抗VEGF单克隆抗体生物学活性分析方法的建立及其应用

莫琳，周冬梅，徐军，孙文正，杨彬

抗VEGF单克隆抗体生物学活性分析方法的建立及其应用

莫琳，周冬梅，徐军，孙文正，杨彬

目的建立抗 VEGF 单克隆抗体生物学活性分析方法，并对实验条件进行优化及方法学验证。

方法从新生儿脐带分离获取人脐静脉内皮细胞（HUVEC），使用第 4 ～ 6 代细胞进行活性检测。HUVEC接种 96 孔板于 CO2培养箱培养 4 h 后加入不同浓度的抗 VEGF 单克隆抗体——VEGF165混合物孵育 48 h，加入CCK8 显色 4 h，酶标仪读取各孔 OD450吸光值，采用四参数拟合绘制标准曲线，计算参比品和样品的 IC50值，获取样品的相对活性。

结果该方法专属性强，仅在抗 VEGF 单克隆抗体上呈现相应的剂量关系曲线，标准曲线拟合度 r2＞ 0.99，精密度样品相对活性 RSD ＜ 20%，方法在 50% ～ 200% 活性范围内具有良好的准确性。用该方法对两个候选药分别进行 6 次重复性检测，候选药相对活性值分别为（95.80 ± 3.29）%，（101.10 ± 3.81）%。

结论本研究建立的 HUVEC 增殖抑制法特异性高、重复性好，并具有良好的准确性及精密度，可用于抗 VEGF 单克隆抗体生物学活性的评估。

人脐静脉内皮细胞； 血管内皮生长因子类；抗 VEGF 单克隆抗体

肿瘤新生血管的生成是肿瘤与其周围环境中血管生长因子相互作用的结果[1]，如果没有新生血管的生成，原发肿瘤生长不超过 2 mm，肿瘤转移将无法实现[2]。血管生成被认为是癌症的十大特征之一[3]。许多因素参与血管的生成与发展，其中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是血管生成的重要调控因子，其在肿瘤组织中高水平表达。原位杂交研究表明，多种人实体肿瘤中均存在 VEGF mRNA 的表达[4]。……