P>0.05)，两组与正常对照组比较无统计学意义(P>0.05)。详见表3。

表3 各组大鼠血管内皮NO、ET-1、vWF因子水平比较(±s)

3 讨 论

高血压可导致重要脏器，如心、脑、肾等靶器官的进行性损害，直至其发生功能衰竭。高血压早期肾损害的机制：随着高血压程度加剧、病程加长，高血压导致肾小球内高压力、高灌注、高滤过率，肾小球毛细血管损伤，通透性增加，使微量白蛋白尿丢失增加，发生临床微量白蛋白尿。此时，如果严格控制血压，尚可稳定，甚至逆转早期肾损害的加剧趋势。

中医学根据高血压的临床表现，多归属于“眩晕”、“头痛”等范畴。但对于原发性高血压早期肾损害的认识无明确记载。我院名老中医周宜轩教授认为[4]，高血压早期肾损害的主要病机是：肝肾阴虚兼血瘀。“乙癸同源”，肝肾阴虚，“肾藏精”功能失调，精微外漏，故出现微量白蛋白尿；阴液不足，加之“久病必瘀”，瘀血内生。因此，血脉瘀阻是高血压发展的必然转归。周宜轩教授采用补肝肾、活血脉、固精微大法，创制养肝益水颗粒，临床疗效显著。先前的临床研究表明[5]，在西医常规降压药物基础上，加用养肝益水颗粒可以更好地控制血压，改善原发性高血压病人血管内皮细胞功能，这种作用独立于降压之外，可能与改善原发性高血压病人炎性细胞因子有关。蔡曼曼等[6]通过动物实验观察到，养肝益水颗粒干预SHR大鼠肾脏组织转化生长因子-β、磷脂酰肌醇-3和蛋白激酶B进而发挥其对高血压早期肾损害的保护作用。

高血压是心血管疾病的主要危险因素之一，降低血压对于减少心脑血管事件具有重要意义。内皮功能障碍是介导高血压血管负面影响的重要机制之一[7]。血管内皮细胞受损时，vWF释放增多。王晓春等[8]发现高血压病人的vWF明显高于正常组。ET-1为强大的血管内皮收缩因子，NO为内皮依赖性舒张因子。本研究表明，治疗6周后养肝益水组血压大鼠明显下降，差异有统计学意义，可以降低大鼠血压进行性增高的趋势。治疗后养肝益水颗粒组血管内皮ET-1、vWF水平显著低于模型组(P<0.01)，NO水平显著高于模型组(P<0.01)。因此，养肝益水颗粒通过对血管内皮细胞因子的干预，从而发挥其保护血管内皮细胞，降低血压，保护肾损害的作用。

[1] 陆再英，钟南山．内科学[M]．北京：人民卫生出版社，2013：251．

[2] 张琪，徐瑞，范贵娟.通心络防治高血压肾损害研究[J].长春中医药大学学报，2016，32(2)：277-279.

[3] Kcdziora-Komatowska K，Czucxzeko J，Pawluk H，et al.The markers of oxidative stress and activity of the antioxidant system in the blood of elderly patients with essential arterial hypertension[J].Cell Mol Biol Lett，2004，9(4A)：635-641.

[4] 张叶祥.周宜轩用养肝益水颗粒治疗原发性高血压早期肾损害经验探析[J].中西医结合心脑血管病杂志，2013，12(11)：1520-1521.

[5] 张叶祥.养肝益水颗粒对高血压患者尿微量白蛋白及血管内皮功能影响的临床研究[J ].新中医，2013，45(11)：13-15.

[6] 蔡曼曼，龙子江，周宜轩，等.养肝益水颗粒对自发性高血压大鼠肾脏组织TGF-β、PI3K和PKB的影响[J].药物评价研究，2013，36(4)：257-260.

[7] 毛文星，李冰，王志梅，等.氧化应激、血管内皮功能障碍与高血压[J].现代生物医学进展，2014，14(19)：3770-3774.

[8] 王晓春，葛庆峰，王蔓莉.高血压前期患者血管内皮功能的变化[J].山东医药，2011，51(32)：54-55.

(本文编辑王雅洁)

Renal Protective Effect of Yanggan Yishui Granule in Spontaneously Hypertensive Rats

Zhang Yexiang，Zhou Yixuan，Hu Yebin，He Jia

First Affiliated Hospital of Anhui University of Trdiditional Chinese Medicine，Hefei 230031，Anhui，China

Objective To investigate the effect of Yanggan Yishui granule (YYG) on the levels of blood pressure，urinary microalbuminuria (MA) in urine， kidney tissue endothelin-1 (ET-1)， nitricoxide (NO)， von Willebrand factor(vWF) in spontaneously hypertensive rats (SHR) ， and its mechanism of renal protection of SHR. Methods SHR were randomly divided into YYG group， captopril group， model group，8 each group.Eight Wistar-Kyoto rats were as normal control group.After 6 weeks，the blood pressure，urinary MA， ET-1 in the kidney tissue， the expression of nitric oxide (NO) and vWF were tested. Results The blood pressure trend of progressive increase reduced in YYG group.Urinary MA was lower than that in model group after treatment (P<. 01).Compared with model group， the expressions of kidney tissue ET-1，vWF decreased significantly in YYG group(P<0.01).NO concentration significantly increased compared with model group (P< 0.01). Conclusion YYG has renal protective effect，which can reduce increased blood pressure， lower blood pressure， reduce the levels of urine MA， decrease the expressions of ET-1 and vWF in renal tissue， increase the levels of NO in SHR.

spontaneous hypertension rats；Yanggan Yishui granule；blood pressure；urinary microalbuminuria；endothelin； nitricoxide；von Willebrand factor

安徽中医药大学基金项目(No.2013qn026)

安徽中医药大学第一附属医院(合肥 230031)，E-mail：zhangyx1234@126.com

引用信息： 张叶祥，周宜轩，胡业彬，等.养肝益水颗粒对自发性高血压大鼠肾脏保护作用的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志，2016，14(24)：2891-2893.

R544.1 R289.5

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2016.24.012

1672-1349(2016)24-2891-03

2016-08-06)